23종의 amino acid와 fish oil과의 갈변 반응에서 Aw 및 온도의 영향을 조사한 결과 Aw 0.33에서 Aw 0.85에서 3가지 형태를 보였다. Type I은 Aw 0.33과 Aw 0.95에서의 갈변도가 Aw 0.52와 0.75 보다 높은 값을 나타낸 것이며(phenylalanine, trans-4-hydroxy-L-proline, me0thionine, valine), Type II는 수분활성도가 증가할수록 갈변도가 감소한 것이며(poline, leucine, isoleucine, arginine), Type III은 Aw 0,33과 0.95 보다는 Aw 0.52와 0.75에서 높은 갈변도를 나타냈다(tryptophan, cystein, threonine, lysine). 온도에 대한 갈변도의 정도는 높은 온도 의존도를 보였는데 특히 phenylalanine, valine, trans-4-hydroxy-proline 및 methionin이었다. Activation energy는 8~40kcal/mole이었고, $Q_{10}$ 값은 2~10이었다.
An Actinomycetes strain JB isolated from Mt. Hanla had a strong antimicrobial activity against gram positive bacteria and tumor cell growth inhibition. Especially, it couldn't degrade starch and casein as organic compounds. It was resist on lincomycin and rifampicin. The spore mass of strain JB which was arethrospore was white. DAP of the cell wall was L, L-DAP. Antimicrobial material was heat stable, dissolved in ethyl acetate, and not dissolved in butanol. In the pressnce of 0.1% phenol and 4% sodium chloride, strain JB could grow, but it didn't growth at below $10^{\circ}C$. Strain JB didn't use dextran, sodium acetate and sodium citrate as sole carbon source and L-cystein and L-thereonine as nitrogen source. The filtered broth of strain JB had the antimicrobial activity against gram positive bacteria, especially Staphylococcus aureus (ATCC 65389) and the growth inhibition of tumor cell line.
Cysteine desulfhydrase (EC 4.4.1.1.) was purified from the culture supernatant of Streptomyces albidoflavus SMF301 by hydroxyapatite, gel filtration and Resource Q ion-exchange chromatography with a purification fold of six identical subunits. The enzyme was stabilized by dithiothreitol and pyridoxal 5'-phosphate during the purification procedures. The optimum pH and temperature were pH 8.6 and 35$^{\circ}C$, respectively. The N-terminal amino acid sequence was identified as A-P-L-P-T-A-D-V-R-S-D-P-G-Y-R-E-W-L-G-E-A-V. The purified cystein desulfhydrase had a high substrate specificity toward cysteine, and exhibited no cystahionine $\gamma$-lyase activity. The $K_m$ value for cysteine was determined to be 0.37 mM.
Reduced thiols were important compounds for the maintenance of leukemia and lymphoma cell survival (and growth). In the course of examining the microenvirn-mental effects on lymphoma and leukemia cell growth, we found that cysteine suppressed apoptosis in these cells. In a present study, in order to investigate the role of cystein on the suppression of apoptotic cell death, we used CS21, P388, and L1210 cell lines. The addition of BSO, an inhibitor of glutathione synthase, induced apoptosis of these cells by blocking the cellular uptake of cysteine in CS21 cells. Although L1210 cells underwent apoptosis without thiol compounds, the addition of these compounds suppressed the apoptosis and promoted the growth or L1210 cells. When specific inhibitors of caspase3-like proteases, but not caspase1-like proteases, were activated during the L1210 cell apoptosis but the addition of thiol compounds suppressed the activation of caspase3-like proteases. These results suggest that reduced thiols including cysteine play an important role in the suppression of cell apoptosis by inhibiting the activation of caspase3-like proteases.
Thermostable asparaginase was purified to homogeneity from mesophilic Strepfomyces lincolnensis M-20 by 30${\sim}$70% ammonium sulfate precipitation and asparagine-Sepharose CL 6B affinity column chromatography, The apparent molecular mass of L-asparaginase by SDS-PAGE was found to be 47 kDa, whereas by its mobility on Sephacryl S-300 column was around 180 kDa, indicating that the enzyme at the native stage acts as tetramer, The purified enzyme showed a single band on acrylamide gel electrophoresis. The optimum pH and temperature were pH 9.5 and 55${\circ}$C, respectively. Chemical modification experiments of purified asparagines implied the existence cystein residue located at or near active site. Purified asparaginase retained the 85% of the initial activity after incubation at 90${\circ}$C for 30 min. A correlation between themostability and resistance to proteolysis of commercial asparaginase and purified asparaginase from Strepfomyces lincolnensis M-20 was investigated. Purified thermostable asparaginase was resistant to trypsin and chymotrypsin treatment, while the commercial asparaginase was not themostable and was susceptible to proteolytic treatment with trypsin and chymotrypsin.
D,L-ATC의 L-cysteine으로의 생물학적 전환에 있어 균체를 이용할 때, 계면활성제의 영향, 효소의 안정성 및 연속생산공정중의 고정화 균체 반응기의 안정성에 대하여 분석하였다. 계면활성제의 첨가없이 균체만을 이용할 때 반응은 매우 미미하게 이루어졌으나 SDS와 Triton X-100을 첨가할 때 cell-free 조효소액을 이용하는 경우와 비슷한 정도의 결과가 얻어졌다. 효소 활성은 $30^{\circ}C$에서 7시간 저장후 50 저하되었으며 질소가스하의 혐기적인 조건에서는 활성저하가 거의 일어나지 않았다. 이와 같은 효소의 불활성화는 효소에 대한 산소의 작용으로 사료되었다. 그러나, alginate로 고정화한 균체를 이용한 연속반응공정에서 혐기적으로 조건하에서 150시간 내에 대부분의 활성을 잃어버렸으며, L-cysteine 저해제인 hydroxylamine을 첨가할 때 효소활성이 급속히 감소되었다.
본 연구에서는 글루타치온의 생산 공정을 개발하기 위해 효모의 성장특성, 글루타치온의 생산성 및 공정 모니터링에 관하여 조사하였다. 초기 pH가 4인 경우 40 mg/L 정도의 높은 글루타치온이 생산되었으며 배양온도에 따른 글루타치온의 생산은 3$0^{\circ}C$에서 가장 높게 나타났다. 그리고 최소 배지에 첨가한 시스테인은 배양 12시간에 넣었을 때 글루타치온의 생산성이 높게 나타났다. 생물 반응기를 이용한 회분식 배양에서 기질 농도에 따른 S. cerevisiae 성장 특성 및 글루타치온 생산은 글루코스 농도 20 g/L에서 글루타치온 생산량이 55 mg/L로 가장 높았다. 최소 배양액에 배양 초기에 0.5 % (v/v) 글라이신과 글루탐산을 각각 첨가하고 배양 11시간에 시스테인을 0.5% (v/v) 추가로 첨가한 경우에 글루타치온의 생산량이 많았다. 회분식 배양 후 기질을 첨가하는 유가식 발효 공정에서는 반응기내 글루코스 농도가 0.5 g/L 이하로 유지되도록 글루코스를 계단식으로 공급하였을 때 글루타치온은 약 102 mg/L로 높은 생산량을 나타내었다. 2차원 형광 센서를 이용하여 글루타치온 생산 공정의 온라인 모니터링은 배양액의 배지 조성이나 성장 특성 등 배양기내의 환경 변화에 따라 형광 영역 및 세기가 다르게 나타났으며 실시간 모니터링 된 형광 데이터는 기질 및 생산물 그리고 균체 성장 등의 각종 공정 변수와 좋은 상관성을 보였다. 따라서 2차원 형광 센서에 의한 모니터링은 글루타치온 대량 생산을 위한 실시간 모니터링에 매우 효과적이라 할 수 있다.
국립원예특작과학원에서 분양받은 토마토 18계통을 공시하여 재분화가 잘되는 적정 품종을 탐색한 결과, 계통번호 2001-58에서의 재분화율이 93%로 양호하였다. 또한 식물체로의 재분화 과정에서 보여 지는 갈변현상과 phenolic compound에 의한 식물조직의 괴사현상을 막기 위하여 항산화제인 ascorbic acid와 cystein을 단용 또는 혼용으로 첨가한 후 토마토 재분화에 미치는 영향을 살펴 본 결과, ascorbic acid $200{\sim}300\;{\mu}M/L$ 처리구에서 줄기형성율 및 생체중이 증가되는 현상을 관찰할 수 있었다. 토마토 엽록체 형질전환체 선발을 위해 spectinomycin의 적정 농도를 살펴본 결과, 재분화배지에 spectinomycin 20~25 mg/L 농도가 첨가되어진 처리구에서 재분화가 거의 이루어지지 않았다. 토마토 엽록체 형질전환을 위해 토마토 엽록체 게놈 일부를 분리하여 염기서열을 분석하여 담배와 비교 분석한 결과, homology가 매우 높음을 알 수 있었다. Homologous recombination에 의한 엽록체 형질전환이 되기 위해서 분리한 토마토 엽록체 게놈 일부를 border sequence로 이용하였고, transient assay를 위해 GFP 유전자가 포함된 토마토 엽록체 형질전환용 운반체 pKRT22-AG를 제작하였다. Bombardment을 한 후 원형질체를 나출하여 공초점 현미경하에서 관찰한 결과 엽록체 내에서만 GFP가 발현됨을 알 수 있었으며, DNA 농도 $1\;{\mu}g$, $0.6\;{\mu}m$ gold particle 1 mg, target distance 9 cm 조건이 가장 좋았다.
호박씨는 단백질과 지방의 함량이 높고 영양가치가 높아 식품가공 재료로서 널리 이용될 수 있으나 그 동안 과자, 스넥 제품 등의 단순가공 소재로서 이용되어 왔다. 그러므로 호박씨의 소비를 증진시키고 새로운 기능성 식품을 개발하기 위하여 호박씨를 발아 성장시키면서 각 부위의 일반영양성분, 지방산, 아미노산, L-ascorbic acid, $\beta$-carotene의 함량변화를 측정하여 영양학적 가치를 평가하였으며, 발아 성장과정 중 생성되는 고미성분의 구조를 동정하기 위하여 각종 용매 순차 분획, thin layer chromatography, HPLC의 분리과정을 거쳐서 정제한 고미물질을 mass spectrum, $^1$H-NMR spectrum, $^{13}$C-NMR spectrum을 이용하여 동정하였다. 호박씨나물의 중량은 발아 8일에 348.4% 증가하였으며 뿌리와 줄기의 길이는 8일째까지 급격히 증가하였다. 일반영양성분은 머리부분과 줄기부분 모두 단백질과 지질의 함량은 감소하였고 섬유소, 회분, 가용성 무질소물의 함량은 증가하였으며, linoleic acid, oleic acid, palmitic acid, stearic acid가 주요지방산으로 나타났고, palmitic acid는 증가하는 반면 linoleic acid는 점점 감소하는 경향을 보였다. 호박씨나물의 머리부분의 구성아미노산 glycine, alanine, arginine, cystein proline의 순으로 많았으며, 유리아미노산은 arginine, threonine, alanine, glutamine의 순으로 많았다. L-ascorbic acid와 $\beta$-carotene은 발아 성장하면서 점점 증가하는 경향을 보였으며, 머리부분에 생성되는 고미성분은 cucurbitacin glycoside로 판명되었으며, 호박씨에서는 고미성분이 검출되지 않았으나 발아 8일째 머리부분의 고미성분은 42.2mg/kg이 함유되어 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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