Three pork fabrication processing were examined for isolation and serotyping of Listeria monocytogenes. Three hundred thirty samples were collected from gloves, knife sharpeners, knives, cutting boards, conveyer belts, skinning machines, working room air, pig carcasses, and cut meat. Among the 234 samples taken from processing environment, the isolation rates of Listeria monocytogenes and other Listeria spp. were 17.5%, 34.2% respectively. Isolation rates of Listeria monocytogenes from different specimens during processing were 20.8% in gloves, 21.3% in knife sharpeners, 14.6% in knives, 20.8% in cutting boards, 28.6% in conveyer belts, 16.7% in skinnig machines. Listeria monocytogenes and other Listeria spp. were not detected in working room air. Isolation rate of Listeria monocytogenes 14.6% in pork was increased compared to that of 8.5% in pig carcasses (p<0.05). The serovars of 41 isolates from processing environment were 4b 36.6%, 1/2a 24.4%, 4ab 17.0%, 4a 4.9%, 1/2c 2.4%, and 4c 2.4%. The serovars of 4b, 1/2a, 4ab were detected from carcassess and cut meats.
Listeria (L.) monocytogenes in samples could not be detected occasioally by faster growth of other Listeria spp. especially L. innocua. The aim of this study was to develop the differential media and multiplex polymerase chain reaction (PCR) assays for the rapid detection of L. monocytogenes. L. monocytogenes colonies were characterized by their ${\beta}$-hemolysis with fluorescence under 366 nm UV light on the Listeria hemolysis agar (LHA). L. innocua, a species commonly present in foods, did not produce ${\beta}$-hemolysis on LHA. Therefore, one or more colonies of L. monocytogenes were easily distinguished from large populations of L. innocua. The multiplex PCR assays were developed to distinguish from L. monocytogenes and other Listeria spp. with two pairs of primers. The primers were designed in 16S rRNA and listeriolysin O gene for specific amplification of all members of the genus Listeria and L. monocytogenes, respectively. The multiplex PCR assays produced 560 and 938 bp products in L. monocytogenes; only 938 bp products in the genus Listeria. The multiplex PCR assays could detect as little as 50 pg of L monocytogenes DNA. These results indicated that the differential media and multiplex PCR assays might be useful diagnostic tools for the rapid detection of L. monocytogenes.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.31
no.2
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pp.333-337
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2002
To develope food preservative, antimicrobial activities of Pinus densiflora (PD) ethanol extract against Listeria monocytogenes Scott A. Listeria monocytogenes Brie I and Listeria monocytogenes ATCC 19111 were investigated. The ethanol extracts of PD showed strong antimicrobial activities on Listeria monocytogenes. The crude ethanol extracts of PD were further fractionated by ether, ethyl acetate and butanol. The ether fraction from ethanol extract showed the strongest antimicrobial effects on Listeria monocytogenes in tryptic soy broth containing 40 mg/mL ether fractions compared with other fractions. The effect of ethanol extract of pinus densiflora against Listeria monocytogenes culture for growth stage in tryptic soy broth at 35$^{\circ}C$ showed the strongest antimicrobial activites for lag phase. The morphological changes of the cells were observed with transmission electron microscope (TEM) and scanning electron microscope (SEM) and the cells were injured by treatment of 40 mg/mL ethanol extract of Pinus densiflora.
Monitoring of Listeria monocytogenes, the causative agent of listeriosis, in food is inportant for public health. The Korean Food Standards Codex has adopted a 'zero-tolerance' policy for L. monocytogenes. The standard detection method of L. monocytogenes is based on enrichment. Thus, proper enrichment methods need to be instituted to ensure quality control of the detection procedures. In this study, the growth of L. monocytogenes and Listeria innocua as a mixed culture in Listeria enrichment broth (LEB) was monitored during artificial contamination of enrichment culture. We confirmed competitive growth or interspecies inhibitory activity of L. monocytogenes and L. innocua. Interspecies growth differences and the inhibitory activity of different inoculation and mixtures L. innocua against L. monocytogenes were examined. The concentration of L. monocytogenes must be 2.0 log CFU/mL or more than L. innocua to grow better than L. innocua. It is known that Listeria spp. and L. monocytogenes show growth difference during LEB, resulting in the risk of false-negative results. The inhibition of L. monocytogenes by L. innocua was always observed when present at lower concentrations. However, it was confirmed that L. innocua suppressed when L. monocytogenes was present at a higher concentration. Therefore if a mixture of Listeria spp. is present, detecting L. monocytogenes is difficult. Thus, a new enrichment broth to improve the detection rate of L. monocytogenes is needed.
Listeria spp. were isolated from a total of 402 naturally contaminated domestic ready-to-eat (RTE) vegetable samples by the conventional Food and Drug Administration protocol and confinned by API-Listeria kit. Also, the susceptibility to 12 antibiotics, polymerase chain reaction (PCR) assay for virulence gene of pathogenic Listeria monocytogenes isolates, and in vitro virulence assay using myeloma and hybridoma cells from murine and human sources were tested. Among the samples, 17 samples (4.2%) were found to be contaminated with Listeria species. Among the 17 strains of Listeria spp. isolates, only 2 strains (11.8%) of L. monocytogenes and 15 strains (88.2%) of L. innocua were identified. Antibiotic susceptibility test showed that the Listeria spp. isolates were very susceptible to the antibiotics tested, except for nalidixic acid. Among 17 strains of Listeria spp., PCR analysis showed that 2 strains of L. monocytogenes isolates proved to have a virulence hly gene, but none of L. innocua had the hly gene. Also, hybridoma Ped-2E9 cells assay showed that only L. monocytogenes isolates killed approximately 95-99% hybridoma cells after 6 h, but L. innocua isolates had about 0-5% lethal effect. These results indicate that PCR assay with hly primer or hybridoma Ped-2E9 cells assay could be used as a good monitoring tool or in vitro virulence test for L. monocytogenes.
Frequent outbreaks of foodborne illness demand the need for rapid and sensitive methods for detection of these pathogens. Recent development of biosensor technology has a great potential to meet the need for rapid and sensitive pathogens detection from foods. An antibody-based fiber-optic biosensor and an automated reagents supply system to detect Listeria monocytogenes were developed. The biosensor for detection of Listeria monocytogenes in PBS and bacteria spiked food samples was evaluated. The automated reagents supply system eliminated cumbersome sample and detection antibody injection procedures that had been done manually. The biosensor could detect $10^4$ cfu/ml of Listeria monocytogenes in PBS. By using the fiber-optic biosensor, $2x10^8$ cfu/ml of Listeria monocytogenes in the food samples were detectable.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.23
no.2
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pp.293-297
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1994
The effect of organic acids on growth and heat resistance of Listeria monocytogenes Scott A were investigated. The growth of L. monocytogenes was inhibited in Tryptic Soy Broth(TSB) with 0.1 or 0.2% of acetic , tartic , propionic , citric and lactic acid at 35$^{\circ}C$, respectively. The growth of l. Monocytogenes did not occur in TSB with 0.2% of acetic acid or propionic acid during 48h of incubation. The heat resistance of L.monocytogenes was affected by kind of organic acid, ph and heating substrate. L.monocytogenes showed more heat resistant in TSB with various organic acids than in 0.1M sodium phosphate with the same organic acids. Heat resistance decreased as pH of heating substrate decreased . Surface-adherent microcolony was more heat resistant than planktonic cell of L. monocytogenes. Propionic and lactic acids more affected on heat resistance of L.monocytogenes than acetic , tartaric and citric acids.
This study was carried out to investigate the distribution and characteristics of Listeria monocytogenes isolated from frozen Mandoo and pizza in 1998. A total 72 samples were examined and USDA, FDA and modified cold enrichment methods were used for the detection of Listeria spp. Overall prevalence of L. monocytogenes in frozen foods was 9.7% and L. monocytogenes was isolated from 11.1% of frozen Mandoo and 5.6% of frozen pizza. The highest detection rate of Listeria spp. in frozen Mandoo was found at USDA method and the serotype of L. monocytogenes isolates was 4. Isolated L. monocytogenes was confirmed by PCR method with Hly 1 and 2 as primers. It would be necessary to develop more rapid and specific method to isolate and confirm L. monocytogenes from foods because USDA and PCR methods used in this study took 3-4 days. D value of L. monocytogenes isolate in tryptic soy broth was 49.2 sec at $60^{\circ}C$ and 8.8 sec $at\;65^{\circ}C$, and D value of L. monocytogenes in foods with high distribution rate of Listeria spp. would be necessary to evaluate for the safe use of frozen foods.
The polymerase chain reaction (PCR) amplification technique was used for comparison of Listeria monocytogenes serotypes. PCR primers for the fragment of invasion-associated protein (iap) gene were highly specific for all the serotypes of L. monocytogenes. Other Listeria spp., such as Listeria ivanovii and Listeria innocua were not produced the PCR fragments by above primer set. The nucleotide sequences of PCR products showed high homologies in comparison of all the isolated serotypes except unknown type II-2. The deduced amino acid sequences of the PCR products also showed similar to one another. The various region of the PCR products, called a Thr-Asn repeat region was presented. All of isolated L. monocytogenes serotypes possessed 16 to 20 Thr-Asn repeats.
Highly lethal Listeria monocytogenes, causing bromatoxism through vegetables, dairy products, meat products and shellfish etc, was examined for possible contamination in market beef. USDA, FDA, Malthus and Modified Cold Enrichment methods were used for the detection of Listeria spp.. Samples of domestic and imported market beef were collected from local meat shopsat Seoul, Korea. Total two hundreds and six of Listeria spp. were isolated and identified from beef. Among 206 isolates, the number of L. welshimeri was one hundred and twenty-one(44.8%). The numbers of isolated L. innocua, L. murrayi, L. monocytogenes, L. grayi, L. seeligeri, and L. ivanovii were 49(18.1%), 14(5.2%), 12(4.4%), 6(2.2%), 2(0.7%), and 2(0.7%), respectively. Detection rates of Listeria spp. varied among four methods. The highest detection rate of Listeria spp. in market beef was found at USDA method and that of L. monocytogenes was found at Malthus method.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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