The bacteriolytic enzyme produced from Bacillus subtilis SH-1 was purified and characterized, and its molecular weight was determined. The bacteriolytic enzyme activity was increased about 66.5 times via purification with recovery yield of 18.5%. The optimum pH and temperature of this enzyme were 9.0 and 50$\circ$C. The enzyme was stable within a pH range of 6.0-10.0 and unstable above 60 . The molecular weight of the enzyme was estimated to be 23,000 dalton in a form of monomer with no other subunits. Effect of the enzyme on the lysis of bacteria engaged in food posion was tested. The lysis degree was below 31% against Gram negative bacteria and above 48% in Gram positive bacteria. The values higher than 73% were obtained against Vibrio sp. and Listeria sp. As the turbidity of dissolved peptidoglycan clecreases, the free amino group levels were increased. And, based on hydrolysis of casein, this enzyme was thought to be an endopeptidase.
The purpose of this study was to evaluate bacteriocin activity against human flora. Lactobiocin, a bacteriocin produced by Lactococcus sp. HY 449, inhibited the growth of Starphylococcus epidermidis, Starphylococcus aureus, Streptoccoccus pyogenes and Propionibacterium acnes. When crude bacteriocin was added to indicator cells during logarithmic growth, the optical density(O.D 650nm) of cells without bacteriocin increase after 5h of incubation. Whereas in the presence of bacteriocin, the O.D of cell suspensions decreased. The similar patterns were observed for absorbance readings at 280 nm and 260 nm. The release of cellular components when cell were treated with Lactobiocin suggests some degree of membrane damage or cell lysis. Scanning electron microscopy of cells following treatments with Lactobiocin in PBS buffer revealed disruptures of cell morphology. These results indicate that bacteriocin appears to cause cell lysis of tested strains. In cytotoxicity on human fibroblast, LD$\_$50/ of Lactobiocin was ca. 50 mg/ml and no change was observed cell proliferation at the same concentration. Any irritation and allergic reaction did not observed when evaluated by human patch test for Lactobiocin.
십자화과 작물에 발생하는 검은썩음병(Black rot or Black vein of crucifer)의 병원성 세균인 Xanthomonas campestris pv. crucifer)의 병원성 세균인 Xanthomonas campestris pv. campestris를 분리, 동정하고 병원성을 검정하였다. 이 X. c. pv. campestris 는 3가지 종의 Chinese cabbage에 병원성을 나타내었고, 병원성과 관련된 특성을 결정하기 위하여 Tn5 mutagenesis를 실시 cellulase negative mutant를 선발하여 병원성 검정하였다. 선발된 cellulase negative mutant를 배추에 분무 접종하여 광학 현미경과 전자현미경으로 관찰한 결과 cellulase negative mutant는 wild type와 함께 기공표면과 기공하부조직에서 정착하였지만 그 밀도는 낮았다. 반면 접종 24시간 이후 wild type은 기공표면과 기공하부조직이 lysis되기 시작하여 48시간 이후에는 병원성의 진전으로 보다 많이 lysis되었다. 6일 후, wild type은 cellulase활성에 의해 식물체 조직에서 높은 증식력을 보이며 조직을 lysis 시키고 또한 조직 깊숙이 침입, 정착하는 것을 관찰하였다. 이 결과로 X. c. pv.c campestris의 cellulase는 병원성에 관여하는 중요한 요인으로 생각된다.
The present experiment was designed to investigate the effects of Sambutang water extracts on the serum cholesterol levels and the cardiovascular system in the experimental animals. Thus, the changes of blood pressure and heart rate were measured after oral administration. Measurment of Mortality rate was observed for measuring the effect of Sambutang water extract. Sambutang water extract against pulmonary thromboembolism induced by collagen the mixture(0.1 ml/10 g, 2 mg/kg) plus serotonin(5 mg/kg) in mouse. The effect of Sambutang water extract was examined by observing the change of collagen-induced platelet aggregation, coagulation activity, ex vivo and in vitro fibrinolytic activity of euglobulin fraction in rats. The results were summarized as follows. 1. Sambutang decreased the serum cholesterol levels in rats. 2. Sambutang dropped the blood pressure in spontaneous hypertensive rat. 3. The drug increased the auricular blood flow in rabbit. 4. The drug relaxed the artery contraction by pretreated norepinephrine in rat. 5. The drug inhibited the death rate of mouse which was led to thromboembolism by serotonin and collagen. 6. The drug inhibited the platelet aggregation in rat. 7. The drug prolonged the prothrombin time and activated partial thromboplastin time on the test of plasma coagulation factor activity in rat, but was not valuable. 8. The drug increased the antithrombin activity in rat and the fibrinogen lysis time was reduced and lysis area was increased. 9. Sambutang reduced fibrinogen lysis time of rat in vitro assay. According to the above mentioned results. Sambutang increased the blood flow and dropped the blood pressure by the dilation of blood vessel. And the drug presented the antithrombin activity, inhibited the platelet aggregation.
Although widely used as a host for recombinant protein production, Escherichia coli is unsuitable for massive screening of recombinant clones, owing to its poor secretion of proteins. A vector system containing T4 holin and T7 lysozyme genes under the control of the ptsG promoter derivative that is inducible in the absence of glucose was developed for programmed cell lysis of E. coli. Because E. coli harboring the vector grows well in the presence of glucose, but is lysed upon glucose exhaustion, the activity of the foreign gene expressed in E. coli can be monitored easily without an additional step for cell disruption after the foreign gene is expressed sufficiently with an appropriate concentration of glucose. The effectiveness of the vector was demonstrated by efficient screening of the amylase gene from a Bacillus subtilis genomic library. This vector system is expected to provide a more efficient and economic screening of bioactive products from DNA libraries in large quantities.
조류의 효과적인 제어방법 개발의 일환으로 해양암석분말의 효과를 보기위하여 해양암석분말과 곰팡이 배양 상등액을 이용하여 해양조류 제거율을 조사하였다. 편조류인 H. akashiwo와 P.minimum는 해양암석 분말을 30g/1의 농도로 살포한 실험군에서 높은 구제효과를 나타내었고, P. oxalicum (HCLE-34)배양상등액 살포는 5 mg/l 살포군에서도 구제효과를 나타내었다. 혼합 살포군에서도 배양 상등액 단독 살포군에서와 동등한 정도의 구제효과를 나타내었고, 완충용액 (pH 2.8)은 15 mg/l 살포군에서 60분 경과 후 75%의 구제효과를 나타내었으나, 전자현미경적 관찰에서는 암석분말과 배양 상등액 혼합 살포군, 배양 상등액 살포군, 암석분말 살포군 및 완충용액 살포군 순으로 세포의 파괴정도가 관찰되었다. 이러한 결과는 암석분말과 곰팡이 배양상등액이 해양에서 발생되는 편조류의 대발생을 조절할 수 있는 물질로 작용함을 시사한다.
10 g/L yeast extract, 20 g/L peptone, 20 g/L dextrose가 첨가된 YPD 배지를 이용하여 200 rpm, 30 $^{\circ}C$에서 24시간 배양한 Pichia pastoris x-33과 KM71H를 각각 대수증식기에 시료를 채취하여 4000 g, 4 $^{\circ}C$에서 5분간 원심분리하여 펠릿에 멸균된 증류수를 500 ${\mu}{\ell}$ 넣고 4000 g, 4 $^{\circ}C$에서 5분간 원심분리하여 2-3회 세척한 후 보관하여 각기 다른 4가지 방법으로 세포를 파쇄하여 얻은 시료를 현미경관찰을 통하여 형태의 변화를 관찰하였다. 12000 g, 4 $^{\circ}C$에서10분간 원심분리하여 얻은 상등액에 시약 500 ${\mu}{\ell}$와 시료 500 ${\mu}{\ell}$를 넣고 상온에서 10분간 반응하여 분광광도계를 이용하여 595 nm에서 세포 내 단백질 농도를 측정하였다. 이 결과를 바탕으로 효모를 가장 효과적으로 세포를 파쇄할 수 있는 방법을 조사하였다.
The purpose of this study was to identify the relationship of symptom distress and natural killer cell cytotoxicity in breast cancer patients who had been radiation therapy and/or chemotherapy after surgery. Symptom distress measured by modified Lee's(1994) physical symptom questionnaire. For measuring the natural killer cell cytotoxic activity. 8ml to 10ml blood was collected from the subjects. Mononuclear cell was isolated by centrifuge of the blood and cultured by putting $Cr^{51}$, and reacted with target cell, K562 cell. Amount of $Cr^{51}$ was measured, and %lysis was calculated. The results were as follows. 1) Symptom distress score was 42.18, which is moderate symptom distress. 2) Natural killer cell cytotoxic activities were 42.18%lysis(effector : target cell ratio=100 : 1) and 28.05%lysis(effector : target cell ratio=50 : 1). 3) Correlation coefficients of symptom distress and natural killer cell cytotoxic activity were $-.134{\sim}-.461$. Though significant correlation was not found between total score of symptom distress and natural killer cell cytotoxic activity, 3('pain' 'feel hot on radiation site' and 'difficulty in breathing') of 19 symptom distress items and natural killer cell cytotoxic activity showed significant negative correlation(p<.05). These findings suggest that 1) breast cancer patients who had been radiation therapy and/or chemotherapy after surgery have moderate symptom distress and decreased natural killer cell cytotoxic activity. 2) The symptom distress was not related to natural killer cell cytotoxic activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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