Microsatellite SSR markers were developed and utilized to reveal the genetic diversity of 32 strains of Flammulina velutipes collected in Korea, China, and Japan. From the SSR-enriched library, 490 white colonies were randomly selected and sequenced. Among the 490 sequenced clones, 85 (17.35%) were redundant. Among the remaining 405 unique clones, 201 (49.6%) contained microsatellite sequences. We used 12 primer pairs that produced reproducible polymorphic bands for four diverse strains, and these selected markers were further characterized in 32 Flammulina velutipes strains. A total of 34 alleles were detected using the 12 markers, with an average of 3.42 alleles, and the number of alleles ranged from two to seven per locus. The major allele frequency ranged from 0.42 (GB-FV-127) to 0.98 (GB-FV-166), and values for observed ($H_O$) and expected ($H_E$) heterozygosity ranged from 0.00 to 0.94 (mean = 0.18) and from 0.03 to 0.67 (mean = 0.32), respectively. SSR loci amplified with GB-FV-127 markers gave the highest polymorphism information content (PIC) of 0.61 and mean allele number of five, whereas for loci amplified with GB-FV-166 markers these values were the lowest, namely 0.03 and two. The mean PIC value (0.29) observed in the present study with average number of alleles (3.42). The genetic relationships among the 32 Flammulina velutipes strains on the basis of SSR data were investigated by UPGMA cluster analysis. In conclusion, we succeeded in developing 12 polymorphic SSRs markers from an SSR-enriched library of Flammulina velutipes. These SSRs are presently being used for phylogenetic analysis and evaluation of genetic variations. In future, these SSR markers will be used in clarifying taxonomic relationships among the Flammulina velutipes.
Four Korean native cattle (KNC) breeds-Hanwoo, Chikso, Heugu, and Jeju black-are entered in the Domestic Animal Diversity Information System of the United Nations Food and Agriculture Organization (FAO). The objective of this study was to assess the genetic diversity, phylogenetic relationships and population structure of these KNC breeds (n = 120) and exotic breeds (Holstein and Charolais, n = 56). Thirty microsatellite loci recommended by the International Society for Animal Genetics/FAO were genotyped. These genotypes were used to determine the allele frequencies, allelic richness, heterozygosity and polymorphism information content per locus and breed. Genetic diversity was lower in Heugu and Jeju black breeds. Phylogenetic analysis, Factorial Correspondence Analysis and genetic clustering grouped each breed in its own cluster, which supported the genetic uniqueness of the KNC breeds. These results will be useful for conservation and management of KNC breeds as animal genetic resources.
Genetic heterogeneity of the tropical abalone, Haliotis asinina was examined using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) and microsatellite analyses. One hundred and thirteen polymorphic RAPD fragments were generated. The percentage of polymorphic bands of H. asinina across overall primers was 85.20%. The average genetic distance of natural samples within the Gulf of Thailand (HACAME and HASAME) was 0.0219. Larger distance was observed when those samples were compare with HATRAW from the Andaman Sea (0.2309 and 0.2314). Geographic heterogeneity and $F_{ST}$ analyses revealed population differentiation between H. asinina from the Gulf of Thailand and the Andaman Sea (p < 0.0001). Three microsatellite loci (CUHas1, CUHas4 and CUHas5) indicated relatively high genetic diversity in H. asinina (total number of alleles = 26, 5, 23 and observed heterozygosity = 0.84, 0.42 and 0.33, respectively). Significant population differentiation was also found between samples from different coastal regions (p < 0.0001). Therefore, the gene pool of natural H. asinina in coastal Thai waters can be genetically divided to 2 different populations; the Gulf of Thailand (A) and the Andaman Sea (B).
Licorice plant (Glycyrrhiza spp.) is an important herb, but the major portion of the national demand is imported to Korea because the domestic production base is vulnerable. We performed basic molecular breeding research for domestic cultivation and production. All publicly available G. uralensis EST sequences, which totaled 56,089, were assembled into 4,821 unigenes and examined for microsatellites. Eight polymorphic microsatellite loci were identified and 16 G. uralensis and 6 G. glabra accessions, which were collected from different locations, were genotyped using the microsatellites. Genetic diversity within the accessions was estimated by construction of a dendrogram. The dendrogram was clustered into two groups. The results showed that there is a correlative genetic relationship between species. The microsatellite markers were found to be useful for diversity analysis as they are able to successfully distinguish the Glycyrrhiza accessions.
Buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench), one of the minor crops grown in Korea belonging to the Polygonaceae family, is an annual crop widely cultivated in Asia, Europe, and America and has a character of outcrossing and self-incompatibility. The objective of this study was to analyze the genetic variability, phylogenetic relationships and population structure of buckwheat landraces of Korea using SSR markers. Ten microsatellite markers have been detected from a total of 79 alleles among the 179 buckwheat accessions were collected from Korea. The number of allele per marker locus ($N_A$) ranged from 2 (GB-FE-001, GB-FE-043 and GB-FE-055) to 31 (GB-FE-035) with an average of 7.9 alleles. GB-FE-035 was the most polymorphic with the highest PIC value 0.93. Major allele frequencies ($M_{AF}$) for the 10 polymorphic loci varied from 0.12 to 0.97 with a mean allele frequency of 0.57. The expected heterozygosity ($H_E$) values ranged from 0.05 to 0.94 with an average of 0.53. The observed heterozygosity ($H_O$) ranged from 0.06 to 0.92 with an average of 0.42. The overall polymorphic information contents (PIC) values ranged from 0.05 to 0.93 with an average of 0.48. The landrace accessions of buckwheat used in the present study were not distinctly grouped according to geographic distribution. The study concludes that the results revealed genetic differentiation was low according to the geographic region because of outcrossing and self-incompatibility. We reported that our analyses on the genetic diversity of common buckwheat cultivars of Korea were performed by using of microsatellite markers.
Objective: Recently, there has been an increasing interest in conservation of native genetic resources of chicken on a worldwide basis. Most of the native chicken breeds are threatened by extinction or crossing with ecotypes. Methods: Six Saudi native chicken breeds including black naked neck, brown frizzled, black, black barred, brown and gray were used in the current study. The aim of the current study was to evaluate genetic diversity, relationship and population structure of Saudi native chicken breeds based on 20 microsatellite markers. Results: A total of 172 alleles were detected in Saudi native chicken breeds across all 20 microsatellite loci. The mean number of alleles per breed ranged from 4.35 in gray breed to 5.45 in normally feathered black with an average of 8.6 alleles. All breeds were characterized by a high degree of genetic diversity, with the lowest heterozygosity found in the brown breed (72%) and the greatest in the frizzled and black barred populations (78%). Higher estimate of expected heterozygosity (0.68) was found in both black breeds (normal and naked neck) compared to the other chicken populations. All studied breeds showed no inbreeding within breed (negative inbreeding coefficient [$F_{IS}$]). The phylogenetic relationships of chickens were examined using neighbor-joining trees constructed at the level of breeds and individual samples. The neighbor-joining tree constructed at breed level revealed three main clusters, with naked neck and gray breeds in one cluster, and brown and frizzled in the second cluster leaving black barred in a separate one. Conclusion: It could be concluded that the genetic information derived from the current study can be used as a guide for genetic improvement and conservation in further breeding programs. Our findings indicate that the Saudi native chicken populations have a rich genetic diversity and show a high polymorphism.
Objective: In this study, we aimed to investigate the recent changes such as allele frequencies and total probability of exclusion (PE) in Thoroughbred horses in Korea using short tandem repeat (STR) parentage panels between 2006 and 2016. Methods: The genotype was provided for 5,988 horse samples with 15 microsatellite markers (AHT4, AHT5, ASB2, ASB17, ASB23, CA425, HMS1, HMS2, HMS3, HMS6, HMS7, HTG4, HTG10, LEX3 and VHL20). Results: In our study, the observed number of alleles per locus ranged from 3 (HMS1) to 9 (ASB17) in 2006 and 4 (HMS1) to 9 (ASB2) in 2016, with a mean value of 6.28 and 6.40, respectively. Of the 15 markers, HMS2, HTG4, and CA425 loci had relatively low polymorphism information content (<0.5000) in the Thoroughbred population. Mean levels of genetic variation in 2006 and 2016 were observed heterozygosity (HO) = 0.708, and expected heterozygosity (HE) = 0.685, as well as and HO = 0.699 and HE = 0.682, respectively. The PE was calculated for each group based on the allele frequencies of 14 or 15 STRs. The 2006 survey analyzed that PE was 0.9998, but it increased to 0.9999 in 2016 after the HMS2 marker was added in 2011. The current STR panel is still a powerful tool for parentage verification that contributes to the maintenance of integrity in the Thoroughbred population. Conclusion: The current STR panel is still a powerful tool for parentage verification that contributes to the maintenance of integrity in the Thoroughbred horses. However, continuous monitoring genetic variability is necessary.
Interval mapping using microsatellite markers was employed to detect quantitative trait loci (QTL) in the experimental cross between Berkshire and Yorkshire pigs. In order to derive critical values (CV) for test statistics for declaring significance of QTL, permutation test (PT) of Churchill and Doerge method(1994) and the analytical method(LK) of Lander and Kruglyak(1995) were used by each trait and chromosome. 525 $F_2$ progeny phenotypes of five traits(carcass weight, loin eye area, marbling score, cholesterol content, last back fat thickness) and genotypes of 125 markers covering the genome were used. Data were analyzed by line cross regression interval mapping with an F-test every by 1cM. PT CV were based on 10,000 permutations. CV at genome-wise test were 10.5 for LK and ranged from 8.1 to 8.3 for PT, depending on the trait. CV, differed substantially between methods, led to different numbers of quantitative trait loci (QTL) to be detected. PT results in the least stringent CV compared at the same % level.
The objective of this study was to identify the quantitative traits loci(QTL) for meat quality traits in pigs. Three-generation resource population was constructed from a cross between Korean native boars and Landrace sows. The resource population including founders, $F_1$ and $F_2$ was genotyped for 23 microsatellite markers on chromosome 7. The sex average total length of linkage map on chromosome 7 was estimated 154.6 cM. Meat quality traits including meat pH, meat color, drip loss, shear force, heating loss, crude fat, crude protein, crude ash and water content in muscle were collected from $F_2$ animals. For the QTL mapping, we used $F_2$ QTL Analysis Servlet of QTL express for web-based QTL mapping tools(http://qtl.cap.ed.ac.uk/). The QTLs for CIE-a and CIE-b on SSC7 were significantly detected at 1% and 5% chromosome-wide level, respectively.
A fine-mapping method exploiting linkage disequilibrium was used to detect quantitative trait loci (QTL) on the X chromosome affecting milk production, body conformation and productivity traits. The pedigree comprised 22 paternal half-sib families of Black-and-White Holstein bulls in the Netherlands in a grand-daughter design for a total of 955 sons. Twenty-five microsatellite markers were genotyped to construct a linkage map on the chromosome X spanning 170 Haldane cM with an average inter-marker distance of 7.1 cM. A covariance matrix including elements about identical-by-descent probabilities between haplotypes regarding QTL allele effects was incorporated into the animal model, and a restricted maximum-likelihood method was applied for the presence of QTL using the LDVCM program. Significance thresholds were obtained by permuting haplotypes to phenotypes and by using a false discovery rate procedure. Seven QTL responsible for conformation types (teat length, rump width, rear leg set, angularity and fore udder attachment), behavior (temperament) and a mixture of production and health (durable prestation) were detected at the suggestive level. Some QTL affecting teat length, rump width, durable prestation and rear leg set had small numbers of haplotype clusters, which may indicate good classification of alleles for causal genes or markers that are tightly associated with the causal mutation. However, higher maker density is required to better refine the QTL position and to better characterize functionally distinct haplotypes which will provide information to find causal genes for the traits.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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