Flavin-peptides were purified from pyranose oxidase (EC 1.1.3.10) after tryptic- chymotryptic and tryptic digestion. The spectral and chromatographic properties of these flavin peptides showed that the FAD of pyranose oxidase appears to be bound, by way of the 8${\alpha}$-methylene group, to the N-l position of the imidazole ring of the histidine. Automated sequence analysis showed that the amino acid sequence of the tryptic-chymotryptic flavin-peptide from pyranose oxidase is Ser-Thr-X-Trp and that of the tryptic flavin-peptide is Met-Ser-Thr-X-Trp. (omitted)
The HCL hydrolyzate of the non-histone protein fractionated from the rat liver nuclei which have been incubated inthe presence of S-adenosyl-L-[methyl-$^{14}C$ ]-methionine shows at least four unidentified radioactive peaks on a basic amino acid analysis chromatogram. One of these unknown compounds (designated as compound 3) is also formed by the rat liver homogenated with the exogenous addition of an appropriate protein substrate. Since boiled rat liver homogenate or fresh homogenate in the absence of an exogenous protein substrate failed to form compound 3, its formation can be considered to be enzyme-catalyzed. The enzyme which yields compound 3 shows a preference of protein substrate in the order of reductively methylated hemoglobin > native > histone type II-A. The rat enzyme is nuclear in location associated with chromatin, and exhibits the highest activity in the liver among various rat organs. A compound 3-forming enzyme is also present in Neurospora crassa, since endogenous formation of the compound 3 can be demonstrated with the crude extract of this mold. The chemical identity of compound 3 is not yet known. However, it resisted to the following treatments; 6 N HCL and 0.1 N Na NaOH hydrolysis at $110^{\circ}C$, OR L-amino acid oxidase.
토란으로부터 polyphenol oxidase를 추출하여 Maillard reation products(MRPs)가 토란 PPO에 미치는 영향을 조사하였다. 토란 PPO에 대한 MRPs의 저해 효과는 사용한 기질이 (+)-catechin, catechol인 경우에 높게 나타났다. 그리고 MRPs의 토란 PPO 저해 효과는 당의 종류를 달리하여 생성한 MRPs 중에서 fructose와 glucose로 제조한 MRPs의 첨가시 가장 높았으며, glycine과 glucose의 농도가 높아질수록 저해 효과가 증가하였다. 반응 시간에 따른 MRPs의 저해 효과를 조사한 결과, 반응 시간이 길어질수록 MRPs의 변색 정도가 높아졌으며, 이에 따라서 토란 PPO에 대한 저해 효과도 증가하였다.
녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 대장균(Escherichia coli) 및 포도알균(Staphylococcus aureus)은 기회감염균이다. 또한 이들 세균은 다제내성(Multiple-Drug Resistance, MDR) 세균의 성질을 가지는 것으로 알려져 있다. 녹농균, 대장균, 포도알균에 대한 다양한 효능을 지닌 6가지 발효액의 항균활성을 분석하였다. 발효액을 섭취했을 때 대장균에서 유전적 발현 변화가 일어나는지 알아보기 위해 annealing control primer를 사용하여 유전자발현 분석을 수행하였다. 디스크확산법을 통해 무화과식초와 대봉감식초가 다른 발효액에 비해 억제대의 크기가 가장 크게 나타났고, 토종약초발효소는 항균효과가 없었다. 대장균에 5% 무화과식초를 처리하여 21일간 매일 계대배양하여 Escherichia coli O157:H7 OmpW gene for outer membrane protein W 유전자 발현이 감소하며, Synthetic construct Lao1 gene for L-amino acid oxidase, complete cds 유전자가 발현이 증가함을 확인하였다. 발효액 중에서 특히 무화과식초를 섭취하는 것은 우리 주변에 항상 존재하는 대장균에 대해 방어능력을 더욱 단단하게 가질 수 있음을 의미하며, 나아가 다제내성균에 대한 천연치료제로 유용하게 쓰일 수 있기를 기대한다.
We selected Pleurotus ostreatus from among several edible mushrooms because it has high anti-gout xanthine oxidase (XOD) inhibitory activity. The maximal amount of XOD inhibitor was extracted when the Pleurotus ostreatus fruiting body was treated with distilled water at $40^{\circ}C$ for 48 hr. The XOD inhibitor thus obtained was purified by Sephadex G-50 gel permeation chromatography, ultrafiltration, $C_{18}$ solid phase extraction chromatography and reverse-phase high-performance liquid chromatography with 3% of solid yield, and its XOD inhibitory activity was 0.9 mg/mL of $IC_{50}$. The purified XOD inhibitor was a tripeptide with the amino acid sequence phenylalanine-cysteine-histidine and a molecular weight of 441.3 Da. The XOD inhibitor-containing ultrafiltrates from Pleurotus ostreatus demonstrated dose-dependent anti-gout effects in a Sprague-Dawley rat model of potassium oxonate-induced gout, as shown by decreased serum urated levels at doses of 500 and 1,000 mg/kg, although the effect was not as great as that achieved with the commercial anti-gout agent, allopurinol when administered at a dose of 50 mg/kg.
본 연구는 일반감자와 내부에 적색 또는 보라색 안토시아닌 색소를 함유하는 유색감자에 probiotic 기능을 가진 젖산균을 이용하여 칼로리가 낮고 영양성과 기능성이 뛰어난 젖산발효 감자주스를 제조하여 이들 감자주스의 품질 특성 및 항산화 활성을 측정하였다. 감자주스의 유리당 함량은 발효에 의해 크게 감소하였으며, 특히 glucose의 감소율이 크게 나타났다. 감자주스의 유기산을 분석한 결과, malic acid, tataric acid, citric acid 등 다양한 유기산이 함유되어 있었으며, 발효에 의해 그 함량이 크게 증가함을 알 수 있었다. 유리 아미노산의 함량은 하령은 유의적으로 증가하였으며, 반면 수미는 유의적인 감소를 보였다. 또한 기능성 아미노산인 ${\gamma}$-aminobutyric acid(GABA)가 모든 감자주스에서 높은 함량 검출되었고 특히 자영에서 발효 전후 각각 232.9와 214.7 mg/100 mL로 가장 많은 함량을 나타내었으며, 발효 후 약간 감소하였으나 유의적인 차이는 보이지 않았다. 총 폴리페놀 함량은 유색감자 중 자영주스에서 가장 높았고 하령과 자영에서는 발효에 의해 그 함량이 증가하였으며, 수미와 홍영에서는 감소하였으나 유의적인 차이는 보이지 않았다. Hydroxyl radical 소거능은 모든 감자주스에서 약 90% 이상으로 높게 나타났으며, 발효 후에도 그 활성이 유지되었다. 아질산염 소거능은 자영에서 가장 높게 나타났으며, 발효에 의해 소거능이 크게 감소하였다. SOD 유사활성은 자영주스에서 가장 높게 나타났으며, 하령을 제외하고 발효 후 다소 증가하였으나 유의적인 차이는 없었다. Xanthine oxidase 저해활성은 모든 감자주스에서 약 45%로 유사한 저해활성을 보였으며, 발효에 의한 감소율은 적었다. 이상의 결과, 발효 후 감자주스의 유리아미노산 함량과 아질산염 소거능은 감소하였지만 대부분의 영양성과 기능성이 잘 유지되고 있음을 확인할 수 있었으며, 이로써 기능성 probiotic 효과와 항산화 활성을 갖춘 기능성 음료로써의 이용가능성이 매우 높음을 확인할 수 있었다.
The antiparkinsonian agent l-deprenyl, a selective monoamine oxidase (MAO)-B inhibitor, is metabolized in part to l-methamphetamine and l-amphetamine. l< /I>-Deprenyl was evaluated for amphetamine and methamphetamine-like discriminative stimulus effects in rats and its mechanism of action was investigated. Rats were trained under a 5-response, fixed ratio schedule of stimulus-shock termination or a 10-response. Fixed-ratio schedule of food-presentation which discriminate between d-amphetamine (1mg/kg, i.p.) and saline or d-methamphetamine (1mg/kg, i.p.) and saline in a two-lever, operant conditioning procedure. Full generalization was obtained to d-amphetamine (1~3mg/kg). d-methamphetamine (1~3mg/kg) and l-deprenyl (17~30mg/kg) under both the food presentation and stimulus shock termination schedule. l-Deprenyl has dose-dependent amphetamine-and methamphetamine-like discriminative stimulus properties in rats only at doses of 17 and 30mg/kg. Reversible MAO-B inhibitor, RO 16-6491 didn`t show any amphetamine-like discriminative properties. Aromatic amino acid decarboxylase inhibitor, NSD 1015 decreased % responding of l-deprenyl in the methamphetamine-trained rats under the stimulus-shock termination schedule. SKF-525A produced partial inhibition of methamphetamine-like discriminative effects of l-deprenyl under the food presentation schedule. These results suggest that l-deprenyl has no abuse liability at the therapeutic range but there needs some caution at high doses and furthermore, drug discrimination studies under the food presentation and shock termination schedule are useful for the assessment of abuse liability of psychostimulants.
본 연구에서는 흰쥐 태아 뇌간의 일차 세포배양을 이용하여 중추 serotonin(5-HT) 신경세포의 연구에 적합한 in vitro 모델을 확립하고, 여기에서 5-HT 대사의 전반적인 과정을 살펴보고자 하였다. 배양세포의 5-HT 및 5-hydroxyindoleacetic acid (5-HIAA)함량을 high performance liquid chromatography-electrochemical detection (HPLC-EC)방법 으로 측정함으로써 흰쥐태아(태령 14-15일)뇌간으로 부터 얻은 5-HT 신경세포가 배양상에서 2주까지 발달함을 추적할 수 있었고 아울러 이들 세포에서 5-HT의 합성, 저장, 대사의 각 과정을 몇가지 약물들을 이용하여 확인하였다. 배양 14일에 5-HT의 함량이 13ng/mg protein으로서 성숙한 흰쥐 뇌속에 존재하는 5-HT의 값과 유사하였다. 5-HT 합성의 속도조절효소인 tryptophan hydroxylase(TPH)의 상경적 억제제인 p-chlorophenylalanine (PCPA)처리시 aromatic L-amino acid decarboxylase (AADC)억제제인 3-hydroxybenzylhydrazine NSD 1015보다 5-HT 및 5-HIAA 함량을 더 많이 감소시켰다. TPH의 기질인 tryptophan은 5-HT의 합성을 현저히 (200%) 증가시켰으며 이 증가는 PCPA로 상당히 둔화되었다. 5-HIAA의 변화도 유사한 양상을 보였다. 5-hydroxytryptophan처리시 5-HT 및 5-HIAA 함량이 현저히 증가하였으며 이 증가는 NSD 1015로 거의 차단되었다. 5-HT 대사 경로인 monoamine oxidase (MAO)의 비특이적 억제제인 pargyline과 MAO A의 특이적 억제제인 LY-51641을 처리한 결과 5-HT 함량은 각각 대조군의 295% 및 140%로 증가하여 pargyline이 LY-51641보다 현저한 작용을 나타내었다. 그러나 5-HIAA의 함량은 반대로 현저히 감소하여 pargyline 및 LY-51641에 의해서 각각 대조군의 50% 및 40%의 함량을 나타내었다. 이상의 결과로 보아 5-HT 신경세포는 일차 세포배양상에서 활발한 5-HT대사가 이루어짐을 HPLC-EC 방법으로 확인할 수 있었으며 따라서 본 in vitro system은 중추 5-HT 신경세포에 대한 전반적인 약리 및 독성 연구에 매우 유용하게 사용될 수 있다고 사료된다.
본 연구에서는 P. pastoris를 이용한 유전자 재조합 HBsAg 생산에서 메탄올 유도시 여러 가지 첨가물들의 영향에 대해서 알아보았다. 회분식 배양에서 탄소원으로 글리세롤을 사용하다가 유가식 배양의 공급 탄소원으로 글리세롤이 아닌 당알콜인 sorbitol로 대체하였을 때 단백질 발현이 향상된 결과를 보였다. 또한 메탄올 유도시에 적당량의 아미노산 혼합물 첨가는 세포증식에는 영향이 없었지만 단백질 발현율은 크게 증가시켰다. 계면활성제인 Trition X-100의 첨가는 세포증식과 단백질 발현을 현저히 감소시켰지만, Pluronic F-68를 첨가했을 경우 세포증식의 저해영향 없이 단백질 발현율을 향상시켰다. 배지 부피의 0.01%(v/v)으로 oleic acid를 첨가하면 플라스크 배양에서는 단백질 발현에 긍정적인 효과를 보였으나, 5 L 발효조 배양에서는 메탄올 유도 시간이 지속되면서 첨가하지 않은 경우에 비해 발현율이 낮아지는 결과를 보였다. 마지막으로 trace salts는 첨가량에 따라 세포증식에는 영향이 없으며 단백질 발현에는 소량 trace salts 첨가로 단백질 발현에 긍정적인 효과를 보였다. 하지만 첨가량이 많아질수록 단백질 발현에는 부정적인 영향을 보임을 확인할 수 있었다.
To examine the effective use of seaweeds, sea tangle (Laminaria japonica) was extracted with water and the resultant extracts were fermented with Saccharomyces cerevisiae. Four strains of S. cerevisiae were cultured in aqueous extracts from sea tangle. S. cerevisiae SC-2, which was isolated from a traditional Korean fermented food (Meju), was selected for further study based on the results of a sensory evaluation. No significant differences in proximate compositions, such as moisture, crude protein, crude fat, and crude ash, of the sea tangle extracts before and after fermentation were observed. The reducing sugar decreased as the fermentation period increased, and the contents of some free amino acids were also affected by S. cerevisiae SC-2 fermentation. However, the content of glutamic acid, which is a major taste compound in sea tangle extract, was not affected by fermentation for up to 36 hr by the SC-2 strain. To determine the antioxidant activity of fermented sea tangle extract (fermented for 36 hr by SC-2 strain), the radical scavenging activities of 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), superoxide, and nitric oxide were investigated and xanthin oxidase inhibition assay was performed. The antioxidant activity increased by 8 to 35%. The greatest enhancement of antioxidant activity was seen in the superoxide radical scavenging assay with $100\;{\mu}g/mL$ of raw and fermented sea tangle extract. The anti-inflammatory activity of fermented sea tangle extract was also enhanced. The fermented sea tangle extract showed 34.2% inhibitory activity against nitric oxide synthesis versus 11.9% for raw sea tangle extract at $100\;{\mu}g/mL$ concentration. These results suggest that fermented aqueous extracts from sea tangle are a useful resources.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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