쌀 20%, 엿기름 4%를 가하여 7시간 동안 당화시켜 제조한 식혜는 말토오스 11.01%, 이소말토올리고당 5.31%, 말토트리오스 1.75%, 글루코오스 0.28%를 나타냈다. 알코올침전, Toyopearl HW-40S의 겔 크로마토그래피로 식혜의 이소말토올리고당, 말통스, 말토트리오스를 분리 정제하였다. NMR 분석 결과 말토오스와 말토트리오스는 $\alpha$-1, 4-글루코시드 결합만으로 이루어져Tr, 이소말토올리고당은 $\alpha$-1, 4-글루코시드 결합과 $\alpha$-1, 6-글루코시드 결합이 5:1로 이루어진 것으로 나타났다. 이소말토올리고당은 pullulanase 처리한 결과 말토오스와 말토헥사오스까지의 분포를 나타냈다.
설탕의 0%, 25%, 50%를 IMO로 대체하여 제조한 시럽에 집청한 약과의 물리적, 관능적 특성을 검토하였다. IMO를 사용한 시럽에 집청한 약과는 대조군 약과에 비해 환원당 함량이 증가했으며, 탈수율은 높았으나 집청액 흡수율은 낮았다. 약과의 관능적 특성은 윤기, 단맛, 고소한 맛, 전체적인 기호도 등이 유의적 차이를 나타냈다(p<.05). IMO를 사용한 시럽에 집청한 약과는 대조군 약과에 비해 윤기가 강하고 단맛이 약했으며, 고소한 맛이 강하고 전체적인 기호도가 높았다. Pearson correlation coefficient를 산출하여 관능적 특성간의 상관관계를 검토한 결과, 촉촉한 정도는 윤기(p<.01)와 정의 상관관계를, 부착성은 윤기 및 촉촉한 정도와 정의 상관관계(p<.01)를 나타내었다. 단맛은 윤기와 부의 상관관계(p<.01)를, 냄새는 윤기, 부착성, 응집성과 정의 상관관계(p<.01)를 나타내었다. 전체적인 기호도는 윤기(p<.01), 촉촉한 정도(p<.05), 부착성(p<.05), 응집성(p<.01), 고소한 맛(p<.01)과 정의상관관계를, 단맛과는 부의 상관관계(p<.05)를 나타내어, 윤기가 강하고 더 촉촉하며 부착성과 응집성이 크고, 단맛은 약하고 고소한 맛이 강한 약과에 대한 기호도가 더 높게 나타났다.
A novel thermostable $\alpha$-glucosidase (TtGluA) from Thermoanaerobacter tengcongensis MB4 was successfully expressed in E. coli and characterized. The TtgluA gene contained 2,253 bp, which encodes 750 amino acids. The native TtGluA was a trimer with monomer molecular mass of 89 kDa shown by SDS-PAGE. The purified recombinant enzyme showed hydrolytic activity on maltooligosaccharides, p-nitrophenyl-$\alpha$-D-glucopyranide, and dextrin with an exotype cleavage manner. TtGluA showed preference for short-chain maltooligosaccharides and the highest specific activity for maltose of 3.26 units/mg. Maximal activity was observed at $60^{\circ}C$ and pH 5.5. The half-life was 2 h at $60^{\circ}C$. The enzyme showed good tolerance to urea and SDS but was inhibited by Tris. When maltose with the concentration over 50 mM was used as substrate, TtGluA was also capable of catalyzing transglycosylation to produce $\alpha$-1,4-linked maltotriose and $\alpha$-1,6-linked isomaltooligosaccharides. More importantly, TtGluA showed exclusive regiospecificity with high yield to produce $\alpha$-1,6-linked isomaltooligosaccharides when the reaction time extended to more than 10 h.
올리고당중에서 ${\alpha}$-1, 6-결합을 가진 isomaltose, isomaltotriose, panose 등을 주성분으로 하는 이소말토올리고당의 생산을 위해 A. niger 유래의 transglucosidase (TG)의 효소학적 특성을 살펴보았다. TG는 maltose를 포도당으로 가수분해하여 panose와 포도당을 생성하였다. panose가 초기기질일 때 TG는 panose를 maltose와 포도당으로 가수분해하였다. ${\alpha}$-1, 6-결합을 가진 isomaltose나 isomaltotriose, isomaltotetraose를 기질로 하였을 때 반응산물의 생성은 ${\alpha}$-1,4-결합을 가진 maltose가 기질일 경우와는 다른 양상을 보였다. 반면 maltotriose를 기질로 한 경우에는 maltose와 유사한 양상을 보였다. TG는 maltotetraose(G4)에서 maltodecaose (G10)가 주성분인 말토올리고당을 기질로 한 경우에도 이소말토올리고당을 생성하였다. 기질인 maltose로부터 TG에 의해 panose가 생성되는 반응은 Michaelos-Menten 식으로 표현되었으며 최대속도, $V_{max}$와 Michaelis 상수, $K_m$은 각각 400 ${\mu}M/min$과 21.4${\mu}M$이었다.
Goffin, Dorothee;Bystricky, Peter;Shashkov, Alexander S.;Lynch, Mary;Hanon, Emilien;Paquot, Michel;Savage, Angela V.
Bulletin of the Korean Chemical Society
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제30권11호
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pp.2535-2541
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2009
Prebiotic isomaltooligosaccharide preparations contain $\alpha$-D-glucooligosaccharides comprising isomaltooligosaccharides (IMOs) and non-prebiotic maltooligosaccharides (MOs). They are both glucose oligosaccharides characterized by their degree of polymerization (DP) value (from 2 to $\sim$10), linkages types and positions (IMOs: $\alpha$-(1$\rightarrow$2, 3, 6 and in a lower proportion internal 1$\rightarrow$4) linkages, MOs: α-(1$\rightarrow$4) linkages). Their structure is the key factor for their prebiotic potential. In order to determine and elucidate the exact structure of unknown IMOs and MOs, unambiguous assignments of $^{13}C$ and $^1H$ chemical shifts of commercial standards, representative of IMOs and MOs diversity, have been determined using optimized standard one and two-dimensional experiments such as $^1H$ NMR, $^{13}C$ NMR, APT and ${^1}H-{^1}H$ COSY, TOCSY, NOESY and <$^1H-{^{13}}C$ heteronuclear HSQC, HSQC-TOCSY, and HMBC. Here we point out the differential effect of substitution by a glucose residue at different positions on chemical shifts of anomeric as well as ring carbons together with the effect of the reducing end configuration for low DP oligosaccharides and diasteroisotopic effect for H-6 protons. From this study, structural $^{13}C$ specific spectral features can be identified as tools for structural analysis of isomaltooligosaccharides.
식혜에 함유된 이소말토올리고당과 밥알에 30unit/ml의 $\alpha$-아밀라아제, 글루코아밀라아제, $\alpha$-글루코시다아제, $\beta$-아밀라아제를 가하여 작용시킨 결과 글루코아밀라아제 외에는 일부밖에 가수분해하지 못하였다. 그리고, 인체의 효소인 $\alpha$-아밀라아제와 $\alpha$-글루코시다아제를 함께 작용시켜도 25% 이상 가수분해하지 못하므로 비피두스균의 활성인자로 작용할 것으로 보인다. 밥알은 물에 녹지 않기 때문에 식이섬유로도 작용할 것으로 보인다.
Isomaltooligosaccharides (IMOs) have good prebiotic effects, and long IMOs (LIMOs) with a degree of polymerization (DP) of 7 or above show improved effects. However, they are not yet commercially available, and require costly enzymes and processes for production. The N-terminal region of the thermostable Thermoanaerobacter thermocopriae cycloisomaltooligosaccharide glucanotransferase (TtCITase) shows cyclic isomaltooligosaccharide (CI)-producing activity owing to a catalytic domain of glycoside hydrolase (GH) family 66 and carbohydrate-binding module (CBM) 35. In the present study, we elucidated the activity of the C-terminal region of TtCITase (TtCITase-C; Met740-Phe1,559), including a CBM35-like region and the GH family 15 domain. The domain was successfully cloned, expressed, and purified as a single protein with a molecular mass of 115 kDa. TtCITase-C exhibited optimal activity at 40℃ and pH 5.5, and retained 100% activity at pH 5.5 after 18-h incubation. TtCITase-C synthesized α-1,6 glucosyl products with over seven degrees of polymerization (DP) by an α-1,6 glucosyl transfer reaction from maltopentaose, isomaltopentaose, or commercialized maltodextrins as substrates. These results indicate that TtCITase-C could be used for the production of α-1,6 glucosyl oligosaccharides with over DP7 (LIMOs) in a more cost-effective manner, without requiring cyclodextran.
Lee, Jae-Eun;Kim, In-Hwan;Jung, Jong-Hyun;Seo, Dong-Ho;Kang, Sung-Gyun;Holden, James F.;Cha, Jaeho;Park, Cheon-Seok
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권8호
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pp.1060-1069
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2013
Genome organization near cyclomaltodextrinases (CDases) was analyzed and compared for four different hyperthermophilic archaea: Thermococcus, Pyrococcus, Staphylothermus, and Thermofilum. A gene (CL1_0884) encoding a putative CDase from Thermococcus sp. CL1 (tccd) was cloned and expressed in Escherichia coli. TcCD was confirmed to be highly thermostable, with optimal activity at $85^{\circ}C$. The melting temperature of TcCD was determined to be $93^{\circ}C$ by both differential scanning calorimetry and differential scanning fluorimetry. A size-exclusion chromatography experiment showed that TcCD exists as a monomer. TcCD preferentially hydrolyzed ${\alpha}$-cyclodextrin (${\alpha}$-CD), and at the initial stage catalyzed a ring-opening reaction by cleaving one ${\alpha}$-1,4-glycosidic linkage of the CD ring to produce the corresponding single maltooligosaccharide. Furthermore, TcCD could hydrolyze branched CDs (G1-${\alpha}$-CD, G1-${\beta}$-CD, and G2-${\beta}$-CD) to yield significant amounts (45%, 40%, and 46%) of isomaltooligosaccharides (panose and $6^2$-${\alpha}$-maltosylmaltose) in addition to glucose and maltose. This enzyme is one of the most thermostable maltogenic amylases reported, and might be of potential value in the production of isomaltooligosaccharides in the food industry.
꿀의 25%, 50%를 이소말토올리고당(IMO)으로 대체한 약과를 제조하여 IMO가 약과에 질에 미치는 영향을 검토하였다. 꿀만을 사용한 대조군 약과(Y-0), 꿀의 25%를 IMO로 대체한 약과(Y-1), 꿀의 50%를 IMO로 대체한 약과(Y-2)를 제조하여 세 종류의 약과를 시료로 사용하였다. IMO를 사용한 약과는 Y-0에 비해 환원당 함량은 감소하였고, 지방함량은 증가하였다. 약과 표면의 색은 L, a, b값이 모두 약과간에 유의적 차이를 보였다(p<0.05). IMO를 사용한 약과는 대조군 약과에 비해 명도는 높아졌고 적색도와 황색도는 낮아졌다. 약과의 관능적 특성을 검토한 결과 IMO를 사용한 약과는 Y-0에 비해 색이 엷으며 균열이 많고, 잘 부서지며 견고성이 낮다고 평가되었다(p<0.05). 기호도는 꿀의 25%를 IMO로 대체한 약과인 Y-1이 가장 높게 평가되었으며, 견고성 및 냄새와 정의 상관관계(p<0.05)를 느끼한 맛과는 부의 상관관계(p<0.05)를 나타내었다. 텍스쳐 특성을 검토한 결과, IMO를 사용한 약과는 꿀만을 사용한 약과에 비해 견고성, 응집성, 검성이 낮아졌다(p<0.05).
본 연구를 통해 현행 이소말토올리고당 분석법의 한계를 극복하고 원료 시럽뿐만 아니라 발효유 중의 미량의 이소말토올리고당 함량을 신속, 정확하게 분석하기 위한 새로운 분석법을 개발하였다. IDF method와 dSPE 기술을 적용하여 전처리 방법을 개선하였고, 당 전용 컬럼과 ELSD를 이용하여 기기분석조건을 최적화하였다. 새롭게 개발된 분석법은 유효성 검증 절차에 의해 선택성, 직선성, 검출한계 및 정량한계, 회수율, 정확성 및 정밀성이 유효함을 확인하였다. 또한 시장에서 유통 중인 시럽 및 발효유 제품을 분석한 결과 이전에 발표된 연구결과와 일치하는 결론을 얻었으며(Goffin et al., 2011), 이소말토올리고당을 구성하는 성분 중 panose, isomaltose 및 isomaltotriose가 가장 많은 비율을 차지하는 것을 확인하였다. 본 연구 결과는 지방 및 단백질이 많고 유화의 특성을 가진 발효유 중에서의 이소말토올리고당 함량을 신속, 정확하게 분석할 수 있는 기술이 될 것으로 기대된다. 이러한 분석 기술은 향후 식품산업현장에는 물론 발효유를 소비하는 소비자들에게 발효유의 기능성에 대한 정확한 평가를 가능하게 하고, 이소말토올리고당 뿐만 아니라 당 분석을 위한 기초 연구자료로 활용될 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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