• Applied Microscopy
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• 제22권2호
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• pp.66-74
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• 1992

In an attempt to produce transgenic amphibia, bacteriophage ${\lambda}-DNA$ was microinjected into fertilized eggs of Xenopus laevis, and the effect on early embryogenesis and the ultrastructural behavior of exogenous DNA were investigated. The effect of microinjected gene on embryonic development showed differences according to the concentration of injected DNA and the incubation temperature. Various concentrations of ${\lambda}-DNA$ were tested. Among those, microinjection of 1-2 ng DNA dissolved in 20 nl TE buffer was not shown to disturb normal embryonic development and was recorded the highest survivability to the late tadpole stage (Stage 43); however, injection of increased concentrations of DNA than above provoked irregular cleavages or abnormal appearances, which resulted in reduced survivability. When the injected embryos were incubated at low temperatures (e.g., $12^{\circ}C$), 54.5% of the embryos developed to Stage 43, whereas 42.4% survived when incubated at room temperature. The survivability showed also differences according to the injection site. 58.0% of the embryos developed to Stage 43 when microinjected into the vegetal pole, whereas 44.9% survived when microinjected into the animal pole. To understand the structural fate or behavior of injected DNA a combined light and electron microscopical study was applied. The nucleus-like structure was observed in the ${\lambda}$ DNA-injected embryos, which was quite a similar to the interphase nuclei of normal Xenopus laevis. The nucleus-like structure showed the typical double-layered nuclear membrane and nuclear complexes; however, it consisted of unusual structures such as furrows of nuclear envelope into the nucleoplasm.

• Journal of Plant Biology
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• 제30권4호
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• pp.225-247
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• 1987

Meiosis and postmeiotic mitosis in Boletus rubinellus were examined ultrastructurally. Meriosis occurred at the apex of the basidium. A sausage-shaped spindle pole body(SPB) was observed along with the presence of synaptonemal complexes during pachytene and a diglobular SPB was present on late pachytene or diplotene nuclei. During metaphase I, the monoglobular SPB at the spindle pole was surrounded bya membrane and the nuclear enveloope was discontinuous. At anaphase I, the chromosomes became better defined and formed a central spindle. The nucleolus was extruded from the nucleus. During anaphase I, the SPB was excluded from the chromosomal region by a membrane and both poles were fully separated to opposite sides of the basidial wall. In meiosis II, the two nuclei divided synchronously and the spindles were parallel. The spindles were smaller than in meiosis I, while the SPB was approximately the same size as that of the similar stage in meiosis I. During anaphasetelophase II, the SPB was surrounded by a cap of endoplasmic reticulum (ER) that delimited it from the spindle. The postmeiotic interphase nuclei migrated to the mid-region of the basidium before migration to the spores. The SPB at this stage was diglobular. A postmeiotic mitosis occurred within the basidiospore, and the plane of the spindle was obique to the long axis of the spore. The spindle and SPB were smaller than at meiosis I and there were fewer nonchromosomal microtubules. At anaphase, the nucleolus was present inside the nuclear envelope but lateral to the spindle.

• BMB Reports
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• 제48권7호
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• pp.413-418
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• 2015

DEPDC1 is a recently identified novel tumor-related gene that is upregulated in several types of cancer and contributes to tumorigenesis. In this study, we have investigated the expression pattern and functional implications of DEPDC1 during cell cycle progression. Expression studies using synchronized cells demonstrated that DEPDC1 is highly expressed in the mitotic phase of the cell cycle. Immunofluorescence assays showed that DEPDC1 is predominantly localized in the nucleus during interphase and is redistributed into the whole cell upon nuclear membrane breakdown in metaphase. Subsequently, siRNA-mediated knockdown of DEPDC1 caused a significant mitotic arrest. Moreover, knockdown of DEPDC1 resulted in remarkable mitotic defects such as abnormal multiple nuclei and multipolar spindle structures accompanied by the upregulation of the A20 gene as well as several cell cycle-related genes such as CCNB1 and CCNB2. Taken together, our current observations strongly suggest that this novel cancerous gene, DEPDC1, plays a pivotal role in the regulation of proper mitotic progression. [BMB Reports 2015; 48(7): 413-418]

• 생명과학회지
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• 제15권2호
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• pp.253-260
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• 2005

인체 MCAK 단백질을 Escherichia. coli에서 재조합 단백질로 발현하였다. 이를 SDS-PAGE 후 electroelution으로 정제하고 항원으로 사용하여 rat에서 다클론성 항체생성을 유도한 결과, 생성된 항체는 Western blot analysis에 의해 인체 MCAK 단백질 (81 kDa)을 특이적으로 인식할 수 있었으며, Jurkat T cells과 293T cells에 있어서 MCAK 단백질의 대부분이 핵 내에 위치함을 확인할 수 있었다. 세포주기에 따른 MCAK 단백질의 발현양의 변화를 조사하기 위해, Jurkat T cells을 Hydroxy urea 또는 Nocodazole의 처리로 $G_{1}/S$ boundary 그리고 $G_{2}/M$ boundary에 blocking하고 이로부터 release 시키는 시간을 달리하여 다양한 세포주기상에 위치한 Jurkat T cells을 확보하였다. 각각의 Jurkat T cells로부터 cell lysate를 얻어서 Western blot analysis를 시도한 결과, MCAK 발현양은 S phase에서 가장 높았으며 MCAK의 SDS-PAGE상의 mobility가 81 kDa에서 84 kDa로 shift됨을 확인하였다. MCAK의 전기영동상의 mobility shift에 의한 slow moving $p84^{HsMCAK}$는 S phase 후반부터 나타나기 시작하며 $G_{2}/M$ phase에 최대였고 $G_{1}$, phase에서는 확인되지 않았다. 이는 세포주기에 따라 MCAK의 단백질의 인산화 양상이 달라짐을 시사한다. 생성된 항체를 이용한 Immunocytochemical analysis의 결과, 인체 MCAK 단백질은 세포주기의 interphase에서는 주로 중심체와 핵에 존재하며, M phase의 각 단계에 따라서 spindle pole, centromere, spindle fiber 또는 midbody에 존재함을 확인하였다. 이러한 연구 결과는 E. coli에서 발현된 재조합 HsMCAK 단백질을 항원으로 하여 rat에서 생산한 다클론성 항체가 HsMCAK 단백질을 특이적으로 인식할 수 있음과 또한 HsMCAK 단백질의 인산화를 나타내는 SDS-PAGE상의 mobility-shift가 $G_{2}/M$ phase에 최대에 도달하는 양상으로 세포주기에 따라 변동됨을 나타내며, HsMCAK의 인산화와 HsMCAK의 세포 내 위치간의 관련성을 시사한다. 아울러 이러한 연구결과는 hamster 및 Xenopus 등에서 주로 연구되고 있는 MCAK의 세포주기상의 주요기능이 인체세포에도 적용될 수 있음을 시사한다.

• Journal of Genetic Medicine
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• 제4권2호
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• pp.190-195
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• 2007

목 적:산전진단에 있어 빠른 진단을 위해 그 유용성이 널리 알려져 있는 FISH 방법을 미배양 세포에 적용할 때, 그 민감도를 높이기 위해 본 연구소의 경험과 기준을 소개하고자 한다. 방 법:1999년 5월부터 2006년 6월까지 본연구소에서 다운증후군 고위험군, 에드워드 증후군 고위험군, 고령산모, 초음파 이상소견 등의 적응증을 주소로 시행한 7,893례의 양수검체를 대상으로 빠른 진단을 위해 8,613례의 미배양 양수세포에 FISH 검사를 시행하였다. 분석은 함춘유전연구소의 기준에 따랐으며, 기존의 세포유전학적 결과와 최종 비교하였다. 결 과:8613례의 FISH 검사 결과, 30개 이상의 세포관찰이 가능하고, 정상인 경우 정상세포의 비율이 75%, 비정상의 경우 비정상 세포의 비율이 70%에 해당하는 8,502례의 결과를 얻었으며, 세포유전학적 결과와도 일치하였다. 결 론:산전진단 시 빠른 진단을 위한 FISH검사는 매우 유용하며, 정확한 분석을 위해 그 기준을 마련하는 것은 매우 중요하다 하겠다. 그러나 비용과 인력이 많이 소요되는 한계점을 가지고 있다.

• 한국환경농학회지
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• 제37권3호
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• pp.229-234
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• 2018

In vitro 소핵시험(vitMNT)은 유전독성의 유망한 대체시험법 중 하나로, OECD에서 TG로 채택되어 화학물질의 등록에 사용되고 있다. 본 시험에서는 CHL cell을 사용한 vitMN test에서 소핵을 판별하기 위한 최적화된 세포질 조건을 찾고자 하였으며, 양성대조물질로 MMC와 Col을 사용하고 세포 염색을 위해 giemza 용액을 사용하였다. 시험결과, 세포현탁을 위해 사용되는 고정액의 acetic acid의 농도는 1%로 하는 것이 band의 두께와 세포질의 퍼짐성 측면에서 적당하였다. 또한 세포의 깨짐을 최소화하는 최종 고정액의 적하시간은 현탁 후 1~4시간이었다. 이러한 결과는 vitMNT에서 소핵관찰의 신속성, 용이성 및 정확성을 확보하는데 도움이 될 것이다.