Sea water samples collected in August, 1994 from 20 stations in the Kwangyang Bay were analyzed by gas chromatography/mass spectrometry-selected ion monitoring (GC/MS-SIM) to investigate persistence and distribution pattern of four organophosphorus pesticides (DDVP, Diazinon, IBP, EDDP). Except for IBP, the contamination by DDVP, Diazinon, and EDDP in marine aquatic environment in Korea has not been reported previously. In this study, however, all these four pesticides were detected in all stations (except DDVP) and their concentrations were in ng/L level. The concentrations ranged from detection limit to 15.3ng/L for DDVP, 1.8-27.7ng/L for Diazinon, 7.3-63.5ng/L for IBP, and 22.2-1100.1ng/L for EDDP. It is noteworthy that the measured concentrations of IBP and EDDP in this study would be much lower than usual, since the use of IBP and EDDP was less than 50% of average annual consumption due to unusually dry and hot weather condition in the summer of 1994. It was very surprising to find that the highest concentrations of organophosphorus pesticides were observed at stations near Daesa Streamlet instead of Seomjin River, which has more point source of the pesticides. This result suggests that the small river discharge during heavy ram period in summer can give harmful effect on marine biota (both wild and aqua-cultured) with its organophosphorus pesticide residue, despite of their short residence time in aquatic environment. In order to protect the marine life properly from acute toxicity of the organophosphorus pesticides, it needs to be emphasized that monitoring the level of agricultural pesticides in river run-off should be done during active consumption period rather at regular intervals.
This study was carried to assess the accuracy of material safety data sheets (MSDS) for some water-soluble metalworking fluid (MWF) with respect to mono- ethanolamine(MEA), di-ethanolamine(DEA) and tri-ethanolamine (TEA). 39 fresh and 52 used MWFs for this study were taken from the workplace. The quantification and qualification of MEA, DEA and TEA were done using ion-chromatography. Three main findings of this study were 1) EA that was not addressed in material safety & data sheets (MSDS) was found to be enough higher than 1%, 2) 33.3% of 39 fresh MWF showed ingredient and concentration of MEA, DEA and TEA in MSDS and 3) the concentrations of MEA(20.5%), DEA(41.3%) and TEA(15.4%) were much higher than those indicated in MSDS. Consequently, we concluded that the accuracy on ingredients and concentrations of MEA, DEA and TEA provided in MWF was very low. Our study recommends that the limit concentration of chemical except for carcinogen that employer has to indicate in MSDS should be lowered from 1% to 0.1% .
Capillary column GLC 및 GCMS를 병용하는 분석방법을 이용하여 식물유 트리글리세리드 분자종과 산화안정성과의 관계를 밝히기 위해서, 규산 컬럼으로 분획한 대두유 트리글리세리드를 모델 시료로 하여 $60^{\circ}C$, 암소에서 저장하면서 산화에 따른 트리글리세리드 각 분자종의 산화안정성을 조사하였다. 대두유 트리글리세리드의 주요 분자종은 LLL(19.6%), OLL(17.4%), PLL(14.2%), OLO(10.2%) 및 PLO(9.4%)이었으며, 트리글리세리드 분자종의 산화안정성은 전반적으로 구성불포차지방산의 이중결합수가 적을 수록 증가하는 경향을 보였다. 그런데 트리글리세리드를 구성하는 불포화지방산들의 이중결합수가 같을 경우는 불포화도가 낮은 지방산이 결합되어 있는 분자종의 산화안정성이 높았고, 또 결합되어 있는 불포화지방산의 이중결합수 및 불포화도가 똑같은 경우에는 공존하고 있는 포화지방산의 acyl의 사슬길이가 짧은 분자종의 산화안정성이 높은 것으로 밝혀져, 식물유 트리글리세리드 분자종의 산화안정성에는 구성불포화지방산의 이중결합수와 불포화도 및 공존하고 있는 포화지방산의 acyl기의 사슬길이가 중요한 영향을 미치는 인자임을 알 수 있었다.
Production of foreign proteins by transgenic plant cell cultures has several advantages such as post-translational modification, low risk of product contamination and low-cost production and purification. However, target proteins are degraded by extracellular proteases existing in the media. A solution to this problem is the use of perfusion culture and ion exchange chromatography for the application of integrated bioprocess using in situ recovery. With this method, production of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) was investigated in this study. First, optimization of cell concentration during the induction phase for the production of hGM-CSF was examined. As cell concentration increased, the level of hGM-CSF was decreased due to the presence of extracellular proteases. Induction using sugarfree media produced 33% more hGM-CSF. The effects of pH on the binding of hGM-CSF to cationic and anionic exchange resins were also investigated. In terms of stability, optimal pH was found to be 5~7. In the case of using buffer exchange when CM-Sepharose was used as a cationic exchange resin, optimal pH for binding was 4.8 and adsorption yield was 77%. When DEAE-Sepharose was used as an anionic exchange resin, it was 5.5 (74%). Without buffer exchange, optimal pH was 4.6 (84%). From these results, an integrated bioprocess using in situ recovery with simultaneous production and separation of foreign protein in transgenic plant cell suspension cultures was found to be feasible.
The purpose of this study was to evaluate a new sampling and analytical method for the determination of hexavalent chromium, Cr(VI) in mist from field plating operation. The Procedures of this new method (Shin & Paik's Method) are as the following: Airborne hexavalent chromium is collected on polyvinyl chloride (PVC) filter according to the National Institute for Occupational Safety and Health (NIOSH) Method 7600, and the filter sample is placed in a screw-capped vial and soaked with 2% NaOH/3% Na₂CO₃ solution immediately after sampling. The Cr(VI) sample is analyzed by ion chromatography/visible spectrophotometry (IC/VS) according to the U.S. Environmental Protection Agency (EPA) Method 218.6. The airborne Cr(VI) concentrations measured by this method were compared with those determined by three reference methods: One (NIOSH/EPA Method) consisted of sampling airborne Cr(VI) on PVC filters and storing the sample filters in screw-capped vials according to the NIOSH method, and analyzing Cr(VI) in samples using IC/VS according to the EPA method. The second method (Impinger Method/NaHCO₃) consisted of absorbing airborne Cr(VI) into 0.02 MN/sub a/Hco₃ solution in midget impinger, and analyzing the Cr(VI) in samples using IC/VS. The third method was the OSHA Method Id-215. Using these four different methods, four replicates of air samples were collected at an electroplating process and analyzed simultaneously. Two-way ANOVA and Paired t-test were used to test difference among values determined by the methods. There was no significant difference and a strong correlation (r/sup 2/=0.99) between Cr(VI) concentrations measured by the shin & Paik's Method and an impinger method (p>0.05). However, Cr(VI) concentrations determined by Shin & Paik's Method were Significantly different form those by the NIOSH/EPA Method (p<0.05) or the OSHA method (p<0.05). The Cr(VI) concentrations of Shin & Paik's Method were Significantly higher than those of the NIOSH/EPA Method or the OSHA method. We concluded that the Shin & Paik's Method could prevent Cr(VI) losses caused by reduction and give more reliable results of airborne Cr(VI) concentrations in work environments.
This study is conducted to partially purify an antioxidative peptide in a two-step gelatin hydrolysate from Alaska pollock surimi refiner discharge, which was obtained by sequential treatment with Pronase E and Flavourzyme. The two-step gelatin hydrolysate was fractionated using chromatographic methods. Based on the same protein concentration of each fraction, the antioxidative activities (85.1-95.4%) of positive fractions fractionated by ion-exchange chromatography were higher than those (27.2-87.8%) from gel filtration. Then, further purification of the positive fractions was performed. Among them, the partially purified A1C1L2G1 and A1C1L2G2 fractions showed 96.2% and 85.1% inhibition, respectively, of linoleic acid peroxidation. The A1C1L2G1 fraction was composed of 15 kinds of amino acids and the predominant amino acids were proline, glycine and alanine. The results obtained in this study suggested that the fraction partially purified through chromatographic methods from the two-step gelatin hydrolysate of Alaska pollock surimi refiner discharge could be useful as a supplementary source for improving health functionality.
Hot water-soluble crude polysaccharide (HCAP-0) that was obtained from the fruits of Capsicum annuum showed potent anti-complementary activity. The activity was unchanged by pronase digestion, but decreased by periodate oxidation. The HCAP-0 was fractionated by DEAE ion-exchange chromatography to give two major fractions, HCAP-II and III. These two fractions were finally purified by gel filtration to give HCAP-IIa, HCAP-IIIa1, and IIIa2 fractions that had high anti-complementary activities. The HCAP-IIIa1 and IIIa2 consisted of homogeneous polysaccharides. The anti-complementary activities were unaffected by treatment with polymyxin B, indicating that the modes of complement activation were not due to preexisting lipopolysaccharide. The molecular weight and sugar content of HCAP-IIIa2 had potent anti-complementary activity. The highest yields were 55 kDa and 75.9%, and the molar ratio of galactose (Ara:Gal, 1.0:4.6) was higher than other sugars. The crossed immuno-electrophoresis showed that both classical and alternative pathways were activated by HCAP-IIIa2.
Cytoplasmic $\alpha$-glycerol-3-phosphate dehydrogenase from fruit-bat-breast muscle was purified by ion-exchange and affinity chromatography. The specific activity of the purified enzyme was approximately 120 units/mg of protein. The apparent molecular weight of the native enzyme, as determined by gel filtration on Sephadex G-100 was $59,500{\pm}650$ daltons; its subunit size was estimated to be $35,700{\pm}140$ by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The true Michaelis-Menten constants for all substrates at pH 7.5 were $3.9{\pm}0.7\;mM$, $0.65{\pm}0.05\;mM$, $0.26{\pm}0.06\;mM$, and $0.005{\pm}0.0004\;mM$ for L-glycerol-3-phosphate, $NAD^+$, DHAP, and NADH, respectively. The true Michaelis-Menten constants at pH 10.0 were $2.30{\pm}0.21\;mM$ and $0.20{\pm}0.01\;mM$ for L-glycerol-3-phosphate and $NAD^+$, respectively. The turnover number, $k_{cat}$, of the forward reaction was $1.9{\pm}0.2{\times}10^4\;s^{-1}$. The treatment of the enzyme with 5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) under denaturing conditions indicated that there were a total of eight cysteine residues, while only two of these residues were reactive towards DTNB in the native enzyme. The overall results of the in vitro experiments suggest that $\alpha$-glycerol-3-phosphate dehydrogenase of the fruit bat preferentially catalyses the reduction of dihydroxyacetone phosphate to glycerol-3-phosphate.
A novel mannose-binding tuber lectin with in vitro antiproliferative activity towards human cancer cell lines and antiviral activity against HSV-II was isolated from fresh tubers of a traditional Chinese medicinal herb, Typhonium divaricatum (L.) Decne by a combined procedure involving extraction, ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromatography on DEAE-SEPHAROSE, CM-SEPHAROSE and gel-filtration on sephacryl S-200. The apparent molecular mass of the purified Typhonium divaricatum lectin (TDL) was 48 kDa. TDL exhibits hemagglutinating activity toward rabbit erythrocytes at 0.95 $\mu$g/ml, and its activity could be strongly inhibited by mannan, ovomucoid, asialofetuin and thyroglobulin. TDL showed antiproliferative activity towards some well established human cancer cell lines, e.g. Pro-01 (56.7 $\pm$ 6.8), Bre-04 (41.5 $\pm$ 4.8), and Lu-04 (11.4 $\pm$ 0.3). The anti-HSV-II activity of TDL was elucidated by testing its HSV-II infection inhibitory activity in Vero cells with $TC_50$ and $EC_50$ of 5.176 mg/ml and 3.054 $\mu$g/ml respectively. The full-length cDNA sequence of TDL was 1145 bp and contained an 813-bp open reading frame (ORF) encoding a 271 amino acid precursor of 29-kDa. Homology analysis showed that TDL had high homology with many other mannose-binding lectins. Secondary and three-dimensional structures analyses showed that TDL is heterotetramer and similar with lectins from mannose-binding lectin superfamily, especially those from family Araceae.
시중에 유통 중인 영양보충용 제품의 수용성 비타민 $B_1$(thiamin), $B_2$(riboflavin), $B_3$(nicotinic acid and nicotine amide), $B_6$(pyridoxine), C(ascorbic acid)의 신속한 동시분석 방법을 확립하기 위하여 본 연구를 실시하였다. 영양보충용 제품은 정제, 연질캅셀, 분말, 액상의 4가지 제형에 대해 27종의 제품을 구입한 후, Ion-pair 분리기법을 사용하여 HPLC-UVD를 이용한 동시분석 방법을 검토하였다. 비타민 $B_1$, $B_2$, $B_3$, $B_6$, C의 HPLC에 의한 동시분석 조건을 검토한 결과, 이동상은 0.02% triethylamine, 17.5% 메탄올, $5{\mu}M$ sodium hexanesulfonic acid가 함유된 pH 3.5(acetic acid로 조절)의 수용액을 사용하였고, 용출시간은 다른 피크의 영향을 받지 않도록 30분으로 하였다. 수용성 비타민의 회수율은 96% 이상이었다. 본 연구에 의해 확립된 수용성 비타민의 동시분석 조건은 검량선의 직선성, 정밀성, 정확성, 기기적합성 등이 USP 및 ICH 기준에 적합하여 HPLC의 동시분석 방법으로 합당하였다. 수용성 비타민의 추출 용매는 제형에 따라 약간의 차이를 보이긴 했으나, 물이나 산성조건을 갖춘 HPLC의 이동상이 에탄올이나 메탄올보다 높은 추출 효율을 보였다. 초음파 추출기에 의한 추출 시간은 20분이 가장 적당하였다. 본 연구의 결과는 수용성 비타민의 신속한 추출 및 분석에 매우 효율적으로 이용될 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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