• 대한수의학회지
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• 제36권1호
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• pp.119-129
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• 1996

The present study was conducted to rapidly detect Listeria monocytogenes in raw milk. Specificity and sensitivity of polymerase chain reaction(PCR) technique, and direct PCR were examinded in raw milk, also were compared the calssical culture methods with PCR technique. This method used a pair of primers based on a unique region in the 16S rRNA sequence of L nomocytogenes. In the PCR specificity tests, each of the 10 strains of L monocytogenes tested gave a single 70-bp band. But the other six Listera spp tested gave negative results. Results of the sensitivity tests showed that as few as 2 CFU of L monocytogenes in pure cultures could be detected with 16S rRNA-based primers, L-1 and L-2. In different PCR cycles, a PCR product was detected with $10^3$ cells of L monocytogenes from 25 cycles to 50 cycles and the concentration of PCR products was cycle-dependent. Raw milk samopes added L monocytogenes cells gave negative results. However, these samplers gave a single 70-bp band by pretreatment of pronase, and PCR products were detected with $10^1$ cells of L monocytogenes. To detemine the most sensitive culture protocol to use in conjunction with the PCR assay, raw milk samples were inoculated with L monocytogenes at concentrations ranging from 1 to $5.7{\times}10^4CFU/ml$. PCR assays from Listeria enrichment broth(LEB) containing raw milk samples added L monocytogene EGD could dtect 10 cells in pronase-pretreated samples without incubation, and 1 cell of L monocytogenes in both 12 hr and 24 hr incubation, respectively. Isolation raw of PCR assays was similar to that of classical culture methods, but required time for detection of L monocytogenes could remarkably be reduced compare to culture methods.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권2호
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• pp.73-77
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• 1992

The effect of a nisin-producing Lactococcus lactis spp. lactis (L. lactis) on the growth and attachment of Listeria monocytogenes Scott A and Brie 1 on stainless steel and their growth in Brain Heart Infusion broth was determined. Viable cells of Listeria decreased rapidly after 9~12 hr of incubation at $21^{\circ}C$ and after 6~9 hr of incubation at $32^{\circ}C$ in the presence of L. lactis. The number of L. monocytogenes Scott A attached to stainless steel in pure culture was $2.5{\times}10^3/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}2.3{\times}10^3/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$ after 48 hr of incubation, but was only $10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}1.1{\times}10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$ in the presence of L. lactis. Results from L. monocytogenes strain Brie 1 were similar to those from strain Scott A. The population of L. monocytogenes Scott A which attached to stainless steel with previously adherent L. lactis was $1.8{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}8.2{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$, whereas the population attached to sterile stainless steel was $1.2{\times}10^3/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}2.1{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$. For L. monocytogenes Brie 1, the attached population of the control was $1.6{\times}10^4/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}3.2{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$, and on stainless steel with adherent L. lactis, it was $1.1{\times}10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}6.9{\times}10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$. Surface adherent L. lactis was less inhibitory to attachment of L. monocytogenes on stainless steel than a liquid culture inoculum. Listeria attached to stainless steel survived dry storage for 20 days both in the presence and absence of adherent lactococci.

• 한국식품조리과학회지
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• 제12권3호
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• pp.312-319
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• 1996

굴(Crassostrea virginica)과 Weakfish(Cynoscion regalix)를 냉장(6$^{\circ}C$), 빙장($0^{\circ}C$), 부분동결저장(-4$^{\circ}C$) 및 동결저장(-2$0^{\circ}C$)온도에서 45일간 저장하면서 생균수 와 microflora의 변화를 조사하였다. 각 온도에서 저온저장중 굴로부터 255주, Weakfish로부터 240주, 합계 495주를 분리하여 microflora의 변화를 조사하였다. 저장직전의 생선에서 생균수는 굴이 4.9$\times$10/ sup 5/CFU/g, Weakfish가 $1.5\times$$10^4$CFU/$cm^2$였다. 저장직전의 굴에서는 Pseudomonas ll1III/IV가 67%, Vibrio가 20%를 차지하였다. Weakfish에서는 Acinetobacter가 40% Moraxella가 33%로서 주종을 이루었으며 Pseudomonas와 Vibrio는 아주 적은 비율을 차지하였다. 굴의 저온저장중 microflora는 저장온도에 큰 관계 없이 모든 저장온도에서 Pseudomonas lIII/IV-H가 전체 균주의 67.4%, Flavobacterium/Cytophaga가 9.3%, 다음으로는 Vibrio가 6.3%를 차지하였고 약 15%의 세균은 동정하지 못하였다. Weakfish의 저온저장중 microflora는 냉장, 빙장, 부분동결저장한 경우에 비호염성균인 Pseudomonas III/IV-NH가 전체 균주의 60~100%를 차지하였으며 동결저장한 Weakfish에서는 Moraxella가 전체 분리 균주의 40~60%를 차지하였다. 전체적으로 굴에서는 호염성 균주(pseudomonas III/ IV-H와 Vibrio)가 우세하였고 구균류가 분리되지 않았으나 Weakfish에서는 비호염균주(PseudomonasIII/IV -NH와 Moraxella가 우세하였으며 구균류가 4.6% 검출되었다. 저온저장한 굴과 Weakfish에서 Vibrio의 검출률은 굴에서 Weakfish보다 3배 높았으며 Listeria spp. 는 검출되지 않았으나 강한 용혈작용을 가진 균들이 각각 9주, 8주씩 분리되어 주의가 요망된다.

• 한국축산식품학회지
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• 제27권1호
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• pp.127-131
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• 2007

본 연구는 단기 숙성형 생햄의 식중독균 오염 상태와 냉장 및 실온 저장 조건 중 미생물수의 변화를 살펴보기 위하여 실시되었다. 생햄의 등심 원료육에서의 미생물 오염도를 조사한 결과 총균수는 $3.11\;log\;CFU/cm^2$이었고 유산균, Pseudomonas spp., Clostridium perfringens 및 효모와 곰팡이는 모두 2 log 미만이었으나 Enterobacteriaceae가 3.11 log로서 주종균이었다. 생햄 원료 및 10과 $25^{\circ}C$에서 저장 된 제품에서 Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes와 Escherichia coli O157:H7 등 6가지 식중독균은 발견되지 않았다. 생햄의 초기 총균수는 3.06 log CFU/g이었으며 90일 후에도 균수 증가는 미미하여 $10^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에서 각각 4.6과 4.69 log CFU/g이었다. 생햄의 저장 중 주 종균은 유산균과 Staphylococcus균이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제35권1호
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• pp.97-102
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• 2003

Cook-chill 제품의 원료로 사용하는 시금치와 수세한 시금치에 대해 Aeromonas hydrophila, Escherichia coli O157:H7, Plesiomonas shigelloides, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus, Campylococcus spp., Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus 등 12종류의 병원성세균의 존재 여부를 확인하였다. 이들 시금치로부터 4종의 병원성세균을 분리하여 API kit와 ATB 자동 동정기를 포함한 형태학적 및 생화학적 방법에 의해 동정하였다. MacConkey agar에서 분리된 균은 그람 음성 간균으로 glucose를 이용하여 gas를 생성하며, lactose 음성, sucrose 양성, lysine 양성으로 ATP system에서 A. hydrophila 종에 대해 99.9%의 상동성을 보였다. Cereus Selective agar에서 분리된 균은 그람 양성 간균, 포자 형성균으로 catalase 양성, mannitol 음성, lecithinase 양성, Simmon's citrate 음성, $NO_2$ 생성 양성, arginine 양성균으로 ATB system에서 B. cereus 종에 대해 99.8%의 상동성을 보였다. Clostridium Perfringens agar에서 분리된 균은 그람 양성 간균, 혐기성균으로 포자를 형성하며, mannitol 양성, lecithinase 양성으로 ATB system에서 C. perfringens 종에 대해 99.9%의 상동성을 보였다. Baird-Parker agar에서 분리된 균주는 그람 양성 구균으로 mannitol, lecithinase, lactose, clumping factor, coagulase 및 hemolysin 양성, xylose 음성으로 ATB system에서 S. aureus 종에 대해 97.8%의 상동성을 보였다. Salmonella spp., E. coli O157:H7, Y. enterocolitica를 포함한 다른 병원성세균은 분리되지 않았다. 시금치에서 분리한 S. aureus 5균주 중 2균주는 SET-RPLA kit에서 enterotoxin type A를 생성하였고 3균주는 enterotoxin을 생성하지 않았다. B. cereus 5균주는 CRET-RPLA kit에서 모두 enterotoxin을 생성하였다.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권6호
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• pp.1368-1371
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• 2008

In this study, 50 rump samples of raw beef obtained from local Korean supermarkets were analyzed to survey microbial distributions. As results, mesophilic microorganisms ranged from $(1.4{\pm}0.01){\times}10^2$ to $(1.6{\pm}0.05){\times}10^5\;CFU/g$, and total coliforms ranged from 0 to $(1.3{\pm}0.04){\times}10^4\;CFU/g$. Major foodborne pathogens, including Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:H7, and Salmonella spp., were not found among the samples. However, Staphylococcus aureus was isolated with 4% frequency. Other isolated microorganisms included Enterobacter amnigenus (4%), Enterobacter cloacae (24%), E. coli (24%), Listeria innocua (8%), Staphylococcus saprophyticus (56%), Staphylococcus xylosus (10%), and Staphylococcus warneri (8%).

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제30권4호
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• pp.303-308
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• 2015

본 연구는 경기도, 인천 및 서울 지역에 있는 50 곳의 가정 내 주방을 대상으로 미생물학적 오염 정도에 대해 조사하여 가정 내 주방 위생 관리 실태를 평가하고자 하였다. 행주, 냉장고 칸, 도마의 대장균군과 다양한 병원성 미생물의 존재 여부에 대한 실험을 실시하였다. 주방기구의 대장균군을 분석한 결과, 행주는 $4.8{\pm}1.84log\;CFU/100g$, 검출률 94.0% (50건 중 47건)의 값을 나타내었고, 냉장고 칸은 $4.11{\pm}1.65log\;CFU/100cm^2$, 검출률 96% (50건 중 48건), 도마는 $4.04{\pm}1.53log\;CFU/100cm^2$, 검출률 90.0%(50건 중 45건)로 나타났다. 병원성 세균의 오염 실태를 조사한 결과, E. coli는 행주에서 6.0%, 냉장고 칸에서 2.0%의 검출률을 보였으며, Listeria monocytogenes 같은 경우에는 냉장고 칸에서 4.0%의 검출률을 보였다. Salmonella spp.과 Campylobacter jejuni의 경우에는 모든 시료에서 검출되지 않았으나 Staphylococcus aureus의 경우에는 행주, 도마, 냉장고 칸에서 각각 42.0%, 24.0%, 28.0%로 모두 높은 검출률을 보여 위생관리 소홀의 심각성을 나타내었다. 가정 내 주방용품 및 기구의 미생물학적 분석 결과 전반적으로 위생상태가 불량한 것으로 평가되었으며 행주 및 도마, 냉장고 칸에서 위생지표세균인 대장균군과 병원성 세균인 황색포도상 구균의 높은 검출률을 보여 가정 내 주방의 위생관리가 잘 되고 있지 않음을 시사하였다. 본 연구를 통해 가정 내 주방에서의 위생 관리와 사용실태에 대한 인식이 변화되어 가정에서도 위생 관리의 중요성이 강조되어야 할 것이다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제22권4호
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• pp.388-394
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• 2007

본 연구는 현행 식품공전상 제시되어 있는 식중독균 분리배지의 평가를 위해 Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus의 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 Broth와 Food에서 시험하였다. Food는 닭고기, 쌀, 돼지고기, 고등어를 대상으로 5가지 식중독균을 접종후 균주의 recovery를 확인하였고. Broth는 5가지 식중독세균용 29가지 분리 선택배지를 사용하였다. Broth에서는 각 세정균에 대한 분리배지들 간에 유의적인 차이가 없었으나(P<0.05), Food에서는 그 차가 크지는 않았으나, 분리선택배지간의 분리능에 통계적 유의차가 존재하였다. 식품공전에 등재된 전통적인 분리 선택배지에서 분리된 균수가 Chromogenic 배지 등 새로운 선택배지에서 분리된 균수보다 많았다. 국제적으로 등재된 배지간의 선택성의 차이가 존재하였으며, 추후 다양한 배지가 식품공전에 등재되기 위해서는 추가 연구가 필요하다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제13권4호
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• pp.388-393
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• 1998

시장개방화로 수입쇠고기의 물량은 급증하여 최종 유통과정에서 수입쇠고기가 한우로 판매되어 소비자가 피해를 보는 등 사회적 물의를 일으키는 경우가 종종있다. 따라서 본 연구에서는 한우와 수입쇠고기의 과학적 판별을 위하여 시중에 유통 중인 한우와 수입쇠고기를 최근 유전자 기법인 PCR-RAPD를 이용하여 연구하였으며 아울러 위생에 대한 안전성 문제를 점검하기 위하여 장관출혈성 대장균과 식중독 세균에 대한 미생물 시험을 실시하였다. PCR 분석에 사용된 DNA 증폭조건은 $1{\times}Taq$ polymerase buffer, 1.5 mM $MgCl_2,\;50\;\mu\textrm{M}$ dNTP, 100ng primer, 2.5 unit Taq polymerase(perkin Elmer AmpliTaq), 5~20 ng template DNA이며 최종 반응용액은 $50\;\mu\textrm{\ell}$이다. 증폭산물의 크기는 대개 0.5 kbp~2.0kbp 사이의 범위에서 검출되었다. 수입 쇠고기에서만 DNA 크기가 약 1.2kbp인 유전자 표지인자가 확인되었으며 이 유전자 표지인자의 확인으로 한우와 수입쇠고기가 90%이상 구별되었으며 이는 한우 육간의 품종판별에 유용하리라 생각된다. 위생 시험 결과 최근 사회적으로 문제가 있었던 장관출혈성 대장균 O157:H7, O26, 등을 비롯하여 주요 식중독균인 Salmonella spp. 과 Listeria monocytogenes은 전혀 검출되지 않았다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제26권2호
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• pp.114-119
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• 2011

본 연구에서는 신선편의 채소와 과일에서 주로 검출되는 대장균(E. coli Ol577:H7), 리스테리아(L. monocytogenes), 살모넬라(Salmonella, spp.), 형색포도상구균(S. aureus)을 검출하고 동정할 수 있는 real time PCR 방법을 melting curve 분석을 활용하여 single tube 반응으로 두 종의 식중독균을 동시 검출하는 방법을 개발하고자 하였다. 대장균의 ${\beta}$-glucuronidase (uidA), 황색포도상구균의 thermonuclease (nuc), 리스테리아의 hemolycin (hly), 살모넬라의 tetrahionate reductase (ttr) 를 특이적으로 검출할 수 있는 4종의 프라이머 세트에 대한 real-time PCR의 melting curve 분석을 통하여 황색포도상구균과 대장균 동시분석 시 $T_m$ 값이 $80.6{\pm}0.9^{\circ}C$와 $86.9{\pm}0.5^{\circ}C$, 리스테리아와 살모넬라 동시분석 시 Tm 값이 $80.4{\pm}0.6^{\circ}C$와 $88.1{\pm}0.11^{\circ}C$로 확인하였고, 그 결과 정제되어진 각 식중독균의 genomic DNA를 주형으로 한 duplex real-time PCR 방법이 uniplex real-time PCR 방법과 마찬가지로 10 genome equivalents 까지 검출할 수 있는 민감도를 나타내었다. 또한, 양배추에 네 종의 식중독균을 접종하고, 증균배양 없이 DNA를 추출하여 duplex real-time PCR 을 수행한 결과 모든 식종목균에서 $10^3$ CFU/g의 검출 한계를 나타내었다. 결과적으로 개발된 melting curve 분석을 이용한 duplex real-time PCR 방법은 식품안전 증진을 위한 시간, 노동력, 비용 절감에 있어서 유효한 방법이 될 것으로 판단된다.