Peroxidase activities and isozyme patte군 of the pine needles (Pinus densiflora) were examined and compared in the coastal regions of Anmyum-Do(Choongnam, Taean-Gun) and inland regions of Shinchang-Myun(Choongnam, Asan-City). The pine needle peroxidase from Anmyum-Do showed approximately three times higher specfic activity than Shinchang pine needle peroxidase. The pine needle extracts of Anmyun-Do and Shinchang contained three anionic isoperoxidases, named A1, A2 and A3, when subjected to starch gel electrophoresis at pH 7.0. Cjationic isoperoxidases could not be found in both extracts., However, there existed unique isoperoxidase An only from the extracts of Anmyun-Do pine needles under the salinary environment. Moreover, the specific activities of catalase and glucose-6-phosphate dehydrogenase from Anmyun-Do, known for the inducible enzymes under the stress condition, were about 1.8 times higher than those of Shinchang pine needles. However, the specific activities of other enzymes did not show great differences between the two regions. Considering the above results of the higher specific activity of peroxidase and the unique expression of isoperoxidase An, pine needle peroxidase might involve in the defence mechanism against the salinary stress of Anmyun-Do.
A minor anionic isoperoxidase named $A_{3n}$, was isolated from Korean radish (Raphanus sativus L.) root. Purification of the enzyme was accomplished by CMcellulose chromatography, DEAE-Sephacel chromatography, and Sephadex G-75 gel filtration. The enzyme was a glycoprotein with molecular weight of approximately 31,000 as determined by SDS-PAGE and 33,000 by Sepadex G-150 gel filtration, which is by far the smallest among the reported isoperoxidases. The pI value was 3.5. The optimum pH of the enzyme was 6.5 for guaiacol and $H_2O_2$, and the $K_m$ values for guaiacol and $H_2O_2$ were 13.3 mM and 1.5 mM, respectively. Kinetic studies with various substrates revealed that only A3n, unlike other isoperoxidases from radish, did not use scopoletin as a substrate and had very low $K_m$ value of 0.25 mM for ferolic acid among naturally occurring phenolic substrates.
A specific DNA fragment from Korean radish (Raphanus sativus L.) was amplified by performing PCR with oligonucleotide primers which correspond to the highly conserved regions of plant peroxidases. The size of the PCR product was ca. 400 bp, as expected from the known plant peroxidase genes. Comparison of the nucleotide and deduced amino acid sequences of the PCR product to those of other plant peroxidase-encoding genes revealed that the amplified fragment corresponded to the highly conserved region I and III of plant peroxidases. By screening a genomic library of Korean radish using the amplified fragment as a probe, two positive clones, named prxK1 and prxK2, were isolated. Restriction mapping studies indicated that the 5.2 kb Sail fragment of the prxK1 clone and the 4.0 kb EcoRI fragment of the prxK2 clone encode separate isoperoxidase genes. Analyses of the promoter region of the prxK1 clone shows that putative CAAT box, CMT box, and TGA1b binding sequence (5' TGACGT) are present 718 bp upstream from the start codon.
Using of zymography for identification of same clone of Pinus densiflora, the two year old needle leaves of 48 ramtes including 8 clones (6 ramets per clone) were collected in the clone bank which has been established on the near campus of Institute of Forest Genetics, Suwon, in 1962. All 8 bands are named from cathod to anode, G, H, K, M, N, Q, S and Y. Only CB-1 clone shows all bands, while KW-3 clone reveals only 5 bands. Other 6 clones were found 7 bands but the occurred frequencies of those bands are variable among those clones. Though the grafting stock are used various individuals grown seed propagation of P. densiflora, moreover, three stocks have been different species and that one has been P. rigida and two individuals have been P. koraiensis, the zymograms of the ramets belonging to the same clone reveals the identified patterns. The results show that the stocks for grafting have not been affected on the isoperoxidase patterns of their scions in P. densiflora. Among 48 ramets of 8 clones, 4 ramets are found the different isoperoxidase patterns from that of the remained rametes within same clone. Thus, it is conluded that zymography is useful for testing genuineness of the grafted clones of P. densiflora.
The effect of alachlor treatment on peroxidase synthesis in oat root tips was studied. Alachlor caused increase in the amount of soluble peroxidase in oat root tips, peroxidase activity increase as the rate of alachlor application increased, Alachlor treatment of oats with $1{\times}10^{-6}M$, peroxidase activity increased 0.20 unit higher than that of nontreatment. After 12hr, 65mM of peroxide treatment of oats inhibited 16% root growth, and 130 mM peroxide treatment caused 59% inhibition. With PAGE of peroxidase extracted from normal root tips, PAGE give 4 species($P_2$, $P_3$, $P_4$, and $P_5$ band) of peroxidase. Alachlor significantly activated isoperoxidase. Three isoperoxidase($P_1$, $P_6$, and $P_7$) are synthesized at a increased concentration of alachlor, SDS-PAGE analysis of proteins extracted from oat root tips showed that they were made up of subunits blow 100 kD polypeptide.
This experiment was conducted to study sex expression and subsequent changes in protein and peroxidase after three cultivars of cucumber plants were treated with ethephon and gibberellin. The three cultivars of cucumber used in this study included 'Sayeup' (monoecious type), 'Sinrokdadaki' (gynoecious type), and 'Seonghowon' (intermediate type). The ethephon at 250 ppm and gibberellin at 100 ppm were treated at the 2-leaf and 4-leaf stages, and subsequent sex expression and changes in protein contents, peroxidase activities and isoperoxidase banding patterns by disc polyacrylamide gel electrophoresis were studied. The results can be summarized as follows: 1. Ethephon treatment slightly increased number of pistillate flowers and significantly decreased number of staminate flowers in the three cultivars, while gibberellin treatment significantly increased number of staminate flowers in both gynoecious 'Sinrokdadaki' and intermediate 'Seonghowon' and did not increase number of staminate flowers in monecious 'Sayeup' 2. There were some differences among three cultivars in protein contents, protein banding and isoperoxidase banding patterns of seeds and germinating seeds. However, it was not obvious to differentiate monoecious from gynoecious cultlvars by these characters. 3. Protein contents in the leaves. and stem apex after ethephon and gibberellin treatment increased gradually at the 2-leaf stage, but decreased at the 4-leaf stage. Protein contents in stem apex at the 4-leaf stage without treatment were much higher in 'Sinrokdadaki' and 'Seonghowon' than in monoecious 'Sayeup'. Protein contents in the stern apex at the 4-leaf stage were increased in the ethephon-treated monoecious 'Sayeup' and decreased in 'Sinrokdadaki' and 'Seonghowon' compared with untreated plants. 4. Peroxidase activities in the leaves and stem apex gradually decreased at the 2- leaf stage, but increased at the 4-leaf stage. Peroxidase activities in stern apex at the 4-leaf stage were significantly increased by ethephon treatment. 5. The number of protein bands in the three cuitivars after treatment gradually decreased in leaves and stem apex at the 2-leaf stage, but increased in the 4-leaf stage. The protein banding pat terns of stern apex of the ethephon-treated monoecious 'Sayeup' at the 4-leaf stage were gradually shifted to the banding.
This study was undertaken to investigate the influence of kinetin and 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid on the rate of growth, the contents of RNA, DNA, and protein. And also the effect of plant growth regulator on isoperoxidases in callus derived from root (root-callus) and petiole (petiolecallus) was investigated. The rate of growth in petiole-callus was higher than the rootcallus at 0.1 mg/l kinetin and 1mgfl 2,4-D. At 1mgll kinetic, the rate of growth increased, but at high concentration the rate of growth decreased fast. The contents of RNA, DNA and protein also increased, but it did not coincide with the increase of the growth rate of callus. The isoperoxidases of callus grown at various amounts of 2,4-D and kinetic occurred in an almost fashion, but those of root-callus appeared different from those of petiole-callus.
These studies were carried out to examine the anatomical, karyological characteristics, the variation of isozymes in needle and the frost damage of tissue for the purpose of investigating the relationships among the three natural Torreya nucifera populations of Cheju-do, Namhae, and Mt. Naejang in Korea. The results obtained can be summed up as follows : 1. The numbers of endodermal cells and inner layer cells of mucilage canal of needle conductive tissue were different in each population. The number of those of Cheju-do population was the largest. 2. In somatic chromosome, Namhae population showed one more secondary constriction. The values of $b^{arm}/a^{arm}$ were the same in all the three populations, but Cheju-do population particularly showed a different minimum value. And the karyotype formulas of each population showed difference. 3. During the meiosis, each population showed no significant difference in the irregular phenomena of chromosome. 4. In isoperoxidase and esterase variations of needle, each population showed its particular number and variation of bands. Cheju-do population showed the largest number and greatest variation of bands. 5. Under the same freeging conditions, the frost damage of Mt. Naejang population was comparatively slight, and Cheju-do population suffered from a greater frost damage than the others.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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