• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권2호
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• pp.87-94
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• 1988

Kim et at.(1986)은 유구낭미충 낭액을 감작시켜 만든 단세포군 항체를 CNBr활성화 Sepharose 4B에 연결시켜 친화성 크로마토그래피를 실시하고 낭액에서 A-항원을 분리한 바 있다. 이 연구는 그 항원 단백질의 생화학적 성상을 관찰한 것이다. Disc-PAGE에 의해 4.5~10% 폴리아크릴아마이드 젤에서 나타내는 Rf간을 기초로 분자량을 측정한 결과 A 항원의 분자량은 150,000 dalton이었다. A-항원은 SDS-PAGE에서 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 polypeptide로 분획이 구별되었다. 10% 2-mcrcaptoethanol로 처리하지 않거나 $95^{\circ}C$에서 5분간 처리하지 않은 A-항원의 SDS-PAGE에서는 7,000 dalton의 polypeptide가 분리되지 않았다. A-항원의 등전점(PI)은 pH6.8이었다. 낭액항원의 각 분획에 반응하는 항체를 갖는 환자혈청으로 A-항원을 SDS-PAGE/EITB한 바 환자혈청은 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 부위에서만 반응하였다. 낭액 단백질의 약70%를 차지하는 A-항원은 면역학적으로 내열성을 가졌으며 포충(hydatid cyst) 낭액 항원중 Oriol et at.(1971)의 "Antigen B"와 생화학적 성상이 비슷한 단백질이었다.

• 대한수의학회지
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• 제40권3호
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• pp.533-541
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• 2000

Biochemical and genetic analysis were carried out to investigate the potential recovery of pathogenecity or related mutations of Brucella abortus RB51 vaccine strains. RB51 strains were recovered from commercial vaccines, including related seed stocks from private companies in Republic of Korea, strain from USA, a reference strain from C university and a field isolate (Daehungjin) from aborted dairy cow after RB51 vaccination were compared with two identified virulent wild strains (S2308 and a field strain isolated from dairy cow in Korea) at the same conditions. All the strains examined, except identified pathogenic strains, revealed the identical characteristics to the original RB51 in biochemical properties, antigen and bacteriophage typing. Outer membrane protein (OMP) profiles from strains of RB51 showed the same patterns with standard RB51 in SDS-PAGE. In addition, Western blotting with the brucella specific monoclonal antibody also indicated that all the vaccine strains were completely deficient in their LPS compared to the pathogenic Br abortus strains. The differences in DNA structures among strains were also possible to detect after PCR. All vaccine strains, except S19, S1119-3, S1075, S544 and Br suis, were amplified a 178bp DNA fragment of eri-gene, and 364bp of IS711 elements. In contrast, 498bp DNA product was only found with Br abortus. Overall evidences in the present study confirmed that the RB51 strains for vaccine production in Korea did not originated from the phenomena of possible recovery of pathogenicity or related to any potential mutation event at all.

• Journal of Chest Surgery
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• 제36권9호
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• pp.666-673
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• 2003

폐암의 주된 원인으로 알려진 흡연은 그 악성세포 발현기전이 아직 정확히 규명된 바 없다. 이에 저자들은 흡연에 의한 발암성의 지표로 흡연 중에 특이적으로 존재하는 강력한 발암물질인 NNK(4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone)를 이용하여 흡연에 따른 폐암의 발생과 그 Protein kinase C (PKC) isoform과 관련된 기전에 관한 연구를 시도하였다. 대상 및 방법: 인체 상피세포를 NNK에 노출시킨 후 saturation density, soft agar colony formation, cell aggregation 및 foci의 출현 등의 양상을 파악하여 세포 발암성 여부를 관찰하였으며 NNK를 15분간 노출시킨 후 PKC의 변화는 세포 내 PKC isoform의 양을 cytosolic fraction과 membrane fraction으로 분리하여 측정하여 분석하였다. 결과: NNK 투여군에서 saturation density, soft agar colony formation, cell aggregation 및 foci의 출현 시기 등의 세포 발암성을 뚜렷이 나타내었으며 PKC isoform분석의 경우 PKC-$\alpha$의 membrane fraction의 뚜렷한 증가를 보였으며 이러한 활성은 용량-의존적인 형태를 유지하였다. PKC-$\varepsilon$은 NNK 처리 시 용량-의존적으로 cytosol fraction의 감소 및 membrane fraction의 증가를 뚜렷하게 보였고 NNK에 의한 PKC-λ의 변화는 감지되지 않았다. 결론: 본 연구는 화학적 발암물질인 NNK가 인체발암화에 관여함을 재차 확인하면서 초기 과정에 관여하는 PKC isoform의 변화를 분석함으로써 total PKC활성이 아닌 isoform 각각에 대한 변화를 확인하였다는 점에서 앞으로 인체상피세포 기원의 폐암 생성 기전 연구에 기여할 것으로 생각한다.

• Journal of Microbiology
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• 제42권1호
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• pp.25-31
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• 2004

Sf9 cells have obvious advantages for the conventional production technology of vaccine. They are useful tools for high concentration and large-scale cultures. Sf9 cells were grown to maximal concentration, 8${\times}$l0$\^$6/ cells/$m\ell$ in a 500$m\ell$ spinner flask, with a doubling time at the exponentially growing phase of 24.5 hours, using serum-free media. To explore the ability of Sf9 cells to be infected by the Japanese encephalitis (JE) virus Beijing-l strain, Sf9 cells were infected with the virus. By 4-5 days post-infection, 10-15 % of the Sf9 cells showed cytopathic effect (CPE), from granularity to the formation of syncytia and multinucleated giant cells continuously observed over a period of 35 days. Positive fluorescent reactions were detected in 30-40% of cells infected with the JE virus Beijing-l strain, and the uninfected Sf9 cells were completely negative. Virus particles, propagated in Sf9 and Vero cells, were concentrated by sedimentation on 40% trehalose cushions by ultracentrifugation, and showed identical patterns of viral morphogenesis. Complete virus particles, 40 to 50 nm in diameter, were observed, and JE virus envelope (E) proteins, at 53 kDa, were found in the western blot analysis to the anti-JE virus E protein monoclonal antibody and reacted as a magenta band in the same position to the glycoprotein staining. To evaluate whether the infectious virus was produced in Sf9 cells inoculated with the JE virus Beijing-l stain, Sf9 cells were inoculated with the virus, and sample harvested every 5 days. The titers of the JE virus Beijing-l strain rose from 1.0${\times}$l0$\^$5/ to 1.5${\times}$l0$\^$6/ pfu/$m\ell$. The infected Sf9 cells could be subcultured in serum-free medium, with no change in the plaque sizes formed by the JE virus Beijing-l strain in the plaque assay. It is suggested that the ability of the JE virus Beijing-l strain to infect Sf9 cells in serum-free media will provide a useful insect cell system, where the JE virus replication, cytopathogenicity and vaccine immunogen can be studied.

• 대한의생명과학회지
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• 제1권1호
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• pp.19-25
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• 1995

소는 인간에게 고기와 우유를 제공하는 영양자원으로서 뿐만 아니라 노동력을 제공하는 중요한 가축 동물 중의 하나이다. 또한 사람의 질병을 규명하고 예방 및 치료의 실험적 도구로서도 많이 이용되고 있으나, 대동물이라는 점과 경제적인 이유로서 일반적인 응용과 실험적 적용에 어려움이 되어왔다. 저자들은 이와 같은 사정을 감안하여 실험적 기초 자료를 얻기 위하여, 한우를 대상으로 말초혈액상과 특히 림프아군의 특성을 알아본 결과 다음과 같이 일부 결과를 얻었다. 즉, 한우 22마리(암컷 12마리, 숫컷 10마리)의 말초혈액을 채혈하여 림프구 표면항원의 특성을 단클론항체와 반응시키고 flow cytometry로 측정한 결과 CD2는 숫컷에서 53%, 암컷에서 54%의 반응을 보였고, CD4는 숫컷에서 30% 암컷에서 32%의 반응을 보였으며, CD8에서는 숫컷에서 13%, 암컷에서 13%의 반응을 보였다. 그리고 말초혈액상은 RBC가 숫컷 7.20$\times10^6{mm}^3$, 암컷 6.35$\times10^6{mm}^3$이었고 WBC는 숫컷 8.09$\times10^3{mm}^3$, 암컷 7.09$\times10^3{mm}^3$었으며 leukocyte differential counts 에서는 lymphocytes, Neutrophils, Eosinophils의 순으로 높은 성적을 보였다.

• 대한골관절종양학회지
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• 제15권2호
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• pp.130-137
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• 2009

목적: STAT3는 주요 세포 진행과정을 조절하는 암유전자로, 활성화되면 여러 악성종양의 생물학적, 임상적 특징과 연관된다고 알려져 있고, 한편 배아줄기세포와 연관된 유전자이기도 하다. 본 연구에서는 연골종양의 발생에 STAT3 활성화가 관여하는지 살펴보았다. 대상 및 방법: 총 33예의 각종 양성 및 악성 연골종양에서 STAT3 활성화를 살펴보기 위해 활성화된 $pSTAT3^{tyr705}$에 특이한 단클론성 항체를 이용한 면역조직화학법을 시행하였다. 결과: 통상적인 연골육종 17예 중, 조직학적 등급 3의 연골육종은 3예(50%)에서 pSTAT3에 양성이었고, 등급 1 및 2 연골육종은 모두 음성이었다. 즉 pSTAT3 양성도는 조직학적 등급과 통계학적으로 유의한 상관관계(p=0.0432)를 나타내었다. 또한 투명세포 연골육종 2예(50%)도 pSTAT3에 양성이었다. 내연골종, 연골모세포종, 연골점액양섬유종 등 12예의 양성 연골종양 중 6예(50%)에서 pSTAT3가 관찰되었다. 결론: STAT3 활성화는 통상적인 연골육종 중 고도의 조직학적 분화도가 나쁜 등급에서 주로 발견된다. 배아줄기세포 표지자인 STAT3가 양성 및 악성 연골종양 일부에서 활성화되는 것으로 미루어보아 연골 기원 종양에서도 악성종양의 줄기세포 가설을 제안할 수 있다.

• Journal of Chest Surgery
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• 제31권10호
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• pp.924-927
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• 1998

연구배경 : 심근의 허혈 또는 재관류에 의한 세포사에는 괴사 이외에 세포고사가 존재함이 알려져 있다. Bcl-2 단백은 세포질에 존재하는 단백으로 세포고사를 억제하는 기능을 하며 정상심근에서는 발현되지 않으나 심근경색의 급성기에서 발현됨이 보고되어 있다. 본 연구는 가토 허혈-재관류 심근에서 Bcl-2 단백의 발현 여부와 재관류의 시간에 따른 발현의 변화를 알아보고자 하였다. 방법: 평균 무게가 2.9Kg(1.5-4.8Kg)인 가토 39마리를 이용하였다. 허혈-재관류 모델의 각 실험동물에서 좌전하행지를 30분간 결찰한 다음 1, 4, 8, 12, 24시간, 3, 7일 동안 재관류시켰다. 이후 즉시 실험동물을 희생시킨 다음 심장을 적출하여 심근조직을 얻고 10% buffered formalin에 고정하였다. Bcl-2 단백의 발현은 파라핀에 포매된 조직에서 단일클론항체를 이용한 면역조직화학적 염색으로 확인하였다. 결과: 허혈-재관류 심근 중 12, 24시간, 3일 재관류군에서 Bcl-2 단백의 발현을 관찰할 수 있었으며, 특히 24시간 재관류 심근에서 잘 관찰되었다. Bcl-2 양성염색의 심근세포는 위험부위의 구제심근에서 관찰되었다. 결론: Bcl-2 단백은 심근의 허혈-재관류에서 급성기의 비교적 후기에 발현되며, 이는 재관류 초기에서 보다는 후기에서 세포고사를 억제하는데 일부 역할을 할 것으로 사료된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제53권5호
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• pp.569-576
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• 2002

연구배경 : C pneumoniae는 상하기도 감염을 일으키는 주요균으로, 균의 임상검체로부터의 분리는 균이 가진 몇가지 특성으로 매우 어려운 것으로 보고되었다. 최근 연구자들은 급성 인두염으로 내원한 22세 여자환자에서 채취한 비인두 스왑으로부터 국내 최초로 C pneumoniae를 분리, 배양하는데 성공하였다. 방 법 : Hep-2 세포주를 24시간 배양한 뒤, 환자로부터 얻은 비인두 스왑 검체를 넣어, 900g에서 한시간 동안 원심분리한 뒤, 72시간 동안 배양하였다. 본 환자의 검체는 8대째 계대배양에서 처음으로 봉입체가 관찰되었고, 이를 통정하기 위해 종특이 직접면역형광 검사와 종특이 PCR을 시행하였다. 그 밖에 전자현미경 소견도 관찰하였다. 결 과 : 종특이 면역형광염색과 PCR은 모두 C. pneumoniae에 합당한 소견을 보여, 본 분리 균주가 C. pneumoniae임을 알 수 있었다. 전자현미경 소견은 서양의 표준 균주가 배모양입에 비해, 일본 균주과 유사한 원형을 나타내었다. 결 론 : 국내 최초로 연구자들은 22세 여자 급성인두염 환자로부터, C. pneumoniae 분리에 성공하였다. 형태학적으로 일본 균주와 같은 원형임은 서양의 보고와는 다르다. 향후 본 균주는 국내 C. pneumoniae 다양한 연구에 활용될 수 있을 것이다.

• 미생물학회지
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• 제39권1호
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• pp.27-35
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• 2003

환경수 중 크립토스포리디움 및 지아디아 분석방법은 현재 어떤 방법도 만족할만한 민감도, 특이도, 재현성을 인정 받지 못하고 있어, 다양한 형태의 정도관리 및 수행도 평가가 요구되고 있다. 본 연구는 1623방법(USEPA :Method 1623)을 사용해 한강 지표수에 대한 크립토스포리디움 및 지아디아 접종시험과 현장시료 동시분석시험에 기초하여, 환경수 중 이들의 존재여부와 농도를 측정함에 있어 분석결과의 정확도 및 신뢰도, 그리고 회수율에 미치는 영향요인을 검토하였다. 1623방법에 의한 결과, 평균적으로 한강 지표수시료에 존재하는 크립토스포 리디움의 46%와 지아디아의 60%를 검출할 수 있는 것으로 나타났으나, 각각의 회수율 범위가 13-73% 및 28-84%로 변이가 매우 커서 실제 환경 중 두 원생동물의 농도를 결정하기 위해서는 반복측정 및 통계학적 인 접 근이 수반되어 야 할 것으로 나타났다. 또한 IMS (immunomagnetic separation)중 산첨가에 의한 해체·분리과정을 1 회 더 반복함으로써 지표수시료에서의 총회수율의 약 10%를 향상시킬 수 있었으며, flow cytometry로 계수·준비된 (오)시스트((oo)cysts)를 정도관리에 사용할 경우 보다 신뢰할만한 결과를 얻을 수 있었다. 형광항체 및 DAPI염색은 현장시료특성 이나 전 처리과정에 따라 동일하지 않은 형광특징을 보인 바, 접종 된 현장시료 정제액에 대한 염색결과도 참조되어야 하며, 환경시료에는 다양한 비특이물질이 함유되어 있어 DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) 염색 및 DIC(Differential Interference Contrast)에 의한 내부구조 관찰이 최종 동정기준이 되어야할 것으로 나타났다.

• 한국환경성돌연변이발암원학회지
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• 제22권4호
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• pp.303-311
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• 2002

This study evaluated the concentrations of urinary metabolites of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in industrial waste incineration workers. The effect of genetic polymorphisms of xenobiotic metabolism enzymes on urinary concentration of PAH metabolites was assessed. And, aromatic DNA adduct levels were also determined in total white blood cells. Fifty employees were recruited from a company handling industrial wastes located in Ansan, Korea: non-exposed group (n=21), exposed group (n=29). Sixteen ambient PAHs were determined by GC/MSD (NIOSH method) from personal breathing zone samples of nine subjects near incinerators. Urinary 1-hydroxypyrene glucuronide (1-OHPG), a major pyrene metabolite, was assayed by synchronous fluorescence spectroscopy after immunoaffinity purification using monoclonal antibody 8E11 (SFS/IAC). Multiplex PCR was used for genotyping for GSTMI/TI and PCR-RFLP for genotyping of CYP1A1 (MspI and Ile/Val). PAH-DNA adducts in peripheral blood WBC were measured by the nuclease P1-enhanced postlabeling assay. Smoking habit, demographic and occupational information were collected by self-administered questionnaire. The range of total ambient PAH levels were 0.00-7.00 mg/㎥ (mean 3.31). Urinary 1-OHPG levels were significantly higher in workers handling industrial wastes than in those with presumed lower exposure to PAHs (p=0.006, by Kruskal-Wallis test). There was a statistically significant dose-response increase in 1-OHPG levels with the number of cigarettes consumed per day (Pearson correlation coefficient=0.686, p<0.001). Urinary 1-OHPG levels in occupationally exposed smoking workers were highest compared with non-occupationally exposed smokers (p=0.053, by Kruskal-Wallis test). Smoking and GSTMI genotype were significant predictors for log-transformed 1-OHPG by multiple regression analysis (overall model R²=0.565, p<0.001), whereas smoking was the only significant predictor for log-transformed aromatic DNA adducts (overall model R²=0.249, p=0.201). Aromatic DNA adducts was also a significantly correlation between log transferred urinary 1-OHPG levels (pearson's correlation coefficient=0.307, p=0.04). However, the partial correlation coefficient adjusting for Age, Sex, and cigarette consumption was not significant (r=0.154, p=0.169). The significant association exists only in individuals with the GSTMI null genotype (pearsons correlation coefficient=0.516, p=0.010; partial correlation coefficient adjusting for age, sex, and cigarette consumption, r=0.363, p=0.038). Our results suggest that the significant increase in urinary 1-OHPG in the exposed workers is due to higher prevalence of smokers among them, and that the association between urinary PAH metabolites and aromatic DNA adducts in workers of industrial waste handling may be modulated by GSTMI genotype. There results remain to be confirmed in future larger studies.