• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권3호
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• pp.612-619
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• 2004

A competitive direct enzyme-linked immunosorbent assay (cdELISA) was developed for selective and rapid detection of a glycopeptide antibiotic, teicoplanin (TP). TP was conjugated to bovine serum albumin (BSA) for use as an immunogen. Repeated subcutaneous injections of 0.5 mg of the conjugate was effective in generating specific polyclonal antibody (PAb) toward TP in rabbits, as determined by cdELISA. TP-horseradish peroxidase conjugate (TP-HRP) was used as an enzyme marker. The cdELISA was developed based on a competition reaction between TP-BSA PAb and TP-HRP conjugate. The TP-BSA PAb was highly sensitive (detection limit, 0.3 ng/ml and specific toward teicoplanin, showing no cross-reactivity to other glycopeptide antibiotics including vancomycin. There were good correlations ($r^2$=0.84 and 0.76, respectively) between cdELISA and microbiological assay, and high-performance liquid chromatography. The cdELISA system developed in this work is expected to be useful not only for selective and rapid monitoring of TP but also for study of TP pharmacokinetics.

• Journal of Microbiology
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• 제38권4호
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• pp.255-259
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• 2000

For rapid and sensitive measurement of antiviral activities, application of a recombinant virus containing firefly luciferase gene was attempted. Recombinant human cytomegalovirus (HCMV) containing luciferase gene driven by HCMV late gene pp28 promoter (HCMV/pp28-luc) was used to test the antiviral activities of three known compounds and the result was compared with results from the conventional plaque assay for measuring the production of infectious viruses. When human fibroblast cells were infected with HCMV/pp28-luc, luciferase activity was observed at 2 days after infection and reached maximum at 6 days after infection, whereas the production of infectious virus was maximal at 4 days after infection. The antiviral activities of ganciclovir, acyclovir, and papaverine were measured in HFF cells infected with HCMV/PP28-luc and the luciferase activity was compared with the infectious virus titers. Luciferase activity decreased as the concentration of ganciclovir or papaverine increased, while there was a slight decrease in luciferase activity with acyclovir. The level of the decrease in Luciferase activity was comparable to the level of decrease in the production of infectious virus. Therefore, the antiviral assay using recombinant virus HCMV/pp28-luc resulted in sensitivity similar to the conventional plaque assay with a significant reduction in assay time.

• 한국미생물학회:학술대회논문집
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• 한국미생물학회 2005년도 International Meeting of the Microbiological Society of Korea
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• pp.205.4-205
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• 2005

• 한국미생물학회:학술대회논문집
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• 한국미생물학회 2003년도 International Meeting of the Microbiological Society of Korea
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• pp.118-121
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• 2003

A method for detection and quantification of aceticlastic methanogens using a real-time PCR with a TaqMan probe was developed. Two sets of primers and probes targeting the family Methanosarcinaceae and Methanosaetaceae were designed by using the Ribosormal Database Project (RDP) II, and softwares for phylogenetic probe design and sequence analysis. Target-group specificity of each set of primers and probe was verified by testing DNAs isolated from pure cultures of 28 archaeal strains purchased from DSMZ. Cell numbers in the 28 archaeal cultures and in the samples from anaerobic processes were quantified using a real-time PCR with the sets of primers and probe. In conclusion, the real-time PCR assay was very specific for the corresponding target methanogenic family and was proved to be a powerful method for quantification of aceticlastic methanogens in anaerobic processes.

• 한국미생물학회:학술대회논문집
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• 한국미생물학회 2002년도 추계학술대회
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• pp.3-14
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• 2002

Functional genomics aims at uncovering useful information carried on genome sequences and at using it to understand the mechanisms of biological function. Elucidating the unknown biological functions of new genes based upon the genomics rationales will greatly speed up the extensive understanding of biocatalysis and biodegradation in biological world including microorganisms. DNA microarrays generate a system for the simultaneous measurement of the expression level of thousands of genes in a single hybridization assay. Their data mining (transcriptome) strategy has two categories: differential gene expression and coordinated gene expression. Furthermore, measurement of proteins (proteome) generates information on how the transcribed sequences end up as functional characteristics within the cell, and quantitation of metabolites yields information on how the functional proteins act to produce energy and process substrates (metabolome). Various composite functional genomics databases containing genetic, enzymatic and metabolic information have been developed and will contribute to the understanding of the life blue print and the new discoveries and practices in biocatalysis and biodegradation that could enrich their industrial and environmental applications.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제19권1호
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• pp.62-66
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• 2012

신선편이 농식품 시장의 빠른 성장과 함께 안전관리기준도 강화되고 있어 제조 시설 현장에서 신속하고 간편하게 위생상태를 판단할 수 있는 모니터링기법이 필요하게 되었다. 본 연구는 신선편이 농식품 생산업체 3개소를 대상으로 생산에 사용되는 도구와 기기에 대한 미생물수를 조사하였고 그에 대한 검증법인 ATP 검사법의 상관관계를 도출하고자 하였다.신선편이 농식품 생산업체 3개소의 신선편이 가공 시설, 장비에서 채취된 총 50개 시료의 ATP bioluminescence assay 값과 일반세균수와의 상관계수 (r)은 0.8772로 나타났다. ATP 검사법은 신속, 간편, 일관성을 바탕으로 신선편이 농식품 산업체에서 미생물 배양법을 대체하여 위생 환경 개선에 유용하게 쓸 수 있는 것으로 판단된다.

• 미생물학회지
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• 제36권2호
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• pp.91-96
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• 2000

불와전 균류인 Fusarium s^g pp.를 이용하여 여러 가지 배양조건과 생리적 영향에 따른 균주의 성장 및 T-2 toxin의 생성에 관하여 고찰하였다. T-2 toxin 의 검출방법은 thin layer chromatography (TCL) 법과 미생물학적 검출방법을 사용하였다. 고체 배지의 경우 횐옥수수 가루(Quaker사 제품)베지에서 다른 곡물보다 많은 양의 T-2 toxin이 생성되었으며,비교적 깨끗한 T-2 toxin이 정제되었다. 이 경우 배지 100g당 약 700 mg의 T-2 toxin이 생성되었으며, 그중 약 30%정도가 깨끗한 결정으로 정제되었다. 고온(20-$25^{\circ}C$)에서는 생장은 많았으나, T-2 toxin의 생성은 적었으며, 저온(10-$15^{\circ}C$)에서는 비교적 생장이 적었지만, T-2 toxin의 생성이 많았고, 젖당, 글리세롤, 솔비톨의 경우는 적었다. 유일 탄소원으로 구연산과 초산은 이용하지 못하였으며, 녹발의 경우 생장은 많았으나 T-2 toxin의 생성양은 적었다. 질소원의 경우 $NaNO_2$를 제외하고는 $(NH_4)_2NO_4$, $NH_4Cl_3$, $NH_4NO_3$, $KNO_3$ 를 거의 동일하게 이용하였다. 초기 pH값에 생성과 균주의 성장은 pH4.0-5.0일 경우 최적을 나타냈으며 ph6.0이상에서는 성장도 저하되고, T-2 toxin생성도 적었다. 회전속도에 따른 T-2 toxin 생성과 균주의 성장을 보면 회전속도가 속돠 증가함에 따라 균주의 생장과 T-2 toxin 생성량이 모두 증가하였다. $15^{\circ}C$에서 7일간 배양 후, $25^{\circ}C$로 옮겨 7일간 배양하여, toxin의 생성을 보면, $15^{\circ}C$에 7일간 배양했을 때보다 T-2 toxin양이 적었다. 이는 생성되었던 T-2 toxin이 분해되었음을 보여주는 것이다. 이상의 결과를 볼 때 T-2 toxin 대사 경로는 온도에 의한 효소 억제 또는 효소 유지 시스템에 의해 조절되는 것이라고 생각할 수 있다.

• Journal of Microbiology
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• 제45권5호
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• pp.453-459
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• 2007

We developed a multiplex PCR (mPCR) assay to simultaneously detect Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Corynebacterium spp. and seudomona aeruginosa. This method employs a single tube and multiple specific primers which yield 200, 281, 346, 423, 542, and 1,427 bp PCR products, respectively. All the PCR products were easily detected by agarose gel electrophoresis and were sequenced to confirm the specificity of the reactions. To test this method, DNA extracted from urine samples was collected from 96 sexually transmitted disease or prostatitis patients at a local hospital clinical center, and were subjected to the mPCR assay. The resulting amplicons were cloned and sequenced to exactly match the sequences of known pathogenic isolates. N. gonorrhoeae and Corynebacterium spp. were the most frequently observed pathogens found in the STDs and prostatitis patients, respectively. Unexpectedly, P. aeruginosa was also detected in some of the STD and prostatitis samples. More than one pathogen species was found in 10% and 80.7% of STD and prostatitis samples, respectively, indicating that STD and prostatitis patients may have other undiagnosed and associates. The sensitivity of the assay was determined by sing purified DNA from six pathogenic laboratory strains and revealed that this technique could detect pathogenic DNA at concentrations ranging from 0.018 to $1.899\;pg/{\mu}l$. Moreover, the specificities of this assay were found to be highly efficient. Thus, this mPCR assay may be useful for the rapid diagnosis of causative infectious STDs and prostatitis. useful for the infectious STDs and prostatitis.

• 미생물학회지
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• 제27권1호
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• pp.48-55
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• 1989

HA 비드에 부착한 S. sanguis 세포는 방사능 측정시 칵테일 속에서 비드에 여전히 부착되어 있음으로 비드에 의한 방사능의 sel-absorpiton이 일어났으며 그 정도는 염산용액으로 비드를 용해시킬 때 측정한 반사능값의 34.5% 이었다. 현탁액으로 준비한 세포의 방사능 측정과는 달리 HA 또는 SHA에 부착한 세포의 경우에는 소량의 scintillation 용액(2.5ml) 사용에서 더 좋은 측정값을 얻었다 . HA 비드에 의한 칭은 약 18% 이었다. 부착 assay 에 사용할 HA 비드 준비에 보통 이용되는 3가지의 dqkdqjqdm 비교에서는 차이가 없었다. 부착실험용의 세균세포는 초소리파로 세균사슬을 끊었는데 30초간의 파절로 세포하나 또는 두개로 주로 구성된 현탁액을 얻을 수 있었다. 본 연구에서는 HA 비드에 부착한 S. sanguis 세포를 측정할 때 self-absorpiton이 일어남을 발견하였고 부착한 세균을 비드에서 탈락하거나 또는 비드를 용해시킨 후 측정함으로써 self-absorption을 제거할 수 있었다. 그리고 부착한 세균의 방사능 측정에서는, 적정의 칵테일량을 발견하여 사용하므로 측정값을 유의하게 증가시킬 수 있었다. 수 있었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제8권1호
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• pp.1-8
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• 1993

육류중에 잔류하는 항생물질 및 항균제를 검출하기 위해 본 실험에서는 3종의 균주 Bacillus subtilis ATCC 6633, Micrococcus luteus ATCC 9341, BAcillus cereus var. mycoides ATCC 11778을 사용하여 실험하였다. 시료의 clean-up은 항생·항균제의 물리화학적 성질을 고려하여 우선 McIlvaine buffer를 가하여 homogenize하고 hexane으로 defatting 시킨 후, chloroform으로 추출한 액과 Sep-Pak C18과 Bakerbond SPE carboxylic acid column에 흡착시킨 후 추출한 액을 각각 시험용액 A, B, C,로 하였다. 각 test solution을 paper disk를 사용하여 함균 배지에 올려놓고 overnight culture 후 inhibition pattern을 통해 여러 종류의 항생·항균제를 계통적으로 검출하였다. 본 실험에서 macrolide계와 tetracycline계 등은 0.1ppm 이하의 detection limit을 보였으며, penicillinrP는 0.001ppm이하의 높은 detection limit을 나타내므로서 시료중에 잔류하는 극미량까지도 검출할 수 있었다. 본 방법은 식육중의 잔류 항생·항균제를 동시에 간단하게 계통적으로 분류하는데 있어 좋은 방법이라고 생각되며 항생·항균제의 체계적인 1차 screening 수단으로서 유용한 방법이라 사료된다.