• 한국수산과학회지
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• 제38권1호
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• pp.6-11
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• 2005

Vasopressin (VP)-related peptide was purified from the brain extract of conger eel (Conger myriaster) by reverse-phase, ion-exchange high performance liquid chromatography (HPLC). This peptide with a molecular weight of 1,051.2 Da was determined as $H-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH_2$, whose Cys residues made an intramolecular disulfide bridge by the automated amino acid sequence analysis, MALDI- TOF mass spectrometry. It's sequence was confirmed by identity of the elution position with the synthetic peptide in HPLC system. As a result of homology investigation, the primary structure of this peptide was the same as that of VP-superfamily member, $[Arg^8]-vasotocin$. The synthetic peptide showed a contractile activity at a minimal effective concentration of $10^{-10}\;M$ on the intestinal smooth muscle of goldfish.

• 폴리머
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• 제33권1호
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• pp.1-6
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• 2009

Poly(2-acetamidoacrylic acid) (PAAA) 수화젤 기판 내에 수용액상에서 이온교환에 의해 잘 분산된 CdS 나노입자를 응집이 없는 새로운 형태의 나노복합체로서 합성하였다. TEM 이미지분석을 통하여, CdS/PAAA 수화젤 복합체내에 분포되어 있는 CdS 나노입자의 평균 직경은 4.5 nm이며, 복합체의 형태는 6개월이 지나도 그대로 유지됨을 알았다. TGA와 EGA를 이용하여 복합재료의 열적 안정성이 약 100도 정도 상승하며, 건조젤 내의 CdS 입자의 함량이 70 wt% 이상이 됨을 확인할 수 있었으며 또한 각 온도에서 휘발 또는 분해된 기체를 통해 성분 물질을 확인하였다.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제1권1호
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• pp.111-116
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• 1996

Polyphenol oxidase(PPO) isolated from the crude extract of ascidian, Halocynthia roretzi, showed higher affinity for catechol than tyrosine or DL-DOPA. Successful enzyme assay could be performed at $25^{\circ}C$, 10min. by mixing 0.2ml of crude enzyme extract with 2.8ml of 0.13M catechol in 0.1M sodium phosphate buffer(pH 6.4). The specific activity of PPO which had been purified with a combination of ammonium sulfate treatment, ion exchange chromatography on DEAE-cellulose, and gel filtration on Sepharose 6B was 13-fold disc gel electrophoresis. The activity of PPO was stable from pH 5.0 to 8.0 and showed the peak activity at pH 6.4 .The optimum reaction temperature for PPO oxidation on catechol was 35$^{\circ}C$ and those enzyme were heat stable up to 4$0^{\circ}C$. Molecular weigth of the enzyme was estimated about 170kDa. One molecule was found to be composed of gour subunits. Two of them had molecular weigh of 55kDa and the others 30kDa. The {TEX}$K_{m}${/TEX} values, {TEX}$V_{max}${/TEX} and catalytic efficiency({TEX}$V_{max}${/TEX}/{TEX}$K_{m}${/TEX}) for catechol were 0.12mM, 2.5mM/liter/min. and {TEX}$0.18min^{-1}${/TEX} respectively. The substrate affinity and electrophorectic pattern suggested that the enzyme of ascidian was considered to be not tyosine but catechol oxidase.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제24권6호
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• pp.590-596
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• 2001

A new extended-spectrum ${\beta}-lactamase$ with an isoelectric point (pl) of 6.2 was detected in Klebsiella pneumoniae Fl 61 that was isolated from a patient with infection. This strain was highly resistant to the third or fourth generation cephalosporins such as cceftazidime ceftriaxone, cefoperzaone, and cefpirome. Analysis of this strain by the double disk diffusion test showed synergies between amoxicillin-clavulanate (AMX-CA) and cefotaxime, and AMX-CA and aztreonam, which suggested that this strain produced a extended-spectrum ${\beta}-lactamase$ (ESBL). Cenetic analysis revealed that the resistance was due to the presence of a 9.4-kb plasmic, designated as pkpl 61, encoding for new ${\beta}-lactamase$ gene (bla). Sequence analysis showed that a new bla gene of pkpl 61 differed from $bla_{TEM-1}$ by three mutations leading to the following amino acid substitutions: $Val_{84}{\rightarrow}lie,{\;}Ala_{184}{\rightarrow}Val,{\;}and{\;}Gly_{238}{\rightarrow}Ser$. These mutations have not been reported previously in the TIM type ${\beta}-lactamases$ produced by clinical strains. The novel ${\beta}-lactamase$ was overexpressed in E. coli and purified by ion exchange chromatography on Q-Sepharose and CM-Sepharose, and then further purified by gel filtration on Sehadex G-200. The catalytic activity of th8 purified ${\beta}-lactamase$ was confirmed by the nitrocefin disk.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제25권4호
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• pp.505-510
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• 2002

An improved kinetic assay for prekallikrein activator (PKA), a potential vasodilator, has been developed to be used as an indicator for quality control during production of human albumin preparations. It consists of two reaction stages. In the first stage, PKA and prekallikrein are incubated at $37^{\circ}C$ for 45 min to allow the transformation into kallikrein. Kallikrein, a serine protease, catalyzes the splitting of p-nitroaniline (pNA) from its substrate H-D-Pro-Phe-Arg-pNA(S-2302). The rate at which pNA is released was measured spectrophotometrically at 405 nm. Prekallikrein, a substrate of PKA was purified by DEAE ion-exchange chromatography and the major potential variations in the assay were optimized; pH 8.0 and 150 mM sodium chloride were chosen to give a proper ionic strength. Reaction times in the range of 10 to 360 min provided linear dose-response curves. The concentration of prekallikrein was adjusted to fall between 1:1 and 1:3 dilutions to generate a linear standard calibration curve. Under the optimized conditions, reproducibility was checked. In a precision test, the coefficient of variation (CV) stayed within ${\pm}4%$ and the dose-response curve showed a good correlation (${r^2}=0.999$). An accuracy test with an international standard of PKA afforded a mean recovery of 97.5%.

• 분석과학
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• 제22권4호
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• pp.319-325
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• 2009

벌꿀 중에 잔류하는 아미노그라이코사이드 항생제인 네오마이신을 효과적으로 분석하는 방법을 개발하고 방법에 대한 유효성 검증을 수행하였다. 0.1M 염산을 사용하여 벌꿀의 pH를 2로 조절한 후 고체상 추출(SPE) 고체상인 양이온교환 카트리지에 적재한 후 염기성 메탄올로 용리하였다. 용리된 추출물은 이온쌍 시약을 사용한 이온쌍 크로마토그래피법으로 분리한 후 LC/(+)ESI-MS/MS의 MRM 방법으로 분석하였다. 정량분석을 위해서 spike 한 $5.0{\sim}250{\mu}g/kg$ 농도 범위에서 검정곡선은 좋은 직선성 ($r^2$ > 0.9951)을 나타내었다. 분석방법의 상대표준편차는 11.5~18.7%이었고 정확도는 bias로 10.9~20.9%이었다. 확립된 분석방법은 벌꿀 중에서 네오마이신의 분석방법으로 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

• 분석과학
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• 제20권2호
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• pp.164-169
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• 2007

고속액체크로마토그라피/질량분석기를 이용하여 가공 식품 중 아크릴아마이드를 분석하였다. 대상 식품은 감자칩 (6종), 프렌치후라이 (11종)으로 총 17종이었다. 시료를 균질화하여 3차 증류수로 추출하고 C18 및 혼합이온교환수지 카트리지를 이용하여 정제한 후 LC/MS/MS으로 분석하였다. 이동상으로는 0.1% 초산과 0.5% 메탄올을 함유하는 수용액을 사용하였으며, 대상물질의 특이이온을 ESI 질량분석기로 확인 및 정량하였다. 평균 회수율은 91~101%이었으며, 정량한계는 $10{\mu}g/kg$이었다. 대상식품의 유형에 따라 검출 수준에 차이를 나타냈으며, 평균 검출수준은 감자칩은 0.71 mg/kg, 프렌치후라이는 0.34 mg/kg이었다.

• Journal of Life Science
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• 제11권2호
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• pp.111-115
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• 2001

This study was designed to clone the SNF2/SW12 helicase-related genes from the fission yeast Schizosaccha-romyces pombe and thereafter to elucidate the common functions of the proteins in this family. The $hrp^{2+}$gene was cloned by polymerase chain reaction amplification using degenerative primers from conserved SNF2 motifs within the ERCC6 gene, which encodes a protein involved in DNA excision repair. Like other SNF2/SW12 family proteins, the deduced amino acid sequence of Hrp2 contains DNA-dependent ATPase/7 helicase domains as well as the chromodomain and the DNA binding domain. This configuration is similar to that of mCHD1 (mouse chromo-ATPase/helicase-DNA-dinding protein 1), suggesting that Hrp2 is a S. pombe homolog of mCHD1, which is thought to function in altering the chromatin structure to control the gene expression. To characterize the function of Hrp2, 4 Uracil-Hrp2 fusion protein, it was purified near homogeneity by affinity chromatography on $Ni^{2+}$-NTA agarose, DEAE-Sepharose ion exchange arid Sephacryl S-200 gel filtration chromatographies. The purified fusion protein exhibited DNA-dependent ATPase activity, which was stimulated by both double-stranded and single-stranded DNA. To determine the steady-state level of $hrp^{2+}$ transcripts during growth, cells were cultured in medium and collected at every 2hr to prepare total RNAs. The northern blot analysis showed that the level of $hrp^{2+}$ transcripts reached its maximum before the cells entered the exponential growth phase and then decreased gradually, This result implies that Hrp2 may be required at early stages of cell growth.h.

• 농업과학연구
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• 제18권1호
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• pp.49-73
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• 1991

발아대두 $\alpha$-galactosidase와 Aspergillus niger가 생산하는 $\alpha$-galactosidase의 효소학적 성질을 비교하기 위하여 대두 발아 중의 $\alpha$-galactosidase활성 및 소당류의 함량변화를 측정하였고, 대두 발아 과정 중 활성이 가장 강할때에 추출한 $\alpha$-galactosidase 및 Aspergillus niger를 밀기울 배양하였을 때 생성되는 $\alpha$-galactosidase를 염석, 이온교환 크로마토그래피 및 겔여과 등을 사용하여 정제한 후 정제효소의 이화학적 및 효소학적 성질을 측정, 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 대두 $\alpha$-galactosidase의 활성은 대두를 $25^{\circ}C$에서 120시간 발아시켰을 때 가장 높았으며, 대두 중의 raffinose는 96시간, stachyose는 120시간 발아시켰을 때 완전히 분해되었다. 2. Aspergillus niger를 밀기울배지에서 $30^{\circ}C$, 4일간 배양했을 때 $\alpha$-galactosidase 활성이 최고에 달하였다. 3. 대두 $\alpha$-galactosidase는 황산암모늄 염석, DEAE-Cellulose 및 DEAE-Sephadex A-50 이온교환 크로마토그래피, Sephadex G-l50 겔여과 등에 의하여 6.6배까지 정제되었으며 그의 비활성이 825U/mg protein, 수율 2.5%에 달하였고, Aspergillus niger의 $\alpha$ -galactosidase는 23.7배까지 정제되었으며 그의 비활성이 1,229U/mg protein, 수율 14%에 달하였다. 4. 정제된 대두 및 Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase는 HPLC, PAGE 및 SDS-PAGE에 의해서 순도가 확인되었다. 5. 정제효소의 이화학적 성질 1) Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase는 periodic acid schiff 염색에 의하여 당단백질임이 확인되었다. 2) 대두 $\alpha$-galactosidase의 등전점은 pH4.8이었고, 분자량이 30,000인 monomer이었으나, Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase는 등전점이 pH4.6이었고 분자량은 112,000이었으며 분자량 28,000인 monomer 4개로 구성된 tetramer이었다. 3) 대두 및 Aspergillus niger $\alpha$-galactosidase의 활성에 관여하는 아미노산은 diethyl pyrocarbonate에 의한 화학 수식에 의하여 histidine임이 확인되었다. 4) 대두 $\alpha$-galactosidase의 활성은 2-mercaptoethanol과 L-cysteine에 의하여 약간 저해되었다. 6. 정제효소의 효소학적 성질 1) 대두 $\alpha$-galactosidase의 최적 작용 pH는 pH6.0, 최적 작용온도는 $40^{\circ}C$이었고, Aspergillus niger $\alpha$-galactosidase 각각 pH6.5 및 $40^{\circ}C$이었다. 2) 대두 및 Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase는 $45^{\circ}C$이하에서 비교적 안정하였으나 $60^{\circ}C$에서 10분 처리시 대두 $\alpha$-galactosidase는 25%, Aspergillus niger $\alpha$-galactosidase는 46%의 잔존활성을 나타내었다. 3) 대두 $\alpha$-galactosidase는 pH5.5~6.5, Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase는 pH6.0~7.0에서 매우 안정하였다. 4) 대두 및 Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase간에 기질 특이성상의 차이가 없었으며, stachyose보다 raffinose를 잘 분해하였고, gaIactose는 양효소의 활성을 저해하였다. 5) 대두 $\alpha$-galactosidase의 P-nitrophenyl-$\alpha$-gaIactopyranoside, raffinose 및 stachyose에 대한 Km값은 각각 5.3mM, 50.0mM 및 55.5mM이 었고, Aspergillus niger $\alpha$-galactosidase에 있어서는 각각 5.0mM, 37.0mM 및 55.5mM이었다. 6) 대두 $\alpha$-galactosidase의 p-nitrophenyl-$\alpha$-d-gaIactopyranoside에 대한 활성화 에너지는 13.024Kcal/mole, $Q_{10}$값은 2.0이 었으며, Aspergillus niger의 $\alpha$-galactosidase는 각각 8.515Kcal/mole 및 1.38이었다.

• 한국가금학회지
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• 제14권2호
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• pp.103-108
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• 1987

본 연구는 우모를 3가지 다른 방법으로 가공한 우모분과 생우모분, 그리고 시판 우모분에 대한 병아리 생체내의 아미노산 이용율을 조사하였다. 우모의 가공방법으로서는 증기가압 솥에서 2kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 30분간 처리한 우모분, 3kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 90분간 처리한 우모분, 4kg/$\textrm{cm}^2$에서 120분간 처리한 우모분, 시판하는 우모분 그리고 생우모분으로서 이들 우모분을 Abor Acre 계통 육용계 수컷 (체증100-140g)에 반정제 사료 형탸로 meal feeding하고 대사성과 내인성 배설물의 아미노산을 측정키 위해 무단백질 사료를 급여하였다. 가공된 우모분과 배설물들의 시료는 ion-exchange chromatography에 의해서 아미노산을 측정하여 아미노산 조성과 아미노산 이용율을 결정하졌는데 그 결과는 다음과 같이 요약된다. 1. 증기가압처리의 증가에 따라 우모분의 cystine 함량이 현저히 감소하였으나 다른 아미노산은 변화가 없었다. 2. 아미노산 이용율에 있어서는 생우모분, 2kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 30분처리 우모분, 시판 우모분, 4kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 120분처리 우모분, 그리고 3kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 90분간 처리 우모분이 각각 -3.09%, 63.28%, 67.46%, 71.22%, 그리고 73.75% 순위로 높았다. 3. 필수 아미노산의 평균 이용율에 있어서는 생우모분, 2kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 30분처리 우모분, 시판 우모분, 4kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 120분처리 우모분 3kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 90분처리 우모분이 각각 2,55%, 66.78%, 66.89%, 72.56%, 73.62% 순위로 높았다. 4. 중기가압처리 우모분과 시판우모분의 개별 아미노산 이용율에 있어서는 methionine, phenyl-alanine, leucine, arginine, threonine, isoleucine순위로 높았으나 histidine, lysine, aspartic acid는 이용율이 낮았다. 이상의 결과로서 3kg/$\textrm{cm}^2$ 압력에서 90분처리 우모분은 아미노산 이용율이 우수함을 알 수 있었다.