• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
• /
• 제3권3호
• /
• pp.275-282
• /
• 1999

Muscle strips and muscle cells from cat stomach were used to investigate whether spontaneously formed cyclic nucleotides were involved in the inhibition of gastric smooth muscle contraction. A phosphodiesterase inhibitor, 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), increased the levels of both cyclic GMP (cGMP) and cyclic AMP (cAMP) in resting state cells, while decreasing acetylcholine-induced muscle contraction. Under the influence of IBMX, SQ22536, an adenylyl cyclase inhibitor and methylene blue, a guanylyl cyclase inhibitor completely blocked increases in cAMP and cGMP respectively, without any effect on contraction. However, the combination of SQ22536 and methylene blue completely blocked increases in both cAMP and cGMP levels and stimulated contractions markedly even in the presence of IBMX. Muscle contraction inhibitors such as isoprenaline, vasoactive intestinal polypeptide and sodium nitroprusside also appeared to increase cyclic nucleotide levels which decreased contraction. Which nucleotide increased the most was dependent on the agonist used. Therefore, irrespective of the cyclic nucleotide class, the spontaneous formation of cyclic nucleotides should be considered in evaluating the mechanism of gastric smooth muscle relaxation.

• 한국동물학회지
• /
• 제32권2호
• /
• pp.153-162
• /
• 1989

난자성숙 재개와 1-세포기 배아의 세포주기에서, cAMP-의존성 protein kinase A와 diacylglycerol-의존성 protein kinase C가 핵막붕괴에 미치는 영향을 조사하였다. 난자성숙 재기는 dbcAMP, IBMX, TPA, 또는 diacyllycerol에 의해 억제되었다. 또한 protein kinase A와 protein kinase C 활성제를 같이 처리하면 난자성숙이 더욱 억제되었다. 그러나 1-세포기 배아의 전핵막붕괴에는 아무런 영향도 미치지 못하였으며, 단지 protein kinase C 활성제만이 세포질 분열을 억제하였다. 이상의 결과로부터, protein kinase A와 protein kinase C에 의한 단백질 인산화 양상이 GV난자의 핵막붕괴와 1-세포기 배아의 전핵막붕괴에 미치는 세포내 작용기작은 상이함을 알 수 있었으며, 전기영동 결과, 81 KD 단백질이 난자성숙 재개에 중요한 역할을 하리라 사료되었다.

• 한국동물학회지
• /
• 제28권4호
• /
• pp.245-256
• /
• 1985

흰쥐의 여포내 혹은 구멍만 낸 여포내의 난자, 또는 다른 여포에 옮겨 넣은 난자의 경우, 그 여포를 17시간 배양하여도 배양액에 hCG가 첨가되지 않는 한, 여포내 난자는 GV를 유지하였다. 즉, 기본 배양액에서 배양할 경우 88.8%-95.2%의 여포내 난자가 GV를 유지하였다. 그러나, hCG를 배양액에 첨가하였을 때 대부분이 핵막붕괴(GVBD)를 일으키고 단지 11.1%-19.4%의 여포내 난자만이 GV를 유지하였다. 난자를 dbcAMP나 IBMX가 들어있는 배양액에서 4시간 동안 배양한 후 다른 여포에 옮겨 넣어 계속 17시간동안 배양할 경우에도 그 결과가 앞의 것과 같았다. 즉 dbcAMP가 들어있는 배양액에서 배양한 후 다른 여포로 옮겨 넣었을 때 그 여포를 기본 배양액으로 배양하면 86.1%의 난자가 GV를 유지하였으며 만일 배양액에 hCG를 첨가하면 단지 13.1%의 난자가 GV를 유지하였다. 또한 IBMX가 들어있는 배양액에서 먼저 배양한 경우에는 결국 여포는 난자의 성숙을 억제하는 환경을 제공하고 있으며 이같은 억제효과는 배양액에 첨가된 hCG에 의하여 소실된다.

• 한국동물학회지
• /
• 제33권2호
• /
• pp.175-182
• /
• 1990

참구개구와 옴개구리의 여포를 생체외 배양하면서 progesterone (P$_4$)생성과 난자의 성숙 및 cyclic(cAMP)의 조절작용을 조사하였다.참개구리의 여포에 뇌하수체 추출물(frog pituitary homogenate.FPH)을 처리하면 농도에 의존하여 여포의 P$_4$생성이 증가하였으며 난자의 성숙(핵붕괴)이 일어났다. 이들 여포들을 배양하면서 3시간 간격으로 호르몬이 여포에 축적된 양, 배양액에 분비된 양 및 난자의 성숙율을 조사한 결과 FPH처리군에서 P$_4$는 3-6시간에 최고치 (여포내,약 400pg/여포;분비량,약 800pg/여포)를 나타내었으며 난자의 핵붕괴는 9-12시간에 일어났다. 상기 여포들과 같은 조건으로 배양하면서 forskolin과 3-isobutyl-1-methylxanthine(IBMX)을 배양액에 처리하여 간접적으로 여포내 cAMP의 농도를 높여주면 FPH와 유사한 양사으로 호르몬의 생성을 촉진하였다. 그러나 난자의 성숙은 전혀 일어나지 않았다. 옴개구리의 여포를 배양하면서 FPH를 처리하였을 때는 아무 처리를 하지않은 대조군과 비교하여 거의 P$_4$의 생성을 촉진하지 않았으며 난자의 성숙도 유도하지 못했다, 그러나 이들에게 forskolin과 IBMX를 처리하면 P$_4$의 생성을 현저하게 촉진하여 다량의 P$_4$가 여포와 (약 800pg/여포) 배양액에 (1700pg/여포)축적되었다.

• 한국동물학회지
• /
• 제30권2호
• /
• pp.117-139
• /
• 1987

The present experiments were carried out to investigate the mode of cAMP regulation of cumulus expansion in pig. Intracellular level of cAMP in the cumulus cells was modulated by culturing porcine cumulus oocyte complexes (COC's) with forskolin, an adenylate cyclase stimulator and 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), a phosphodiesterase inhibitor. The role of calcium in the hormone induced cumulus expansion process was also studied. Forskolin in the medium stimulated cumulus expansion from the concentration of 0.01 $\mu$M and induced full expansion at l-10 $\mu$M In contrast, IBMX in the medium (20-180 $\mu$M) failed to induce the expansion. Verapamil, a calcium ion transport blocker, suppressed follicle stimulating hormone(FSH)-induced cumulus expansion in a dose dependent fashion (0.002-0. 2 mM) when the COC's were exposed to the drugs during culture period (32 hr). But verapamil did not interfere with the triggering action of FSH during early four hours of culture period. The data presented here showed that adenylate cyclase in the porcine cumulus cells may play a key role in the regulation of the intracellular cAMP level and calcium ion may be involved in the later period of cumulus expansion process.

• 한국자원식물학회:학술대회논문집
• /
• 한국자원식물학회 2019년도 춘계학술대회
• /
• pp.117-117
• /
• 2019

Kirengeshoma koreana Nakai (K. koreana)was Saxifragaceae and rare plants in Korea, which is classified as an Critically Endangered (CR) species in Korea. Therefore, most of the studies on it were ecological and taxonomic, and there are no studies on biological activity. In this study, we evaluated the whitening activity of K. koreana extract (KKE). Melanogenesis Inhibitory effects were demonstrated by western-bot and RT-PCR for the effects of KKE on MITF, tyrosinase, TRP-1 and TRP-2 in IBMX-treated B16F10 melanoma cells. IBMX were reported as melanin synthesis enhancers. It could increase intracellular melanin synthesis by activation of the microphthalmia-associated transcription factor (MITF) signaling pathway. KKE showed no cytotoxicity at B16F10. In addition, KKE effectively inhibited the protein and mRNA levels of MITF, tyrosinase, TRP-1 and TRP-2. In conclusion, KKE inhibited melanin synthesis by inhibiting the expression of MITF and its downstream pathways tyrosinase, TRP-1 and TRP-2. Therefore, it was confirmed that K. koreana is a valuable resource for functional cosmetic and biomaterials.

• Fisheries and Aquatic Sciences
• /
• 제21권11호
• /
• pp.35.1-35.7
• /
• 2018

Background: The aim of this study was to investigate the in vitro inhibitory effects of Fucofuroeckol-A isolated from Eisenia bicyclis against tyrosinase activity and 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)-induced melanin biosynthesis in B16F10 melanoma cells. Result: Among the ethanolic (EtOH) extract of E. bicyclis and its organic solvent fractions, the ethyl acetate (EtOAc) soluble fraction showed a noticeable inhibitory effect on mushroom tyrosinase with an $IC_{50}$ value of $37.6{\pm}0.1{\mu}g/mL$. Repeated column chromatography of the active EtOAc fraction resulted in the isolation of Fucofuroeckol-A. It evidenced more potent tyrosinase inhibitory effect with an $IC_{50}$ value of $11.4{\pm}1.4{\mu}M$ than arbutin ($IC_{50}=1076.6{\pm}44.3{\mu}M$), which was used as a positive control. Lineweaver-Burk plots suggest that Fucofuroeckol-A plays as a noncompetitive inhibitor against tyrosinase. Furthermore, we have evaluated the inhibitory effects of Fucofuroeckol-A on IBMX-induced melanin formation in B16F10 melanoma cells. Fucofuroeckol-A ($12.5-100{\mu}M$) exhibited a significant inhibition of melanin production in the melanoma cells. Conclusion: In the present study, we suggested that Fucofuroeckol-A might prove possibility as a novel inhibitor of melanin biosynthesis in cosmetic applications.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
• /
• 제34권4호
• /
• pp.293-303
• /
• 2007

목 적: 본 연구는 정소에서만 발현한다고 알려져 있는 Obox4에 대한 난소 및 난자에서의 동정과 난자 성숙에 미치는 영향을 알아보고자 수행하였다. 연구방법: RT-PCR을 이용하여 발달 단계별 난소와 정소, 난자에서의 Obox4의 mRNA발현을 확인하였다. 난자 성숙동안에 Obox4의 기능을 알아보기 위해 GV 난자의 세포질에 Obox4의 dsRNA를 미세 주입하는 RNAi 방법을 사용하였다. Obox4 dsRNA를 미세주입한 후, M16 배지에서 16시간 동안 배양하거나, IBMX가 첨가된 M16 배지에서 24시간 동안 배양하면서 난자 성숙율 및 spindle, 염색체의 배치와 형상의 변화를 관찰하였다. Obox4 RNAi후 여러 유전자들의 발현 양의 변화를 RT-PCR을 이용하여 확인하였다. 결 과: Obox4의 mRNA는 난소에서 다른 Obox family들과 비교하여 낮게 발현함을 관찰하였다. Obox4 RNAi를 위해 합성된 dsRNA가 Obox4의 발현만을 특정적으로 감소시켰다. Obox4 RNAi후에 M16배지에서 16시간 배양한 군에서의 난자 성숙률은 대조군의 난자 성숙률과 별다른 차이를 보이지 않았다. 흥미롭게도, IBMX가 첨가된 M16 배지에서 24시간 동안 배양한 군에서는 대조군의 난자들이 GV 상태에 정지되어 있는데 반해, Obox4 RNAi군에서는 IBMX에서 존재함에도 불구하고, MI과 MII로의 난자 성숙이 진행되었다. 또한 Obox4 RNAi 난자의 spindle 구조는 완전히 사라지고 매우 응축되어 있는 염색체를 확인하였다. 결 론: 본 연구에서는, 생쥐의 난소 및 난자에서 Obox4의 발현을 처음으로 밝혔으며, 난자 성숙 동안에 Obox4가 염색체 분리 및 spindle 형성에 관여되어 있는 유전자임을 확인하였다. 또한, CAMP에 의해 조절되는 GV-arrest mechanism에 Obox4가 매우 밀접하게 연관되어 있을 것임을 알게 되었다.

• 한국동물학회지
• /
• 제31권3호
• /
• pp.177-184
• /
• 1988

북방산개구리의 여포를 인공배양하면서 여포의 progesterone(p$_4$) 의 생성양상과 cAMP의 조절작용을 조사하여 보았다. 배양중인 여포에 뇌하수체 추출물(frog pituitary homogenate,FPH)을 처리하였을 때 배양 한시간 부터 여포내 p$_4$의 양이 급격히 증가하였다. 그러나 생성된 p$_4$의 최대양이나(약 60-300pg/follicle),peak를 이루는 시간이(2시간 이후)개체에 따라 차이가 있었다. FPH의 처리를 받지않은 대조군에서는 배양기간에 관계없이 여포내에서 대략 10pg/follicle정도의 p$_4$가 측정되었으나 예외인 개체도 있었다. 배양액내로 분비된 p$_4$의 양은 여포내에 생성된p$_4$양의 약 60%정도 이었다. 배양액에 adenlate cyclass의 촉진제인 forskolin이나phosphodiesterase의 저해제인 3-isoburyl-1- methylxanthine(IBMX)을 동시에 혹은 따로 처리하면 p$_4$의 생성과 분비가 역시 증가하며 모든 양상이 FPH의 자극에 의한 것과 거의 같았다. 따라서 개구리여포의 스테로이드생성은 cAMP를 통하여 조절된다는 것과 여포세포내에는 cAMP의 생성과 분해에 관계하는 효소들이 있다는 것을 알았다.

• 한국동물학회지
• /
• 제29권2호
• /
• pp.79-85
• /
• 1986

생쥐난자내에 cAMP phosphodiesterase(PDE)가 존재하는 가를 확인하고 cAMP PDE와 난자성숙간의 관계를 밝히기 위해 본 실험을 행하였다. 실험결과 생쥐난자내에는 Michaelis 상수 (Km)와 반응 최대속도 (Vmax)가 다른 두종의 cAMP PDE가 있다는 것이 밝혀졌다. 즉 하나는 Km 값이 $0.14 \\pm 0.01 \\muM$ 이고 Vmax 값이 $0.42 \\pm 0.07$ fmol cAMP hydrolyzed/oocyte/minute이고, 다른 하나는 Km 값이 $14.5 \\pm 2.0 \\muM$ 이고 Vmax 값이 $2.2 \\pm 0.5$ fmol cAMP hydrolyzed/oocyte/minute이다. 또한 PDE의 cAMP 분해작용은 난자성숙 억제제로 알려진 theophylline과 isobutyl-methylxanthine에 의해 저해되었으나 그 작용은 가역적이었다. 이 실험결과는 PDE의 활성저해로 인한 난자내의 cAMP의 축적이 결국 난자성숙을 억제하고 있다는 것을 암시하고 있다.