Recently, a significant understanding of the molecular mechanisms regulating spermatogenesis has been achieved utilizing small RNA molecules (small RNAs), including small interfering RNAs (siRNAs), microRNAs (miRNAs), and Piwi-interacting RNAs (piRNAs) which emerged as important regulators of gene expression at the post-transcriptional or translation level. piRNAs are only present in pachytene spermatocytes and round spermatids, whereas miRNAs are expressed abundantly in male germ cells throughout spermatogenesis. This review is aimed at providing a glimpse of piRNAs and their interacting family proteins such as PIWIL1, PIWIL2, and PIWIL4 in spermatogenesis.
Escherichia coli F plasmid partition apparatus is composed of two trans-acting proteins (SopA and SopB) and one cis-acting DNA sequence (sopC). The SopB-sopC complex has been suggested to serve a centromere-like function through its interaction with chromosomally encoded proteins which remain to be identified. In this paper, we are introducing a new yeast 1.5-hybrid system which assembles the two-hybrid and one-hybrid system as a mean to find and additional component of the F plasmid partition system, interacting with DNA (sopC)-bound SopB protein. The results indicates that this system is a promising one, capable of selecting an interacting component.
최근 단백질 및 도메인과 관련된 방대한 양의 데이타들이 인터넷상에 공표되고 축적됨에 따라, 단백질간의 상호작용에 대한 예측 시스템의 필요성이 제기되고 있다. 본 논문에서는 이러한 데이타를 이용하여 계산적으로 도메인 조합 쌍에 기반하여 단백질의 상호작용 확률을 예측하는 새로운 단백질 상호작용 예측 시스템을 제안한다. 제안된 예측 시스템에서는 기존의 도메인 쌍(domain pair)의 제약성을 극복하기 위하여 도메인 조합(domain combination)과 도메인 조합 쌍(domain combination pair)의 개념이 새롭게 도입하였다. 그리고 도메인 조합 쌍(domain combination pair 또는 dc-pair)을 단백질 상호작용의 기본 단위로 간주하고 예측을 시도한다. 예측 시스템은 크게 예측 준비 과정과 서비스 과정으로 구성되어 있다. 예측 준비 과정에서는 상호작용이 있는 것으로 알려진 단백질 쌍 집합과 상호작용이 없는 것으로 추정되는 단백질 도메인 쌍 집합으로부터 각각 도메인 조합 정보와 그 출현 빈도를 추출한다. 추출된 정보들은 출현 확률 배열(Appearance Probability Matrix 또는 AP matrix)로 불리는 배열 구조에 저장된다. 논문에서는 출현 확률 배열에 기반을 두어, 단백질-단백질 상호작용을 예측하는 확률식 PIP(Primary Interaction Probability)를 고안하고, 고안된 확률식을 이용하여, 상호작용이 있는 것으로 알려진 단백질 쌍 집합과 상호작용이 없는 것으로 추정되는 단백질 도메인 쌍 집합의 확률 값 분포를 생성시킨다. 예측서비스 과정에서는 예측 준비 과정에서 얻어진 분포와 확률식을 이용하여 임의의 단백질 쌍의 상호작용 확률을 계산한다. 예측 모델의 유효성은 효모(yeast)에서 상호작용이 있는 것으로 보고된 단백질 쌍 집합과 상호작용이 없는 것으로 추정되는 단백질 쌍 집합을 이용하여 검증하였다. DIP(Database of Inter-acting Proteins)의 상호작용이 있는 것으로 알려진 효모 단백질 쌍 집합의 80%를 학습 집단으로 사용했을 때, 86%의 sensitivity와 56%의 specificity를 나타내어, 도메인을 기반으로 한 기존의 예측 시스템에 비해서 우월한 예측 정확도를 보여주었다. 이와 같은 예측 정확도의 개선은 본 예측 시스템이 상호작용의 기본 단위로 dc-pair를 채택한 점과 분류를 위하여 새롭게 고안하여 사용한 PIP식이 유효했던 것으로 판단된다.
Fusobacterium nucleatum is a gram-negative bacteria associated with diverse infections like appendicitis and colorectal cancer. It mainly attacks the epithelial cells in the oral cavity and throat of the infected individual. It has a single circular genome of 2.7 Mb. Many proteins in F. nucleatum genome are listed as "Uncharacterized." Annotation of these proteins is crucial for obtaining new facts about the pathogen and deciphering the gene regulation, functions, and pathways along with discovery of novel target proteins. In the light of new genomic information, an armoury of bioinformatic tools were used for predicting the physicochemical parameters, domain and motif search, pattern search, and localization of the uncharacterized proteins. The programs such as receiver operating characteristics determine the efficacy of the databases that have been employed for prediction of different parameters at 83.6%. Functions were successfully assigned to 46 uncharacterized proteins which included enzymes, transporter proteins, membrane proteins, binding proteins, etc. Apart from the function prediction, the proteins were also subjected to string analysis to reveal the interacting partners. The annotated proteins were also put through homology-based structure prediction and modeling using Swiss PDB and Phyre2 servers. Two probable virulent factors were also identified which could be investigated further for potential drug-related studies. The assigning of functions to uncharacterized proteins has shown that some of these proteins are important for cell survival inside the host and can act as effective drug targets.
Red ginseng, which has a variety of biological and pharmacological activities including antioxidant, anti-inflammatory, antimutagenic and anticarcinogenic effects, has been used for thousands of years as a general tonic in traditional oriental medicine. Here, we tested the immune regulatory activities of hydrolyzed red ginseng by malted barley (HRG) on the expressions of receptor interacting proteins (Rip) 2 and $I{\kappa}B$ kinase-beta (IKK-${\beta}$) in mouse peritoneal macrophages. We show that HRG increased the activations of Rip 2 and IKK-${\beta}$ for the first time. When HRG was used in combination with recombinant interferon-${\gamma}$ (rIFN-${\gamma}$), there was a marked cooperative induction of nitric oxide (NO) production. The increased expression of inducible NO synthase from rIFN-${\gamma}$ plus HRG-stimulated cells was almost completely inhibited by pre-treatment with pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC), an inhibitor of nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$). In addition, the treatment of peritoneal macrophages with rIFN-${\gamma}$ plus HRG caused significant increases in tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ mRNA expression and production. Because NO and TNF-${\alpha}$ play an important role in the immune function and host defense, HRG treatment can modulate several aspects of the host defense mechanisms as a result of the stimulations of the inducible nitric oxide synthase and NF-${\kappa}B$. In conclusion, our findings demonstrate that HRG increases the productions of NO and TNF-${\alpha}$ from rIFN-${\gamma}$-primed macrophages and suggest that Rip2/IKK-${\beta}$ plays a critical role in mediating these immune regulatory effects of HRG.
The retinoid-related orphan nuclear receptor gamma ($ROR{\gamma}$) plays critical roles in regulation of development, immunity and metabolism. As transcription factor usually forms a protein complex to function, thus capturing and dissecting of the $ROR{\gamma}$ protein complex will be helpful for exploring the mechanisms underlying those functions. After construction of the recombinant tandem affinity purification (TAP) plasmid, pMSCVpuro $ROR{\gamma}$-CTAP(SG), the nuclear localization of $ROR{\gamma}$-CTAP(SG) fusion protein was verified. Following isolation of $ROR{\gamma}$ protein complex by TAP strategy, seven candidate interacting proteins were identified. Finally, the heat shock protein 90 (HSP90) and receptor-interacting protein 140 (RIP140) were confirmed to interplay with $ROR{\gamma}$ by co-immunoprecipitation. Interference of HSP90 or/and RIP140 genes resulted in dramatically decreased expression of CYP2C8 gene, the $ROR{\gamma}$ target gene. Data from this study demonstrate that HSP90 and RIP140 proteins interact with $ROR{\gamma}$ protein in a complex format and function as co-activators in the $ROR{\gamma}$-mediated regulatory processes of HepG2 cells.
Vaccinia-related kinase 1 (VRK1) and VRK3 are members of the VRK family of serine/threonine kinases and are principally localized in the nucleus. Despite the crucial roles of VRK1/VRK3 in physiology and disease, the molecular and functional interactions of VRK1/VRK3 are poorly understood. Here, we identified over 200 unreported VRK1/VRK3-interacting candidate proteins by affinity purification and LC-MS/MS. The networks of VRK1 and VRK3 interactomes were found to be associated with important biological processes such as the cell cycle, DNA repair, chromatin assembly, and RNA processing. Interactions of interacting proteins with VRK1/VRK3 were confirmed by biochemical assays. We also found that phosphorylations of XRCC5 were regulated by both VRK1/VRK3, and that of CCNB1 was regulated by VRK3. In liver cancer cells and tissues, VRK1/VRK3 were highly upregulated and its depletion affected cell cycle progression in the different phases. VRK3 seemed to affect S phase progression and G2 or M phase entry and exit, whereas VRK1 affects G1/S transition in the liver cancer, which could be explained by different interacting candidate proteins. Thus, this study not only provides a resource for investigating the unidentified functions of VRK1/VRK3, but also an insight into the regulatory roles of VRK1/VRK3 in biological processes.
Because of the importance of the type III protein-secretion system in bacteria-plant interaction, its function in bacterial pathogenesis of plants has been intensively studied. To identity bacterial proteins interacting with Xanthomonas hrp gene products that are involved in pathogenicity, we performed the glutathione-bead binding analysis of Xanthomonas lysates containing GST-tagged Hrp proteins. Analysis of glutathione-bead bound proteins by 1-DE and MALDI-TOF has demonstrated that Avr proteins, RecA, and several components of the type III secretion system interact with HrpB protein. This proteomic approach could provide a powerful tool in finding interaction partners of Hrp proteins whose roles in host-pathogen interaction need further studies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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