대황(Rheum undulatum L.)의 형질전환된 뿌리의 기내(in vitro)배양으로부터 quinone계 알칼로이드 물질인 anthraquinone의 생산성을 확인하고자 하였다. 형질전환된 뿌리로부터 anthraquinone의 생산에 있어서 배지, 초기 pH, 탄소원의 농도, 광 그리고 elicitors의 영향을 조사 하였다. 형질전환된 뿌리는 6% sucrose와 0.5 mg/l $GA_3$ 그리고 50 mg/l chitosan이 첨가된 WPM 배지에 치상한 후 16/8의 광조건$(16{\mu}mol\;m^2s^1)$하에서 배양시 0.18 mg(생중량)의 anthraquinone의 생산성을 보여주었다. 이와같은 함량은 재배근의 약 1.3배에 해당된다.
본 연구팀에서는 방사선으로부터 위장관과 면역 조혈계를 보호하기 위하여 당귀, 천궁, 백작약으로부터 새로운 생약복합물 HIM-I을 개발한 바 있다. 본 연구에서는 방사선 방호뿐 아니라 다양한 생체질환의 예방에 있어 면역조혈기능이 중추적인 역할을 한다는 관점에서, HIM-I로부터 면역조혈 기능을 더욱 증진시킨 생약복합조성물 HemoHIM을 제조하여 그 효능을 검증하였다. HIM-I를 에탄을 침지하여 에탄을 분획(HIM-I-E)과 조다당 분획 (HIM-I-P)을 얻은 후, HIM-I 에 조다당 분획을 첨가하여 HemoHIM을 제조하였다. 이렇게 얻은 HemoHIM, HIM-I 및 각 분획에 대하여 재생조직 및 면역계 방호와 회복촉진 효과를 비교 검증하였다. HemoHIM 과 HIM-I는 시험 관내에서 방사선에 의한 DNA 손상을 유의 적으로 억제하고 수산화 라디칼을 소거하는 효과가 있음이 관찰되었으며, HemoHIM과 HIM-I는 거의 비슷한 활성을 나타내었다. 시험 관내 면역 세포 활성화와 골수세포 성장촉 진 실험에서는 HemoHIM이 HIM-I 비하여 높은 활성을 보였으며, 이는 HIM-I에 비해 높은 조다당 함량에 기인한 것으로 보인다. 감마선 조사 마우스를 이용한 생체 보호효과를 살펴본 결과, HemoHIM은 HIM-I와 비슷한 정도의 소장 움 생존율 증가효과를 보였으나, 내재성 비장 조혈세포집락 형성 시험에서는 HemoHIM은 HIM-I보다 높은 효과를 나타내었다. 또한 방사선조사 마우스에서 HemoHTM의 투여는 방사선 조사후 급격히 감소된 말초 혈액내 백혈구 및 림프구수의 회복을 촉진시키고, 생존율을 증대시키는 효과가 관찰되었다. 이상의 결과들은 생약복합물 HIM-I 조다당 분획을 첨가하여 개발한 새로운 생약복합조성물 HemoHIM이 방사선에 의해 유발된 위 장관 및 면역계 조직의 손상을 감소 시켜 생존을 증가시키는 효과가 있음을 제시하였다. 특히 HemoHIM은 HIM-I와 비교하여 재생조직의 산화적 손상억제 효과는 비슷하게 유지되면서도 면역 조혈세포 방호 및 회복촉진 효과가 높은 것으로 관찰되어 방사선 방호제로서 뿐만 아니라 면역조혈기능 증진제로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
Hydroxyapatite (HAp) and biphasic calcium phosphate (BCP) nano powders were synthesized using the microwave-assisted synthesis process dependent on pH and microwave irradiation time. The average size of a powder was less than 100 nm in diameter. Through in-vitro cytotoxicity tests by an extract dilution method, the HAp and BCP nano powders have shown to be cytocompatible for L-929 fibroblast cells, osteoblastlike MG-63 cells and osteoclast-like Raw 264.7 cells. The activation of osteoblast was estimated by alkaline phosphatase (ALP) activity. When the HAp and BCP were treated to MG-63 cells, alkaline phosphatase activities increased on day 3, compared with those of the untreated cells. Also, the collagen fibers increased when the HAp and BCP powders suspension were treated to MG-63 cells, compared to those of the untreated cells. Quantitative alizarin red S mineralization assays showed a trend toward increasing mineralization in osteoblast cultured with powder suspension. In conclusion, hydroxyapatite and biphasic calcium phosphate appeared to be a bone graft substitute material with optimal biocompatibility and could be further applied to clinical use as an artificial bone graft substitute.
Objectives: As interests in the beauty of skin is growing continuously, more people are focusing on white and clean skin. Melanin is the major factor that determines skin color. The abnormal concentration of melanin causes various skin diseases such as vitiligo, freckles, and melasma. This study investigated the inhibitory effect of Eriobotryae Folium extracts (EF) with phreatic water (PW) on the melanin synthesis. Methods: The effect of EF on melanin synthesis was evaluated by using mouse melanoma cells (B16F10). To define the mechanisms, real-time PCR and western blot were used. We also evaluated the inhibitory effects of EF and PW on melanin synthesis by using HRM-2 melanin-possessing hairless mice. After UVB irradiation, melanin differences between the skin parts that were treated and untreated with EF and PW. Levels of mRNA were measured by real-time quantitative PCR and histological analysis of the dorsal skin was conducted by hematoxylin and eosin staining. Results: EF inhibited various mechanisms of melanogenesis, and the effect was increased when combined with PW. In vitro experiments have shown that EF inhibited the expressions of tyrosinase related protein-1 (TRP-1) mRNA, tyrosinase mRNA, microphthalmia-associated transcription factor (MITF) mRNA and the tyrosinase inhibitory activation, but it stimulated the extracellular regulated kinase (ERK) mRNA expression. In vivo experiments have shown that EF prevented melanogenesis in the mice dorsal skin and inhibited TRP-1 mRNA expression. Also these effects were increased when combined with PW. Conclusions: EF and PW might be a new and effective treatment for whitening and treating pigmentation of skin.
Gummy stem blight caused by Didymella bryoniae occurs exclusively in cucurbits. This fungus has been known not to produce its pycnidium in vitro unless irradiated. In this study, cultural conditions for the mass-production of pycnidiospore by Metal Halide (MH) lamp irradiation were maximized. The mycelia were cultured at $26^{\circ}C$ on PDA for 2 days under dark condition, and then the plate was illuminated with MH lamp continuously for 3-4 days at $26^{\circ}C$. Results show that a great number of pycnidia were simultaneously formed. The pycnidiospores produced were then used as immunogen. Fusions of myeloma cell (v-653) with splenocytes from immunized mice were carried out. Two hybridoma cell lines that recognized the immunogen D. bryoniae were obtained. One monoclonal antibody (MAb), Dbl, recognized the supernatant while another MAb, Db15, recognized the spore. Two clones were selected which were used to produce ascite fluid of the two MAb, Dbl and Db15, the immunotypes of which were identified as IgG1 and IgG2b, respectively. Titers of MAb Dbl and MAb Db15 were measured and the absorbance exceeded 0.5 even at a $10^{-5}$ dilution. The MAbs reacted positively with D. bryoniae but none reacted with other viral isolates, Cucumber mosaic virus and Cucumber green mottle mosaic virus. Sensitivity of MAb was precise enough to detect spore concentration as low as $10^{-3}$/well by indirect ELISA. Characterization of the MAbs Dbl, Db15 antigen by heat and protease treatments, which suggests that the epitope recognized by these two MAbs was glycoprotein.
In order to construct a controlled release system of drugs and to reduce toxic side effects of 5-fluorouracil, the novel ramose chitosan-based-5-fluorouracil microspheres (CS-FU-MS) were prepared. Firstly, using chitosan (CS) as carriers and 5-fluorouracil (5-FU) as a model drug, ramose chitosan-based-5-fluorouracil (CS-FU) was efciently synthesized by chemical crosslinking method through microwave irradiation, drug loading was 10.6%; Secondly, CS-FU-MS were prepared by CS-FU self-assembled under the dialysis conditions and the free 5-FU was encapsulated further at the same time. The size dispersivity of particles is uniform, and the average diameter of the CS-FU-MS was $4{\mu}m$. The drug encapsulation efficiency was 76.1%, and the drug loading was increased to 26.22%. CS-FU-MS maintain the zero-order release time in PBS (pH = 7.4) and HCl/KCl (pH = 1.2) dialysis medium was 40h and 34h respectively, and the cumulative release were 58.89% and 79.33% in 182 h. The results showed that CS-FU-MS have excellent sustained release properties.
BACKGROUND: The aim of this study was to evaluate the combined effect of low-level laser treatment (LLLT) and recombinant human bone morphological protein-2 (rhBMP-2) applied to hypoxic-cultured MC3T3-E1 osteoblastic cells and to determine possible signaling pathways underlying differentiation and mineralization of osteoblasts under hypoxia. METHODS: MC3T3-E1 cells were cultured under 1% oxygen tension for 72 h. Cell cultures were divided into four groups: normoxia control, low-level laser (LLL) alone, rhBMP-2 combined with LLLT, and rhBMP-2 under hypoxia. Laser irradiation was applied at 0, 24, and 48 h. Cells were treated with rhBMP-2 at 50 ng/mL. Alkaline phosphatase activity was measured at 3, 7, and 14 days to evaluate osteoblastic differentiation. Cell mineralization was determined with Alizarin red S staining at 7 and 14 days. Western blot assays were performed to evaluate whether p38/protein kinase D (PKD) signaling was involved. RESULTS: The results indicate that LLLT and rhBMP-2 synergistically increased alkaline phosphatase (ALP) activity and mineralization. Western blot analyses showed that expression of type I collagen, runt-related transcription factor 2 (RUNX2), and Osterix (Osx), increased and expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha ($HIF-1{\alpha}$), decreased more in the LLLT and rhBMP-2 combined group than in the rhBMP-2 or LLL alone groups. Moreover, LLLT and rhBMP-2 stimulated p38 phosphorylation and rhBMP-2 and LLLT increased Prkd1 phosphorylation. CONCLUSION: Combined treatment with rhBMP-2 and LLL induced differentiation and mineralization of hypoxic-cultured MC3T3-E1 osteoblasts by activating p38/PKD signaling in vitro.
새로운 내부 방사선 치료용(Internal radiotherapy) $^{166}Ho$-CHICO와 CHIMA를 개발하고자 한다. $^{166}Ho$-CHICO 형성에 pH, 반응시간, chitosan 농도, $^{166}Ho$의 양 등의 영향을 실험하고, 형성된 $^{166}Ho$-CHICO로부터 $^{166}Ho$-CHIMA를 제조하여 $^{166}Ho$-CHICO와 CHIMA의 체내외 안정성 검사 등의 실험을 수행하였다. $^{166}Ho$-CHICO 형성시 최적의 조건은 pH 3.0에서 0.75% 이상의 chitosan 용액과, chitosan 무게에 대해 최대 20%까지는 $^{166}Ho$이 정량적으로 착물을 형성하였고, $^{166}Ho$-CHICO를 알칼리 처리하여 $^{166}Ho$ CHIMA를 제조하였다. 그리고 $^{166}Ho$-CHICO와 CHIMA는 체내외에서 매우 안정하였다. $^{166}Ho$-CHICO와 CHIMA는 매우 이상적인 carrier로서의 특성을 지닌 천연의 chitosan에 $^{166}Ho$을 쉽게 정량적으로 표지할 수 있고, 높은 체내외 안정성으로 미루어보아 내부 방사선 치료용 제제로서의 이용 가능성이 매우 높으며, 앞으로 충분한 동물실험을 거치면 신규 내부 방사선 치료제로서 새로운 장을 열 수 있을 것이다.
급성 전신 및 부분 피폭시 피해자들에 대한 치료방침의 결정에 있어 참고자료로서 사용하기 위하여 저자들은 체외에서 말초혈액을 ${60}Co\;{\gamma}-$선으로 2Gy에서 12Gy까지 방사선 조사하여 말초 임파구에서 관찰되는 염색체이상의 빈도와 방사선량과의 관계를 실험적으로 연구하였다. 관찰된 세포중 불안정 염색체이상(dicentric 염색체, ring 염색체, acentric fragment쌍)이 나타난 세포의 비율은 2Gy에서 32%, 4Gy에서 47%, 6Gy에서 80%, 8Gy에서 94%, 10Gy이상에서는 100%였다. 급성 전신 피폭시 평균 흡수선량을 반영하는 지표인 Ydr은 2Gy에서 0.373, 4Gy에서 0.669, 6Gy에서 1.734, 8Gy에서 2.773, 10Gy에서 3.746 그리고 12Gy에서 5.454였다. 방사선량(D)과 염색체이상(dicentric염색체와 ring염색체의 합) 빈도(Ydr)와의 관계는 $Ydr=9.322{\times}10^{-2}/Gy{\times}D+2.975{\times}10^{-2}/Gy^2{\times}D^2$로 나타났다. 신체의 부분피폭시의 선량 및 과거의 피폭선량을 계산할 때 사용하는 지표인 Qdr은 2Gy에서 1.166, 4Gy에서 1.436, 6Gy에서 2.173, 8Gy에서 2.945, 10Gy에서 3.746, 그리고 12Gy에서 5.454였다. 이와 같은 선량측정방법의 신빙도를 검증하기 위하여 신체의 부분에 균일한 선량분포의 1.8Gy, 2.5Gy 및 7.0Gy의 방사선치료를 일회 받은 환자들로부터 구한 Qdr은 각각 1.109, 1.222, 2.222였으며 이로부터 $Qdr=Ydr/(1-e^{Ydr})$의 관계식을 이용하여 계산해 낸 피폭선량은 1.52Gy, 2.48Gy 및 6.54Gy로서 실제 조사한 선량과 매우 근사한 결과를 얻었다.
본 연구는 흑마늘을 함유한 화장품 시료에 대해 in vitro에서 tyrosinase 및 elastase 저해 활성과 hairless 마우스를 이용해 in vivo에서의 산화스트레스에 대한 항산화 효능을 평가하였다. 그 결과 흑마늘 화장품은 대조 화장품에 비해 유의적으로 낮은 피부 투과율을 나타내었으며(p<0.05, p<0.01) 흑마늘 화장품은 대조 화장품에 비해 유의적으로 높은 tyrosinase(p<0.05, p<0.01, p<0.001)와 elasetase(p<0.01) 활성 억제능을 나타내었다. 또한 UVB로 증가된 피부조직내 지질 과산화물과 과산화수소의 생성에 대해 대조 화장품에 비해 흑마늘 화장품은 더 높은 억제 경향을 나타내었다. 따라서 이러한 본 연구의 결과는 흑마늘이 기능성화장품 소재로의 가능성이 큼을 시사한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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