• Applied Biological Chemistry
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• 제45권4호
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• pp.190-194
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• 2002

Bacillus subtilis의 glutamyl-tRNA synthetase(GluRS)는 대장균에서 발현될 때 숙주세포의 $tRNA_1^{Gln}$에 glutamate를 잘못 아실화하여 독성을 나타내는 것으로 추정되고 있다. 이러한 B. subtilis GluRS를 대장균에서 과발현 시키기 위하여 B. subtilis 168 균주의 chromosomal DNA에서 GluRS의 유전자(gltX)를 PCR을 이용하여 증폭하고 T7 promoter에 의해 발현이 조절되는 pET11a expression vector에 클로닝하였다. 이 재조합된 pEBER plasmid DNA로 T7 RNA polymerase를 갖는 대장균 NovaBlue(DE3)에 형질전환하였다. 형질전환된 대장균에 IPTG를 처리하여 과량 생성된 GluRS 단백질은 ammonium sulfate 분별침전 후 EPLC를 이용한 Source Q column anion exchange chromatography, Superdex 200 column gel filtration, Mono Q column anion exchange chromatography로 정제하였다. 정제된 B. subtilis의 GluRS 분자량은 약 55 kDa이었으며 효소의 활성도는 조효소액에 비해 18배로 증가하였다.

• 대한의생명과학회지
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• 제6권4호
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• pp.261-268
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• 2000

할미송이버섯으로부터 혈전용해효소 (FE-2)를 DEAE-cellulose, Mono-S column으로 분리 정제하였다. 이 효소는 분자량이 18.2 kDa 이었으며, ICP-MS (inductively coupled plasma mass spectrometer) 분석 결과 $Zn^{2+}$을 포함하고 있었다. 15번째까지의 N-terminal amino acid 서열은 A-L-Y-V-G-X-S-P-X-Q-Q-S-L-L-V이고, pH 7.5에서 활성이 가장 큰 염기성 단백질 분해효소로, EDTA와 1,10-phenanthroline에 의해 활성이 감소되는 metalloprotease였다. $Mg^{2+}$, $Zn^{2+}$, Fe$^{2+}$, Co$^{2+}$의 첨가 시 활성이 증가하였으나 Hg$^{2+}$의 경우 활성이 완전히 소멸되었다. 이 효소 (FE-2)는 단백질 분해효소 저해제인 E-64 (trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)-butane), PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride), pepstatin 과 2-mercaptoethanol의 영향을 받지 않으며, 섬유소원 (fibrinogen)과 반응 시 $A\alpha$ chain과 B$\beta$ chain은 분해시키지만 $\gamma$ chain과는 반응하지 않았다.

• 생명과학회지
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• 제8권2호
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• pp.181-188
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• 1998

두 종류의 ADP-riboyltransferase(Yac-1과Yac-2)가 최근 mouse의 임파구로부터 cloning되어 그 특성이 규명되어졌다. Yac-1효소는 ADP-ribosyltransferase활성을 보여주나, 대조적으로, Yac-2는 상당한 양의 NAD glycohydrolase 활성도 소유하고` 있으며 이는 NDA를 우선적으로 가수분해 할 수 있다는 사실을 반영한다. Yac-2는 보존된 두 glutamate에 인접한 위치인 219번에 또 다른 glutamate를 소유하고 있다. 효소 활성에 대한 Glu-219의 효과를 알아보기 위해 두 단계의 재조합 중합효소 연쇄 반응 방법에 의해 Glu-219가 glutamate (E219Q)혹은 alanine(E219A)으로 치환되었다. Gln혹은 Ala으로의 치환결과, ADP-ribosyltransferase활성은 56% (E219Q)혹은 66% *E219A)로 감소하였다. Yac-2단백질의 NAD glycohydrolase 활성은 돌연변이에 의해 영향을 받지 않았다. 이러한 결과는 Yac-2효소의 Glu-219가 ADP-ribosyltransferase 활성에 중요한 역할을 하나, NDA glycohydrolase활성에는 관여하지 않음을 시사한다.

• Journal of Ecology and Environment
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• 제29권3호
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• pp.265-275
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• 2006

대구 인접지역 삼림식생에 대한 진행천이의 메카니즘과 잠재자연식생을 추정하였다. DCA 에 의한 요인 분석에서는 해발 고도 및 습도구배에 따라 각 군락의 특성이 결정되는 것으로 나타났으며, 토양의 수분 함량과 유기물 함량 및 전질 소량은 군락이 발달함에 따라 높아지는 것으로 나타났다. 종관 연관분석에서는 2개의 종집단으로 크게 구분되었으며, 이들 두 집단의 유형을 결정하는 요인은 기온 및 토양의 수분 요인으로 판단되었다. 특히, 두 종집단은 천이의 진행에 따라 종조성이 달라지는 군락의 발달단계를 보여주는 것으로 보이며, 생활형 조성도 이를 뒷받침하였다. 입지요인 및 종조성에 따라 소나무 군락, 굴참나무군락, 상수리나무군락 및 떡갈나무군락은 졸참나무군락이나 신갈나무군락으로 각각 천이가 진행될 것으로 예측되었다. 본 조사지역의 잠재자연식생은 종조성, 토양환경 및 지형요인에 의하여 산지 중 상부의 신갈나무군락, 계곡부의 고로쇠나무-까치박달군락, 산지 중 하부는 졸참나무군락 의 3개 유형으로 구분되었다. 그리고 신갈나무군락과 고로쇠나무-까치박탈군락은 현존 식생이면서 잠재자연식생이며, 소나무군락은 현재의 종조성 및 해발 영역을 토대로 신갈나무군락과 졸참나무군락으로 각각 발달할 것으로 예측되었다.

• Journal of Microbiology
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• 제38권3호
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• pp.187-191
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• 2000

A validation study was conducted to determine the efficacy of solvent/Detergent (S/D) inactivation and Q-Sepharose column chromatographic removal of the human immunodeficiency virus (HIV) during the manufacturing of a high purity antihemopilic factor VIII (GreenMono) from human plasma. S/D treatment using the organic solvent, tri (n-butyl) phosphate, and the detergent, Trition X-100, was a robust and effective step in eliminating HIV-1. The HIV-1 titer was reduced from an initial titer of 8.3 log10 TCID50 to undetectable levels within one minute of S/D treatment, HIV-1 was effectively partitioned form factor VIII during Q-Sepharose column chromatography with the log reduction factor of 4.1 . These results strongly assure the safety of GreenMono From HIV.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권4호
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• pp.248-252
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• 2001

메탄올 자화효모 Hansenula polymorpha 가 생산하는 재조합 인체 알부민 (human albumin)을 heat treatment ultrafiltration phenyl Sepharose CL-4B Mono Q 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수율 60%로 정제하였다. 정제된 재보합 알부민 SDS-PAGE를 수행한 결과 분자량이 65,000 Da으로 나타났고, 본 재조합 알부민의 N-말단 아미노산 서열은 Asp- Ala- His- Lys- Ser- Glu- Ala 으로 혈청유래 알부민 및 다른 효모 유래의 재조합 인체 알부민 과 동일함을 보였다. 정제한 재조합 인체 알부민의 아미노산 조성은 총 18종 의 아미노산이 검출되었고 아미노산 잔기 중 cysteine, arginine lysine 등이 이론치와 일치하였으며, 혈청 알부민과 동일하게 약 pI 4.8 정도 값을 나타내어 H. polymorpha 유래의 재조합 단백질의 전반적인 아미노산 구성이 혈청 알부민과 동일함을 확인하였다.

• The Korean Journal of Ecology
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• 제11권3호
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• pp.145-152
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• 1988

The potential natural vegetation of Naejangsan national park area, southwestern Korea, was inferred from the actual vegetation. With the phytosociological classification, ordinatins and field surveys, the actual vegetation map of the area was made in scale 1:25, 000, including ten communities of Pinus densiflora, quercus mongolica, Quercus variabilis, Carpinus laxiflora, Daphnipyllum macropodum, Carpinus tschonoskii, Quercus aliena-Carpinus tschonoskii, Cornus controversa-Lindera erythrocarpa, Torreya mucifera-Zelkova serrate and Acer mono-Zelkova serrata community. The analyses of species richness, age structure and various informations on vegetation changes suggest the three pathways of late stage succession from P. densiflora forest to climatic climax. The first of them is through Q. variabilis forest to Q. monogolica forest in the upper parts of the mountain, the second through Q. variabilis and Q. serrata forest to C. laxiflora forest in the middle parts and the third through Q. aliena forest to C. tschonoskii forest in lower parts. Considering the actual vegetation and informations on the vegetation changes including human activities, the potential natural vegetation of the mountain mainly composed of Q. monogolica, C. laxiflora, C. tschonoskii, P. densiflora and Z. serrata forest as climatic climax and/or edaphic climax was inferred. The present situration of nature conservation in the area was estimated by the examination on the actual vegetation and potential natural vegetation map.

• 한국식물병리학회지
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• 제10권3호
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• pp.215-221
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• 1994

Polygalacturonase (PG) produced by Botrytis cinerea in the culture broth containing citrus pectin as a carbon source was partially purified and characterized. PG was produced on a range of carbon sources such as starch, glycerol, cellobiose, and Na+-PAG with total activities of 34.8, 32.0, 29.2, 27.8 units, respectively. The specific activity was highest with 2316.7 units on Na+-PGA. Proteins of culture filtrate were concentrated with polyethylene glycol and acetone and applied to a hydroxyapatite column. Among three active fractions collected from the column, the reaction containing the highest PG activity was resolved by a Q-sepharose column. The active fraction from the Q-sepharose column was further purified by HPLC Mono Q column. The partially purified enzyme was analyzed by 10% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Among a few protein bands revealed, the amount of the protein of which molecular weight estimated to be 43 kDa coincided with the PG activity. The partially purified PG had optimal temperatures between 35~55$^{\circ}C$ and pH between 4.5~5.5.

• 한국진공학회:학술대회논문집
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• 한국진공학회 2013년도 제45회 하계 정기학술대회 초록집
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• pp.284-284
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• 2013

중 에너지 이온 산란 분석법(Medium Energy Ion Scattering Spectrometer, MEIS)은 50~500 keV로 이온을 가속 후 시료에 입사시켜 시료의 원자와 핵간 충돌로 산란되는 일차이온의 에너지를 측정하여 시료를 분석하는 기법으로, 원자층의 깊이 분해능으로 초박막의 표면 계면의 조성과 구조를 분석 할수 있는 유용한 미세 분석기술이다. 본 실험에서 에너지 70~100 keV의 He+ 이온을 사용하여 Pulse Width 1 ns의 Pulsed ion beam을 만들어 Start 신호로 사용하고 Delay-line-detector에 검출된 신호를 End 신호를 이용한 TOF-MEIS System을 개발하였다. 활용 가능한 분석시편으로 Ultra thin film 시편으로 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4 nm의 HfO2, 1.8, 4nm의 SiO2 시편을 분석 하였으며 Ultra Shallow Junction 시편으로 As Doped Si, Cs Doped Si 시편 및 Composition, Core/shell 구조의 Q-dot 시편으로 CdSe, CdSe/ZnS등 다양한 분석 실험을 진행 하였다. Composition, Core/shell 구조의 Q-dot 시편은 Diamond Like Carbon(DLC)의 Substrate에 Mono-layer로 형성하여 분석하였다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.221-224
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• 2001

Effect of hyperosmotic pressure on growth of recombinant Chinese hamster 。 vary cells and Erythropoietin (EPO) production was investigated. Cells were cultivated in batch modes at various osmolalities. When the osmolality increased from 314 to 463mOsm/Kg, specific EPO productivity (qp) was increased up to 1.6-fold but cell growth was inhibited. EPO has a complex oligosaccharide structure that plays an important role in biological activity in vivo. To investigate the influence of hypoerosmotic pressure on the glycosylation, structural analysis of oligosaccharide was calTied out. Recombinant human EPO was produced by CHO cells grown under various osmotic pressure and purified from culture supernatants by heparin-sepharose affinity column and immunoaffinity column. N-linked oligosaccharides were released enzymatically and isolated by paper chromatography. The isolated oligosaccharides were labeled with fluorescent dye, 2-aminobenzamide and analyzed with MonoQ anion exchange chromatography and GlycosepN amide chromatography for the assignment of GU (glucose unit) value. Glycan analysis by HPLC showed that neutral (asialo) oligosaccharide was increased slightly with an increase in osmolality. In portion of sialylated glycan, total relative amount of mono- and di-sialyated glycan was increased but that of tri- and tetra-sialylated glycan decreased as osmolality was increased.