폐흡충의 여러 발육 단계 즉 피낭유충 종숙주 내 성숙단계 충체 및 성충에서 분자량이 각각 28, 27, 22 및 17.5 kDa인 시스테인 계열 단백질 분해효소가 분리 정제되었다. 이 연구는 만성 폐흡충증의 육아종에서 발견되는 충란이 육아종 형성에 관여하는 물질을 분비한다면 그 분비액 중에서는 단백질 분해효소가 중요할 것이라고 가정하고 우선 그 존재를 조사하였으며 이를 부분정제하고 생화학적 특성을 관찰하였다. 실험적으로 개에 폐흡충 피낭유충을 감염시키고, 14주일 후에 개를 포살하여 폐를 분리하였다. 폐를 생리식염수로 씻어 그 세척액에서 충란을 모았다. 그후 해부 현미경하에서 이물질(이물질)을 제거하고 증류수에서 하룻밤 투석하여 충란외부에 묻어 있을 수 있는 숙주 또는 성충의 조직을 제거하였다. 충란을 생리식염수에서 마쇄한 후 원심분리에 의해 충란 조효소(조효소)를 제작하였다. 조효소에는 Cbz-phe-arg-MNA와 Azocoll을 분해하는 단백질 분해효소가 존재하였으며 이 활성은 pH 6에서 가장 높았다. 이 활성은 DTT에 의해 6.5배 증강되었고, 시스테인계 단백실 분해효소의 특이 억제제인 I-64나 IAA에 의해서는 90% 억제되었다. 조효소를 Sephacryl 5-300 HR column을 통과시켜 효소를 부분정제한 결과 분자량이 35 kDa인 시스테인 계열의 단백질 분해효소을 정제할 수 있었다.
Histone deacetylase (HDAC) 억제제가 새로운 항암치료제 후보물질로서 유용성이 높은 것으로 평가되지만, 아직까지 인체폐암세포에 관한 연구는 상대적으로 미미한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 폐암세포에 미치는 HDAC 억제제의 항암작용 기전을 조사하기 위하여 A549 인체폐암세포주를 대상으로 암세포의 증식에 미치는 대표적인 HDAC 억제제인 tichostatin A (TSA)에 의한 영향을 세포주기 조절관련인자 중심으로 조사하였다. TSA의 처리에 의하여 A549 폐암세포의 증식은 처리 농도 의존적으로 억제되었으며, 심한 형태적 변형을 동반하였다. 저농도 처리군에서는 TSA 농도가 증가할수록 세포주기 G1기의 빈도가 증가하였으나, 고농도 처리군에서는 G2/M기에 속하는 세포의 빈도가 증가되었다. 또한 apoptosis 유발의 간접적인 지표가 되는 sub-G1기에 속하는 세포의 빈도 역시 TSA 처리 농도 의존적으로 매우 증가되었다. 이러한 TSA의 A549 폐암세포 증식억제 효과는 cyclins 및 CdkS의 발현 억제, 종양억제유전자인 p53 및 Cdks 억제제인 p21과 p27의 발현 증가와도 연관성이 있었다. TSA의 항암 기전을 규명하기 위해서는 더 많은 연구가 부가적으로 필요하겠지만, 본 연구의 결과들에 의하면 TSA는 강력한 인체폐암세포의 증식 억제 및 항암작용이 있음을 시사하여 준다고 할 수 있다.
한방에서 지혈 및 어혈 제거용으로 사용되고 있는 눈개승마는, 최근 약용 산채로 그 수요가 급증하고 있다. 본 연구에서는 눈개승마의 항혈전 활성을 평가하고자 눈개승마 지상부로부터 에탄올 추출물 및 이의 순차적 유기용매 분획물을 조제하여 이들의 혈액응고 저해활성 및 혈소판 응집저해 활성을 평가하였다. 그 결과, 눈개승마의 에탄올 추출물(0.5 mg/ml)에서 1.4~2.3배의 우수한 TT, PT, aPTT 연장효과를 확인하였으며, 특히 내인성 혈액응고 인자 저해효과가 우수함을 확인하였다. 분획물에서는 ethylacetate 분획에서 가장 우수한 aPTT 연장효과를, butanol 분획에서는 혈액응고 촉진효과를 확인하였다. 혈소판 응집저해 활성평가의 경우, 눈개승마 에탄올 추출물은 임상에서 사용하는 항혈소판제인 아스피린에 필적하는 효과를 나타내었으며, 특히 butanol 분획은 0.25 mg/ml 농도에서 아스피린 0.5 mg/ml 에 해당하는 강력한 혈소판 응집저해능을 나타내었다. 상기의 에탄올 추출물과 활성 분획물들은 0.5 mg/ml 농도까지 인간 적혈구에 대한 용혈활성을 나타내지 않아, 눈개승마가 천연물 유래의 항혈전제로 개발 가능함을 확인하였으며, 특히 상기 활성분획들이 높은 함량의 total polyphenol, total flavonoid, total sugar를 포함함을 고려할 때, 활성물질의 정제시에는 더욱 강력한 항혈전 활성을 나타내리라 판단된다. 본 연구결과는 눈개승마의 항혈전 활성의 최초 보고이다.
Fumonisins are a family of mycotoxins produced by the fungus Fusarium moniliforme which is a common contaminant in corn. Fumonisins are potent inhibitors of sphingosine and sphinganine N-acyltransferase (ceramide synthase), key enzymes in sphingolipid metabolism. The purpose of this study was to provide the evidence that the elevated levels of free sphingoid bases (primarily sphinganine) and depletion of complex sphingolipids were closely related to the inhibition of cell growth in LLC-$PK_1$ cells exposed to fumonisin $B_1$$(\leq 35 {\mu}M)$. Concentrations of fumonisin $B_1$ between 10 and $35 {\mu}M$ were known to inhibit cell growth without cytotoxicity in $LLC-PK_1$ cells (Yoo et al. Toxicol. Appl. Pharmacol. 114, 9-15, 1992). Cells exposed to 35$\mu M$ fumonisin B$_1$ for 48 and 72 hr developed a fibroblast-like (elongated and spindle-shaped) appearance and were less confluent than normal cells. At between 24 and 48 hr after exposure to fumonisin $B_1$ cells were beginning to show the inhibition of cell growth and at 72 hr the number of viable cells in fumonisin-treated cultures was about 50% of concurrent control cultures. During the 24 hr lag period preceding inhibition of cell growth, the free sphinganine levels in cells exposed to $35 {\mu}M$ fumonisin $B_1$ were highly elevated (approximately 230 fold higher than normal cells). The elevated levels of free sphinganine were $435\pm14$$pmoles/{10^6}$ cells at 48 hr and approximately TEX>$333\pm11$$pmoles/{10^6}$ cells in cells exposed to $35{\mu}M$ fumonisin$B_1$ at 72 hr, while the levels of free sphinganine in normal cells were less than 2$pmoles/{10^6}$ cells. Under the same condition, depletion of intracellular complex sphingolipids as a consequence of fumonisin inhibition of de novo sphingolipid biosynthesis and turnover pathway was appeared. Content of free sphingold bases in dividing cells was more elevated than in confluent cells at 24-48 hr after cells were exposed to $20{\mu}M$ fumonisin $B_1$. The dividing cells were showing the inhibition of cell growth at 48-72 hr and $20{\mu}M$ fumonisin $B_1$. The results of this study support the hypothesis that the inhibition of cell growth is very well related to the disruption of sphingolipid metabolism in $LLC-PK_1$ cells.
목적 : Insuln-like growth factor(IGF)-I및 -II는 성장인자로 일군의 IGF-binding protein(IGFBP)에 의하여 그 작용이 조절된다. IGF-I은 백서 신장에서 발견되고 대사효과와 성장효과를 갖고 있다. 이번 연구는 백서에서 신장발육과 허혈성 신손상 후 재생과정 동안에 IGFBP의 발현이 변화하는지를 보고자 한다. 방법 : 태생 15주부터 성숙 할때까지 백서 신장에서 IGFBP 발현의 변화를 알아보기 위해 Northern blotting을 시행하였고, 급성신부전 백서의 신장에서 IGF-IGBP axis의 변화를 보기 위해 Northern blotting과 Immunohisto-chemistry를 이용하였다. 결과 : IGFBP-1과 -3는 태생기에는 거의 발현되지 않다가 출생 후 7일째부터 성숙이 끝날 때까지 점진적으로 증가하였다. 반면에 IGFBP-2와 -5는 태생기에 많이 발현되고, IGFBP-2는 출생 후 7일째까지 IGFBP-5는 30일째까지 높은 농도를 유지하다가 급격히 감소하였다. 한편 IGFBP-4는 태생기에 중등도로 발현되는데 출생 후 증가하기 시작하여 7일째 가장 많이 발현되다가 급격히 감소하였다. 신손상 후 IGFBP의 변화를 보면 IGFBP-1과 -4는 재생기간 동안 3-5배 증가되다가 정상으로 회복된 반면 IGFBP-3와 IGFBP Related Protein-1(IGFBPrP-1) 은 신손상 1일째에는 약간 감소하다가 그후 증가하여 정상보다 약간 높은 수준을 유지하였다. 결론 : 백서 신장에서 신장구조나 기능의 발달, 분화 및 재생에 대한 IGF의 작용을 조절할 수 있는 IGFBP 발현에 현저한 변화가 있었다.
This study was to investigate the effect of apigenin on the bioavailability of paclitaxel after oral and intravenous administration in rats. The effect of apigenin on P-glycoprotein (P-gp), cytochrome P450 (CYP)3A4 activity was evaluated. The pharmacokinetic parameters of paclitaxel were determined in rats after oral (40 mg/kg) or intravenous (5 mg/kg) administration of paclitaxel with apigenin (0.4, 2 and 8 mg/kg) to rats. Apigenin inhibited CYP3A4 activity with 50% inhibition concentration ($IC_{50}$) of 1.8 ${\mu}M$. In addition, apigenin significantly inhibited P-gp activity. Compared to the control group, apigenin significantly increased the area under the plasma concentration-time curve (AUC, p<0.05 by 2 mg/kg, 59.0% higher; p<0.01 by 8 mg/kg, 87% higher) of oral paclitaxel. Apigenin also significantly (p<0.05 by 2 mg/kg, 37.2% higher; p<0.01 by 8 mg/kg, 59.3% higher) increased the peak plasma concentration ($C_{max}$) of oral paclitaxel. Apigenin significantly increased the terminal half-life ($t_{1/2}$, p<0.05 by 8 mg/kg, 34.5%) of oral paclitaxel. Consequently, the absolute bioavailability (A.B.) of paclitaxel was significantly (p<0.05 by 2 mg/kg, p<0.01 by 8 mg/kg) increased by apigenin compared to that in the control group, and the relative bioavailability (R.B.) of oral paclitaxel was increased by 1.14- to 1.87-fold. The pharmacokinetics of intravenous paclitaxel were not affected by the concurrent use of apigenin in contrast to the oral administration of paclitaxel. Accordingly, the enhanced oral bioavailability by apigenin may be mainly due to increased intestinal absorption caused via P-gp inhibition by apigenin rather than to reduced renal and hepatic elimination of paclitaxel. The increase in the oral bioavailability might be mainly attributed to enhanced absorption in the gastrointestinal tract via the inhibition of P-gp and reduced first-pass metabolism of paclitaxel via the inhibition of the CYP3A subfamily in the small intestine and/or in the liver by apigenin. It appears that the development of oral paclitaxel preparations as a combination therapy is possible, which will be more convenient than the i.v. dosage form.
Bacterial cellulose (BC) has played important role as new functional material for food industry and industrial products based on its unique properties. The interest in BC from static cultures has increased steadily in recent years because of its potential for use in medicine and cosmetics. In this study, we investigated culture condition for BC production by Acetobacter sp. F15 in static culture. The strain F15, which was isolated from decayed fruit, was selected on the basis of BC thickness. The optimal medium compositions for BC production were glucose 7%, soytone 12%, $K_2HPO_4$ 0.2%, $NaH_2PO_4{\cdot}_2H_2O$ 0.2%, lactic acid 0.05% and ethanol 0.3%, respectively. The strain F15 was able to produce BC at $26^{\circ}C-36^{\circ}C$ with a maximum at $32^{\circ}C$. BC production occurred at pH 4.5-8 with a maximum at pH 6.5. Under these conditions, a maximum BC thickness of 12.15 mm was achieved after 9 days of cultivation; this value was about 2.3-fold higher than the thickness in basic medium. Scanning electron micrographs showed that BC from the optimal medium was more compact than plant cellulose and was reticulated structure consisting of ultrafine cellulose fibrils. BC from the optimal medium was found to be of cellulose type I, the same as typical native cellulose.
Yoo, Han-Seok;Chung, Kang-Hyun;Lee, Kwon-Jai;Kim, Dong-Hee;An, Jeung Hee
Nutrition Research and Practice
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제11권3호
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pp.190-197
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2017
BACKGROUND/OBJECTIVES: Gallus gallus domesticus (GD) is a natural mutant breed of chicken in Korea with an atypical characterization of melanin in its tissue. This study investigated the effects of melanin extracts of GD on osteoblast differentiation and inhibition of osteoclast formation. MATERIALS/METHODS: The effects of the melanin extract of GD on human osteoblast MG-63 cell differentiation were examined by evaluating cell viability, osteoblast differentiation, and expression of osteoblast-specific transcription factors such as bone morphogenetic protein 2 (BMP-2), small mothers against decapentaplegic homologs 5 (SMAD5), runt-related transcription factor 2 (RUNX2), osteocalcin and type 1 collagen (COL-1) by reverse transcription-polymerase chain reaction and western blotting analysis. We investigated the inhibitory effect of melanin on the osteoclasts formation through tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) activity and TRAP stains in Raw 264.7 cell. RESULTS: The melanin extract of GD was not cytotoxic to MG-63 cells at concentrations of $50-250{\mu}g/mL$. Alkaline phosphatase (ALP) activity and bone mineralization of melanin extract-treated cells increased in a dose-dependent manner from 50 to $250{\mu}g/mL$ and were 149% and 129% at $250{\mu}g/mL$ concentration, respectively (P < 0.05). The levels of BMP-2, osteocalcin, and COL-1 gene expression were significantly upregulated by 1.72-, 4.44-, and 2.12-fold in melanin-treated cells than in the control cells (P < 0.05). The levels of RUNX2 and SMAD5 proteins were higher in melanin-treated cells than in control vehicle-treated cells. The melanin extract attenuated the formation of receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand-induced TRAP-positive multinucleated RAW 264.7 cells by 22%, and was 77% cytotoxic to RAW 264.7 macrophages at a concentration of $500{\mu}g/mL$. CONCLUSIONS: This study provides evidence that the melanin extract promoted osteoblast differentiation by activating BMP/SMADs/RUNX2 signaling and regulating transcription of osteogenic genes such as ALP, type I collagen, and osteocalcin. These results suggest that the effective osteoblastic differentiation induced by melanin extract from GD makes it potentially useful in maintaining bone health.
Kim, In-Soo;Ma, Kyung-Wan;Bae, Sung-Ho;Yoon, Jeong-Hyun;Oh, Kyung-Taek;Lee, Eun-Seong;Lee, Don-Haeng;Lee, Kang-Choon;Youn, Yu-Seok
Journal of Pharmaceutical Investigation
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제40권3호
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pp.175-180
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2010
Albumin-modification has been viewed as one of the most effective ways of extending the short in vivo lifetimes of peptide drugs by delaying glomerular filtration. In this study, we describe a new type 2 anti-diabetic exendin-4 (Ex4) peptide derivative with significant binding ability to human serum albumin (HSA). This exendin-4 derivative consists of a 4-branched polyethylene glycol $(PEG)_{5k}$ (Mw: 20 kDa) modified with three stearylamines ($C_{18}-NH_2$) and one exendin-4 on its branches. PEG and stearylamine were selected to provide functionality to increase molecular size and bind to albumin, respectively. This derivative ($3C_{18}-4PEG_{5k}$-Ex4) was shown to have larger molecular size (Ca. 152 kDa) than actual (25.0 kDa) when subjected to size-exclusion chromatography, and the fluorescein-tagged $3C_{18}-4PEG_{5k}$-Ex4 displayed significant binding to the HSA-immobilized Sepharose CL-4B resin using confocal laser scanning microscopy. Furthermore, $3C_{18}-4PEG_{5k}$-Ex4 was found to have acceptable anti-hyperglycemic efficacy via three consecutive oral glucose tolerance testings (OGTT) in fasted type 2 diabetic db/db mice. The $HD_{total}$ value ($57.6{\pm}12.3%$) of $3C_{18}-4PEG_{5k}$-Ex4 at a 50 nmol/kg dose was 2-fold greater than that ($31.0{\pm}8.7%$) of native exendin-4 in non-fasted db/db mice. Especially, the blood glucose levels in the mice group treated with $3C_{18}-4PEG_{5k}$-Ex4 did not rebound to ~150 mg/dL until 24 h after the injection, which obviously shows the extended hypoglycemia. We believe that this derivative has great pharmaceutical potential as a novel long-acting type 2 anti-diabetic injection treatment.
본 연구는 3요소$(N-P_2O_5,-K_2O)$처리가 산국(Chrysanthemum boreale M.)의 수량과 유효성분에 미치는 효과를 조사하여 효과적인 재배시스템을 개발하고자하였다. 처리구는 무처리, NPK(250-160-160), NP(250-160-0), NK(250-0-160), PK(0-160-160 kg/ha)의 5처리로 설정하여 산국을 재배한 결과, 건물수량은 NPK처리구가 PK처리구에 비하여 4.0배의 증수가 있었으며, 다른 처리구보다 무기이온의 흡수율, 생육 및 수량에서 NPK처리구가 가장 우수하였다. 식용으로 많이 쓰이는 꽃의 주요 아미노산은 proline, glutamic acid과 aspartic acid이였고, 다른 처리구들에 비하여 NPK처리구가 높은 함량을 보였다. 혈압강하효과가 우수한 cumambrin A는 PK처리구에 비하여 NPK처리구가 6.2배의 증수효과가 있었다. NK처리구는 NP처리구보다 cumambrin A함량이 우수하였고, 식물체 중의 칼리 함량과 cumambrin A의 함량과는 상관관계가 인정되었으나, 이에 대한 생리적 대사과정은 아직까지 밝혀져 있지 않다. 따라서 산국의 재배시 cumambrin A의 함량을 높이기 위해서는 인산의 시용보다 칼리의 시용이 더 요구되며, 야외포장에서의 인산과 칼리의 적정 시비량의 설정이 필요하다고 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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