The genotoxicity of water extract of Bojungikkeehapdaechilki-tang was tested by In Vitro Chromosome Aberration Test. Bacterial Reverse Mutation Assay and Micronucleus test according to OECD Guidelines and KFDA Guidelines. The obtained results were as follows : 1. Chromosome Aberration Test: In Vitro Chromosome Aberration Test of Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts was carried out using cultured Chinese hamster lung cells in the presence and absence of metabolic activation system(S-9 mix). No significant changes in the number of aberrant metaphases having structural and number of aberrations were detected in Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts treated groups. 2. Bacterial Reveres Mutation Assay: Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts was evaluated for its potential to induce reverse mutation in the histidine auxotroph strains of Salmonella typhimurium such as TA100, TA1535, TA98 and TAl537 and the tryptophan auxotroph strain of Escherichia coli WP2 uvrA. No significant changes in the number of revertant colonies compared to its negative control were detected in Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts treated groups against all 5 strains. 3. Micronucleus test: Micronucleus test of Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts were performed using specific pathogen free 7-week old male ICR mouse. No significant changes in the number of micronucleated polychromatic erythrocytes among 2000 polychromatic erythrocytes compared to negative control were detected in all Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts treated groups. In summarized above-mentioned results, it is concluded that Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts have not genotoxicity against In Vitro Chromosome Aberration Test, Bacterial Reverse Mutation Assay and Micronucleus test.
Smoke flavors based on the thermal decomposition of wood have been applied to a variety of food products as an alternative for traditional smoking. Despite its increasing use, the available genotoxicity data on wood smoke flavors (WSF) are still controversial. Thus, potential genotoxic effects of WSF in four short-term in vitro genotoxicity assays were investigated, which included the Ames assay, chromosomal aberration assay, micronucleus test and the alkaline comet assay. WSF did not cause any mutation in the Ames assay using five tester strains at six concentrations of 0.16, 0.31, 0.63, 1.25, 2.5 and 5 ${\mu}l/plate$. To assess clastogenic effect, the in vitro chromosomal aberration assay was performed using Chinese hamster lung cells. No statistically significant increase in the number of metaphases with structural aberrations was observed at the concentrations of 1.25, 2.5, and 5 ${\mu}l/ml$. The in vitro comet assay and micronucleus test results obtained on L5178Y cells also revealed that WSF has no genotoxicity potential, although there was a marginal increase in micronuclei frequencies and DNA damage in the respective micronucleus and comet assays. Taken together, based on the results obtained from these four in vitro studies, it is concluded that WSF is not a mutagenic agent in bacterial cells and causes no chromosomal and DNA damage in mammalian cells in vitro.
생약재의 식품ㆍ생물 산업적 이용증대에 따라 생약재의 안전한 위생화 기술이 요구되고 있다 본 연구에서는 생약재의 위생화 기술로서 방사선 조사기법의 활용 가능성을 검토하기 위하여, 감마선을 조사한 생약재 3종에 대한 유전독성학적 안전성을 평가하고자 하였다. 공시 재료는 오염유기체 완전 구제선량인 10 kGy의 감마선을 조사시킨 황기, 백출 및 승마로 하였으며, 각각의 열수 추출물의 유전독성을 in vitro 시험으로 평가하였다. 유전독성 평가는 Salmonella typhimurium TA98 및 TA100 균주를 이용한 복귀 돌연변이 시험(Ames test)과 Chiilese hamster ovary(CHO) 세포를 이용한 in vitro 소핵 유발 시험으로 시행하였다. 각각의 시험은 59 nix를 첨가한 대사 활성화 시스템과 첨 가하지 않은 비활성화 시스템으로 구분하여 실시하였으며, 시료의 최고 처리 농도는 복귀돌연변이 시험에서는 5mg/plate로, 소핵유발시험에서는 50%의 세포증식 억제를 나타내는 농도(1 mg/mL)로 하였다. 복귀 돌연변이 시험 결과 대사 활성화 및 비활성화의 경우 모두에서 각 시료에 의한 복귀변이 집락수의 증가를 인정할 수 없었으며, 각 용량단계에서 감마선 조사군과 비조사군 간의 차이도 볼 수 없었으므로 음성으로 판정하였다. 소핵 유발시험에서도 음성 대조군 및 감마선 조사군과 비조사군 모두 각 용량 단계에서 세포 내에 생성된 소핵의 빈도가 3% 이하로 나타남에 따라, 시료에 의한 소핵의 유발을 인정할 수 없었으므로 음성으로 판정하였다 따라서 감마선이 조사된 각각의 시료는 직접 및 간접 돌연변이원으로 작용하지 않으며 세포유전 독성을 나타내지 않음을 확인할 수 있었다. 향후, 생체내 유전독성 시험, 만성독성 시험 및 생식독성 시험 등의 추가적인 in vivo실험이 행하여진다면 감마선 조사 생약재의 안전성을 보다 명확히 밝힐 수 있을 것으로 생각된다.
This experiment was performed to determine the safety of the Korean red ginseng irradiated with gamma rays with respect to genotoxicity. Ethanol extracts of the 5 and 10 kGy gamma-irradiated red ginseng were examined in two short-term in vitro tests : (1) Salmonella typhimurium reversion assay(Ames test) in strain TA 98, TA 100 and TA 102 (2) Micronucleus test in cultured Chinese hamster ovary(CHO) cells. No mutagenicity was detected in the two assays with or without metabolic activation. It was suggested that the Korean red ginseng irradiated with gamma rays did not cause genotoxicity in vitro. Further tests of genotoxicity in vivo, chronic and reproductive toxicity should be carried out to determine whether it is safe to irradiate Korean red ginseng with practical doses of gamma rays.
In vitro 소핵시험(vitMNT)은 유전독성의 유망한 대체시험법 중 하나로, OECD에서 TG로 채택되어 화학물질의 등록에 사용되고 있다. 본 시험에서는 CHL cell을 사용한 vitMN test에서 소핵을 판별하기 위한 최적화된 세포질 조건을 찾고자 하였으며, 양성대조물질로 MMC와 Col을 사용하고 세포 염색을 위해 giemza 용액을 사용하였다. 시험결과, 세포현탁을 위해 사용되는 고정액의 acetic acid의 농도는 1%로 하는 것이 band의 두께와 세포질의 퍼짐성 측면에서 적당하였다. 또한 세포의 깨짐을 최소화하는 최종 고정액의 적하시간은 현탁 후 1~4시간이었다. 이러한 결과는 vitMNT에서 소핵관찰의 신속성, 용이성 및 정확성을 확보하는데 도움이 될 것이다.
감마선 조사(10 kGy)된 멸치 액젓의 유전독성 학적 안전성 시험을 수행하기 위해 Salmonella Typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537과 E. coli WP2 uvrA 균주를 사용한 복귀돌연변이시험과 Escherichia coli PQ37을 이용한 SOS chromotest 및 CHL 세포를 이용한 염색체 이상시험을 활성대사효소계 미적용 및 적용하에 실시하였고, ICR마우스의 골수세포를 이용한 in vivo 소핵세포실험을 수행하였다. 감마선 조사(10kGy)된 멸치액젓은 위의 3가지 in vitro실험에서 비조사 된 멸치액젓과 마찬가지로 음성으로 나타났다. 또, 감마선 조사 및 비조사된 멸치 액젓의 in vivo소핵세포실험에서도 소핵이 발견되지 않았다. 따라서 10kGy까지 감마선 조사된 멸치 액젓은 위 수행된 in vitro 및 in vivo 유전독성 시험을 실시한 결과, 음성을 나타낸 것으로 보아 유전독성학적으로 돌연변이원성이 없는 것으로 확인되었다.
To assess the genotoxicity of AS6, several classical toxicological tests were performed. In Ames test, AS6 did not show any transformation of revertant with or without S-9 metabolic activating system, indicating the lack of mutagenic effect of the compound. To assess clastogenic effect, in vivo micronucleus and in vitro chromosomal aberration assays were performed using male ICR mice and Chinese hamster lung (CHL) fibroblast cells, respectively. Chromosomal aberration was not induced regardless of the presence of S-9 metabolic activating system. In addition, AS6 did not cause any increase in the incidence of micronucleated polychromatic erythrocytes at any of the dose levels, suggesting little clastogenicity in vitro or in vivo. Taken together, these results demonstrate that AS-6 has no mutagenic effect in our test system.
Erythritol is a sugar alcohol that is widely used as a natural sugar substitute. Thus, the safety of its usage is very important. In the present study, short-term genotoxicity assays were conducted to evaluate the potential genotoxic effects of erythritol. According to the OECD test guidelines, the maximum test dose was 5,000 ${\mu}g$/plate in bacterial reverse mutation tests, 5,000 ${\mu}g/ml$ in cell-based assays, and 5,000 mg/kg for in vivo testing. An Ames test did not reveal any positive results. No clastogenicity was observed in a chromosomal aberration test with CHL cells or an in vitro micronucleus test with L5178Y $tk^{+/-}$ cells. Erythritol induced a marginal increase of DNA damage at two high doses by 24 hr of exposure in a comet assay using L5178Y $tk^{+/-}$ cells. Additionally, in vivo micronucleus tests clearly demonstrated that oral administration of erythritol did not induce micronuclei formation of the bone marrow cells of male ICR mice. Taken together, our results indicate that erythritol is not mutagenic to bacterial cells and does not cause chromosomal damage in mammalian cells either in vitro or in vivo.
Objectives : The genotoxicity of extract of "Hyeonggaeyeongyotang", a polyherbal formula has been used as a tonic agents in oriental medicine was tested. Methods : Extract of "Hyeonggaeyeongyotang" was tested by In Vitro Chromosome Aberration Test, Bacterial Reverse Mutation Assay and Micronucleus test according to OECD Guidelines and KFDA Guidelines [2005-60]. Results : The obtained results were as follows: 1. Chromosome Aberration Test: No significant changes in the number of aberrant metaphases having structural and number of aberrations were detected in all concentrations of "Hyeonggaeyeongyotang" extracts treated in this study. 2. Bacterial Reverse Mutation Assay: No significant increases in the number of revertant colonies compared to its negative control were detected in all concentrations of "Hyeonggaeyeongyotang" extracts treated in this study against all 5 strains except for $50{\mu}g/ml$ treated group where significantly decreases in colony numbers were detected agains all five strains used in this study as pharmacological effects not genotoxicity. 3. Micronucleus test: No significant changes in the number of micronucleated polychromatic erythrocytes among 2000 polychromatic erythrocytes compared to negative control were detected in all "Hyeonggaeyeongyotang" extracts-dosing groups tested. Conclusions : From above-mentioned results, it is concluded that "Hyeonggaeyeongyotang" extracts have not any genotoxicity against In Vitro Chromosome Aberration Test, Bacterial Reverse Mutation Assay and Micronucleus test.
In order to compare the suppressive effect of quercetin and several its glycosides, such as quercitrin (quercetin-3-rhamnoside), isoquercitrin (quercetin-3-glucoside), hyperin (quercetin-3-galactoside) and tutin (quercetin-3-rhamnosyl glucoside), on the genotoxicity by N-methyl-N-nitrosourea(MNU), in vitro sister chromatid exchange(SCE) test using mouse spleen lymphocytes and in vivo micronucleus test using mouse peripheral blood were performed. MNU-induced SCEs in vitro were not decreased by the simultaneous treatment of test compounds. Among them, quercetin and hyperin showed significant suppressive effects at high dose(10-5M). On the other hand, MNU-induced micronucleated reticulocytes(MNRETS) in vivo were significantly decreased with good dose-dependent manner in all compound tested. However, there were not significant differences between quercetin aglycone and its glycosides in the suppressive aglycone and its glycosides may act as an antigenotoxic agent in vivo and may be useful as a chemopreventive agent of alkylating agent.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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