The graphene oxides (GOs) were tested as a fluorescent quencher in the field of DNA-diagnostics. The various suspensions of GO nanoplates were prepared by changing the synthesis conditions. The suspensions were stable for at least 6 weeks by differing degrees of functionalization of various oxygen-containing groups of atoms. Depending on the properties of GO nanoplates, their fluorescent quenching abilities, which were determined by the amount of the tagged immobilized oligonucleotide, were also changed. GO suspension synthesized at $75^{\circ}C$ of reaction mixture showed the fluorescent quenching of 16.39 nmol/mg, which would be a potential substitution of molecular fluorescent quencher in test-systems for DNA-diagnostics.
Although efficient antiviral lamivudine is used for HBV-infected patients, a prolonged treatment with nucleoside analogs often results in lamivudine-resistant variants. In this study, we evaluated the fidelity of the lamivudine-resistant variants. The FLAG-tagged wild-type (FPolE) and Met550 variants (FPolE/M550A, M550V, and M550I) of HBV DNA polymerases were expressed in insect cells then purified. Like many other reverse transcriptases, no $3'{\rightarrow}5'$ exonuclease activity was detected in the HBV DNA polymerase. Since there is no proofreading activity, then the use of the site-specific nucleotide misincorporation method is beneficial. From the $f_{ins}$ value analysis, it is evident that M550I and M550V exhibit higher fidelity values than the wild-type HBV DNA polymerase, while M550A exhibits similar fidelity values. It is therefore suggested that lamivudine resistance comes from the stringency to dNTP binding and the discrimination of dCTP and lamivudine in M550V and M550I.
목 적: 정액 내 tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$) 농도와 정자 DNA 손상 및 정액 검사 소견과의 관련성을 평가하고자 하였다. 연구방법: 정액 표본은 45명의 건강한 남성에서 자위에 의하여 획득하였다. 정자의 상태는 컴퓨터 정액 분석기를 이용하여 판정하였으며, 두부의 DNA 손상은 TUNEL 분석방법에 의해 측정하였다. TNF-${\alpha}$ 농도는 동결-융해된 정장액에서 ELISA법으로 측정하였다. 결 과: 정자 DNA 손상율은 1.9%에서 53% (mean ${\pm}$ SD, 12.4${\pm}$9.6%)로 매우 광범위하게 나타났다. 단변량분석에 의하면 DNA 손상 정도와 정자의 농도, 운동성과는 관련이 없었으나, 직진운동성 (linearity)과는 음의 상관 관계를 나타내었으며 (r=-0.325, p=0.03) 연구 대상 남성의 연령과는 양의 상관 관계를 나타내었다 (r=0.484, p=0.001). 정액내에 존재하는 TNF-${\alpha}$ (>1 pg/mL)는 연구 대상 남성의 73.3% (33/45)에서 검출되었으며 평균 농도는 4.9 pg/mL, 범위는 1.1에서 22.6 pg/mL이었다. 정액 검사 상의 정자 상태와 정자 DNA 손상과는 유의한 관련성이 나타나지 않았다. 결 론: 본 연구에서는 정자 DNA의 손상이 남성의 연령과 관련성이 있음을 확인하였으나, TNF-${\alpha}$와의 관련성은 확인할 수 없었다.
본 연구는 된장 메탄올 추출물의 항암효과를 검토하기 위해서 다른 콩 관련 발효식품과 원재료인 콩과 밀가루의 메탄올추출물과 비교하면서 여러 인체 암세포들의 성장 억제 실험과DNA 합성 저해 실험을 행하였다. AGS 인체 위암세포의 경우 첨가농도 200 $\mu\textrm{g}$/mL에서 콩된장과 70% 콩된장 메탄올 추출물은 각각 80%, 78%의 저해효과를 가졌으며 청국장 메탄올 추출물은 65%, 일본의 미소 메탄올 추출물은 54%의 저해효과를 보였다. Hep 3B 인체 간암세포에 대한 증식억제 효과 결과에서도 콩된장과 70% 콩된장의 경우, 첨가농도 200 $\mu\textrm{g}$/mL에서 각각 77%, 73%의 저해효과를 가지는 반면, 청국장, 일본의 미소는 각각 60%, 56%의 억제효과를 보였고 콩과 콩/밀가루의 경우 각각 56%, 40%의 저해효과를 나타내었다. HT-29 인체 대장암세포에서도 이상의 간암, 위암세포의 결과와 유사하게 증식억제효과를 보여 콩된장과 70% 된장 메탄올 추출물이 각각 86%, 87%의 저해효과를 나타내면서 다른 콩관련 발효식품들과 원재료 콩에 비해 큰 활성을 보였다. 또한 DNA 합성 저해 실험에서 AGS 인체 위암세포는 된장 메탄올 추출물 100 $\mu\textrm{g}$/mL, 200 $\mu\textrm{g}$/mL 투여시에는 각각 65%, 76%의 DNA 합성 저해 효과가 관찰되었고, 반면 콩의 메탄올 추출물의 경우 첨가농도 100 $\mu$/mL, 200 $\mu$/mL 때 각각 47%, 68%의 DNA 합성 저해 효과를 가졌으며 된장의 경우보다 낮은 저해 효과를 나타내었다. Hep 3B 인체 간암세포는 된장 메탄올 추출물 100 $\mu\textrm{g}$/mL, 200 $\mu\textrm{g}$/mL 투여시 각각 43%, 59%의 DNA합성 저해 효과를 나타내었다. 이상의 연구 결과들로부터 된장이 다른 콩 발효식품 및 원재료 콩보다 높은 암세포 성장 억제 효과와 DNA 합성 저해 효과를 가지는 것은 콩만으로 3개월 간 발효시킨 된장의 우수성과 함께 발효과정을 거치는 동안 원재료인 콩에서는 없었던 혹은 함량이 적은 성분들이 생성되거나 증가되어 항암효과를 나타내는 것으로 추정되어진다.
A label-free DNA detection method was developed for a simple electrochemical DNA sensor with a short assay time. Self-assembled monolayers of peptide nucleic acid were used as a probe on gold electrodes. The formation of the self-assembled monolayers on the gold electrodes was successfully checked by means of cyclic voltammetry. The target DNA, hybridized with peptide nucleic acid, can be detected by the anodic peak current of ferrocene dendrimers, which interact electrostatically with the target DNA. This anodic peak current was measured by square wave voltammetry at 0.3 V to decrease the detection limit on the order of the nanomolar concentrations. As a result, the label-free electrochemical DNA sensor can detect the target DNA in concentrations ranging from 1 nM to $1\;{\mu}M$ with a detection limit of 1 nM.
Kim, Nam-Keun;Lee, Sook-Hwan;Ko, Jung-Jae;Roy, Rabindra;Lee, Hey-Kyung;Kwak, In-Pyung;Cha, Kwang-Yul
Journal of Genetic Medicine
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제2권1호
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pp.31-34
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1998
The N-methylpurine-DNA glycosylase (MPG), a ubiquitous DNA repair enzyme, removes N-methylpurine and other damaged purines induced in DNA. Tissue-specific mRNA levels of the N-methylpurine-DNA glycosylase (MPG) were investigated in Balb/c mice of four different growing stages; newborn, 1, 4 and 8-weeks postpartum. MPG expressions in the newborn and the 8-week-old mice were the highest in thymus and testis, respectively. The tested tissues of the newborn mice had consistently higher MPG mRNA level than 8-week-old adults except in testis and thymus. The MPG mRNA level in testis was the lowest in the newborn mice, but it attained the highest in the 8-week-old mice. The levels of MPG mRNA among the different tissues in the newborn and the 8-week-old mice were more than 9.0 and 19.0-fold respectively. These results suggest that the of MPG expression was dependent on the growing stage and had tissue-specificity.
DNA methylation at cytosines (5mC) is a major epigenetic modification involved in the regulation of multiple biological processes in mammals. How methylation is reversed was until recently poorly understood. The family of dioxygenases commonly known as Ten-eleven translocation (Tet) proteins are responsible for the oxidation of 5mC into three new forms, 5-hydroxymethylcytosine (5hmC), 5-formylcytosine (5fC) and 5-carboxylcytosine (5caC). Current models link Tet-mediated 5mC oxidation with active DNA demethylation. The higher oxidation products (5fC and 5caC) are recognized and excised by the DNA glycosylase TDG via the base excision repair pathway. Like DNA methyltransferases, Tet enzymes are important for embryonic development. We will examine the mechanism and biological significance of Tet-mediated 5mC oxidation in the context of pronuclear DNA demethylation in mouse early embryos. In contrast to its role in active demethylation in the germ cells and early embryo, a number of lines of evidence suggest that the intragenic 5hmC present in brain may act as a stable mark instead. This short review explores mechanistic aspects of TET oxidation activity, the impact Tet enzymes have on epigenome organization and their contribution to the regulation of early embryonic and neuronal development.
RecA protein plans a central role in homologous recombination and DNA repair in Escherichia cofi (E. colD. The function 8nd structure of this protein are universal in prokarvotes and also conserved in eukaryotes such as yeast. The RecA-like protein with 74 lInDa in size has already been identified and purified from a fission yeast Schizosaccharomyces pombe (5. pommel (Lee, 19911. From this study it was revealed that the RecA-like protein of 5. pombe was highly inducible to various DNA damaging agents and inhibitors of nucleotide pool svnthesizins enzymes. The cellular level of the 5. pombe RecA-like protein wi,u markedly increased, upto 5- to 10-fold, by treatment with various DNA-damains agents including ultraviolet (UV) light, methyl methanesulfonate WS),4-nitroquinoline-1-oxide (4-NQO), and mitomycin-C (MMC), similar to E. cofi RecA protein. Interestingly, the protein level was also increased by inhibitors of nucleotide pool forming enzlwnes such as methotrexate (MTX) and hvdroxvurea (HU). The most effective doses for the inducibility of 4-NQO, MMS, W, MMC, MTX, and HU were 0.2 Ug/ml, 30 mM, 200 J/ma, 0.4 $\mus/ml,$ 1 Ug/ml, and 100 mM, respectively. The range of effective duration time for the inducibilitv of RecA-like protein was from 270 to 450 mins. These results suggest that the 5. pombe RecA-like protein also platys an imortant role in cellular responses to DNA damage as in E. coli system.
창원시의 3개 지점(남천, 창원천, 청운지)에서 물 시료를 채취하고, 채취한 시료로부터 genomic DNA를 분리하였다. 분리된 DNA와 class A extended-spectrum beta-lactamase(ESBL) 유전자 5가지(blaOXA-1, blaSHV, blaTEM, blaCTX-M-1, blaCTX-M-9)를 target으로 하는 primers를 사용하여 quantitative PCR을 수행하였다. 시료를 채취한 지점별로 ESBL 유전자들의 수와 비율에서 확연한 차이가 있음을 알 수 있었다. 남천의 경우 DNA 30ng당 ESBL 유전자가 1.93×106 copy나 존재하는 데에 반해 창원천의 경우에는 1.47×105 copy 그리고 청운지에는 9.5×103 copy 밖에 존재하지 않았다. 흐르는 하천인 남천과 창원천에서는 각 ESBL 유전자들의 비율에서 큰 차이가 없었다. 즉, 남천에서는 blaOXA-1 유전자가 65.3%, blaCTX-M-1 유전자가 33.6%를 차지하여서 이 두 유전자가 전체 ESBL 유전자의 99% 가까이를 차지하고 있었다. 창원천에서도 blaOXA-1 유전자가 64.1%, blaCTX-M-1 유전자가 19.1%를 차지하므로 이 두 유전자가 전체의 83% 이상을 차지하고 있었다. 하천과 다르게 폐쇄된 환경인 청운지 연못에서는 내성세균들의 총량 자체가 다른 두 하천에 비해서 월등하게 적었다. 또한 내성 세균의 비율도 달라서 blaCTX-M-1 유전자가 전체의 87.5%, 그리고 blaCTX-M-9 유전자가 9.8%를 차지하고 있었다.
본 연구는 Chinese hamster ovary (CHO-KI) 배양세포에서 S-15분획에 의해 활성화된 bezo(a) pyrene (BP)과 3-methylcholanthrene(MC)에 의해 유발된 DNA단사절단과 DNA복제억제 및 그 회복과정에 미치는 한국산 인삼추출물 saponin의 영향을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. S-15분획으로 활성화된 10-5 M의 BP 또는 MC를 1.0-10ng/ml의 saponin과 함께 처리할 경우 BP와 MC단독처리군에 비해 DNA 단사절단률이 감소하였다. DNA 합성률은 활성화된 10-5M의 BP와 10-6 M의 MC에 의해 각각 50% 및 75% 억제되었으나, 0.1-10ng/ml의 saponin을 동시에 처리할 경우 DNA 합성억제률이 약 10% 이상 둔화되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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