The effect of silver sulfadiazine (SSD) on the proliferation of human dermal fibroblast (HDF) was studied to determine the impact of the drug on the wound healing process and dermal mechanical strength. Human dermal fibroblasts were cultured to 80% confluency using DMEM with 10% FBS and viability of the cell was estimated using neutral red assay. In addition, the $2^{nd}$ degree burn wound was prepared on the anterior part of rabbit ear skin and dressings containing SSD were applied for 96 h. Presence of inflammatory cells and degree of re-epithelialization were investigated in the wound. After 15 day of the induction of burn wounds, the treated area was excised and dermal mechanical strength was quantitatively measured with a constant speed tensiometer. SSD was found to be highly cyto-toxic in cultured HDF cells. The topical application of SSD (2%) could control the infection as evidenced by the lack of accumulation of inflammatory cells in histological evaluation. Therefore, these observations suggested that the impairment of dermal regeneration and decreased mechanical strength of dermal tissue was resulted from the cyto-toxic effect of SSD on dermal cells. Since the decreased mechanical strength may lead to reduction in resilience, toughness and maximum extension of the tissue, the identification of optimum dose for SSD that limits infection while minimizes the cyto-toxic effect may be clinically relevant.
The production of matrix matalloproteinases(MMPs) by the UV irradiated skin fibroblast and the degradation of extracellular matrix(ECM) by these enzymes is known as one of the main reasons of photoaging. Recently, Fisher group showed that the MMP expression is mainly regulated by the mitogen-activated protein(MAP) kinas family, such as extracellular signal-regulated kinase(ERK), c-Jun amino-terminal kinase(JNK) and p38, each of which forms a signaling pathway. In this work we first examined the effect of nitric oxide (NO) on the production of MMP-1 and MMP-2 by the human dermal fibroblasts (HDFs). NO is a multifunctional messenger molecule generated from L-arginine and involved in many kinds of signaling pathway. We found that the treatment of HDF with NO donor, sodium nitroprusside (SNP) enhanced the expression of MMPs with or without UV irradiation and the treatment with nitric oxide synthase (NOS) inhibitors resulted in the significant decrease of MMPs production. From these results, we concluded that the production of MMPs by the UV irradiated HDF is regulated through the signaling pathway involving NO and cyclic GMP.
Heo, Hee Sun;Han, Ga Eun;Won, Junho;Cho, Yeonoh;Woo, Hyeran;Lee, Jong Hun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제29권4호
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pp.518-526
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2019
Pueraria montana var. lobata is a bioactive substance with various beneficial health effects and has long been extensively used as a traditional medication for the treatment of fever, acute dysentery, diabetes, and cardiovascular diseases in Northeast Asian countries. The purpose of this study was to evaluate the cytoprotective activity of Pueraria montana var. lobata ethanol extract (PLE) for ultraviolet B (UVB)-induced oxidative stress in human dermal fibroblasts (HDF). It was hypothesized that PLE treatment ($25-100{\mu}g/ml$) would reduce intracellular reactive oxygen species (ROS) levels as well as increase collagen production in UVB-irradiated HDF. The results confirmed this theory, with collagen production increasing in the PLE treatment group in a dose-dependent manner. In addition, regulators of cellular ROS accumulation, including HO-1 and NOQ-1, were activated by Nrf2, which was mediated by PLE. Hence, intracellular levels of ROS were also reduced in the PLE treatment group in a dose-dependent manner. In conclusion, PLE increases collagen production and maintains hyaluronic acid (HA) levels in human dermal fibroblasts exposed to UVB-irradiation, thereby inhibiting photoaging.
잎새버섯(Grifola frondosa HB0071)이 생산하는 세포외 다당체인 GF-glucan이 사람섬유아세포에서 자외선(UVA)조사 시 증가되는 MMP-1 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 자외선으로부터 조사된 섬유아세포에 GF-glucan을 처리한 농도에 따라 MMP-1 발현이 억제되었으며, RT-PCR를 이용해 세포내 MMP-1 mRNA 발현 또한 감소하는 것으로 나타났다 즉, 최대 GF-glucan $0.5\%$를 처리했을 때 $54.4\%$의 MMP-1 발현을 억제하였다. 결과적으로, 잎새버섯 HB0071로부터 생산된 GF-glucan은 피부노화와 관련된 extracellular matrix (ECM) 조직에 손상을 주는 MMP-1의 활성을 억제하여 자외선으로부터 손상된 피부의 광노화로부터 보호해주는 것으로 밝혀졌다.
We investigated the protective effects of antioxidant fractions from a 70% ethanolic extract of Hizikia fusiformis in human dermal fibroblasts (HDFs). Powdered H. fusiformis was extracted with 70% ethanol and then partitioned into three fractions according to polarity using n-hexane (HFH), chloroform (HFC), and ethyl acetate (HFEA). Antioxidant activity was observed in HFEA at 0.66 mg/mL based on the half maximal inhibitory concentration ($IC_{50}$) of 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), and at 0.24 mg/mL based on alkyl radical scavenging. The protective effects of the HFEA antioxidant fraction against 2,2-azobis-(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)-damaged HDFs and the expression of Type I procollagen in HDFs were examined. HFEA caused the proliferation of HDFs with and without AAPH treatment and protected against AAPH damage to HDFs in a dose-dependent manner ($50-200{\mu}g/mL$). This implies that the antioxidant properties of the fractions depended on their proliferative and protective effects. The HFEA antioxidant fraction had significant effects and caused the dose-dependent expression of Type I procollagen, an important anti-wrinkle protein, in HDFs. In conclusion, antioxidant substances in H. fusiformis were found in the ethyl acetate fraction, and the resulting HFEA may have cosmetic applications.
본 연구에서는 피부의 표피와 진피에 분포하는 HaCaT 세포와 HDF 세포를 이용하여 항산화효과가 우수한 두릅순 추출물의 처리가 UVB에 의한 피부광노화를 억제할 수 있는지 알아보기 위하여 피부 염증반응과 관련한 사이토카인과 피부의 주요 구성 단백질인 collagen에 영향을 미칠 수 있는 MMP-1, type-I procollagen, TRPV-1 등의 단백질 발현에 미치는 영향을 분석하였다. HaCaT에 두릅순 추출물을 24시간 전처리한 경우 UVB ($55 mJ/cm^2$) 노출로 인해 증가한 염증매개인자인 IL-6, IL-8, $PGE_2$를 유의하게 감소시켰다. 또한, 피부 collagen의 정상적인 구조 및 양에 영향을 미치는 단백질들의 발현을 측정한 결과 HaCaT에서는 UVB 조사로 인해 증가한 TRPV-1과 MMP-1 단백질의 발현이 두릅순 에탄올 추출물의 전처리로 모두 감소하였고, HDF에서는 UVB를 조사한 대조군에 비하여 두릅순 추출물 처리가 MMP-1 단백질 발현을 감소시키는 동시에 collagen의 전구체인 type-I procollagen의 발현을 증가시키는 효과를 보였다. 이들 결과들로부터 항산화효과가 우수한 두릅순 70% 에탄올 추출물은 피부세포에서 UVB에 의한 염증반응을 억제시키는 동시에 피부 collagen의 감소를 억제시킴으로써 피부 광노화를 예방할 수 있는 천연 소재로 이용될 수 있다고 본다.
In order to reveal immunopathogenesis of periodontal tissue destruction, it is important to clarify the molecular mechanism of trafficking and retention of activated leukocytes, including monocytes/macrophages. Gingival fibroblasts may be involved in the regulation of inflammatory cell accumulation in the extravascular periodontal connective tissues via cytokine production and surface expression of adhesion molecules. In this study, it was investigated the molecular basis for the adhesive interactions between monocytes and fibroblasts such as peri-odontal ligament fibroblast(PDLF), human gingival fibroblast(HGF), and human dermal fibroblast(HDF). First, it was examined the evidence whether monocyte-fibroblast cell contact may cause signal transduction in fibroblasts. Being directly in contact with fixed human monocyte cell line THP-1, or U937, upregulation of IL-6 production, $TNF-{\alpha}$ mRNA expression and increased cell proliferation could be seen for fibroblasts. IL-6 production induced by monocyte- fibroblast coculture were further increased when fibroblasts had been pretreated with $IFN-{\gamma}$ or $IL-1{\beta}$ , and monocytes with LPS. Next, it was examined the expression of ICAM-1 which has been known to be involved in accumulation and activation of leukocytes in inflammatory diseases such as periodontitis. ICAM-1 was upregulated up to 10-fold on PDLF, HGF, and HDF by exposure to $IFN-{\gamma}$ or $IL-1{\beta}$. Furthermore, anti-ICAM-1 monoclonal antibody clearly blocked cocultureinduced IL-6 production by fibroblasts, suggesting that $ICAM-1/{\beta}_2$integrin pathway is involved in periodontal fibroblastmonocyte interaction. Overall, these findings provide evidence that periodontal fibroblasts could be involved in the accumulation and retention of monocytes/macrophages in periodontal inflammatory lesion at least in part by ICAM-1 expression. In addition, periodontal fibroblast-monocyte interaction could cause activation signals in fibroblasts intracellularly which result in cytokine production and cell proliferation. Thus, periodontal fibroblasts are speculated to play an important role in immunoregulation and tissue destruction in chronic periodontal diseases by interaction with monocytes/macrophages.
본 연구는 인체에 무해하고 안정성이 높은 천연 항산화제를 개발하고자 그라비올라 잎을 열수 추출하여 항산화 활성을 알아보았다. 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량, DPPH radica 소거능과 MTT assay 세포 독성 활성을 측정하였다. 그 결과 그라비올라 잎 분말 300 g을 사용하여 $98^{\circ}C$ 온도에서 열수 추출물 62.3 g을 얻었으며 그라비올라잎 1 mg/mL 추출물 내에 총 폴리페놀 함량은 $291.92{\pm}2.39{\mu}g/mL$과 총 플라보노이드 함량은 $161{\pm}7.85{\mu}g/mL$의 함량을 나타내었다. DPPH radical 소거능은 농도 1, 2.5, 5, 10 및 15 mg/mL에서 51.6%, 67.8%, 79%, 82.4% 및 83.9% 농도 의존적 소거능을 나타내었으며 의미 있는 항산화 효과를 보였다. 인간 진피 섬유아세포 (Human Dermal Fibroblasts ; HDF)에 대한 세포 독성을 측정한 결과, 150 mg/ml 농도에서 대조군과 같은 100%의 세포 생존율을 나타내었고 이보다 적은 농도에서는 더 높은 세포 생존율을 나타내었다. 이상의 결과를 종합하면 그라비올라 잎 추출물은 천연 항산화제를 함유한 식품이나 화장품 성분 개발에 이용가치가 있을 것으로 판단된다.
Cellular replicative senescence is a major contributing factor to aging and to the development and progression of aging-associated diseases. In this study, we sought to determine viral replication efficiency of influenza virus (IFV) and Varicella Zoster Virus (VZV) infection in senescent cells. Primary human bronchial epithelial cells (HBE) or human dermal fibroblasts (HDF) were allowed to undergo numbers of passages to induce replicative senescence. Induction of replicative senescence in cells was validated by positive senescence-associated b-galactosidase staining. Increased susceptibility to both IFV and VZV infection was observed in senescent HBE and HDF cells, respectively, resulting in higher numbers of plaque formation, along with the upregulation of major viral antigen expression than that in the non-senescent cells. Interestingly, mRNA fold induction level of virus-induced type I interferon (IFN) was attenuated by senescence, whereas IFN-mediated antiviral effect remained robust and potent in virus-infected senescent cells. Additionally, we show that a longevity-promoting gene, sirtuin 1 (SIRT1), has antiviral role against influenza virus infection. In conclusion, our data indicate that enhanced viral replication by cellular senescence could be due to senescence-mediated reduction of virus-induced type I IFN expression.
본 연구에서는 Hovenia dulcis Thunberg (헛개나무)의 80% 메탄올 분획물의 항산화 및 세포 노화 억제활성을 규명하고자 하였다. 헛개나무 에틸아세테이트 분획물이 DPPH라이칼 소거능에서 가장 높은 활성 저해를 보였고 (RC50 = 3.6±0.8 ㎍/ml), 총 페놀(417.2±5.3 mg GAE/ml) 및 총플라보노이드(260.6±27.5 mg QE/ml) 측정에서도 가장 높은 활성을 보였다. HDF 세포에서 노화가 진행됨에 따라 sm22의 발현이 증가되었고(p<0.001), β-갈락토시다아제의 염색양이 증가(p<0.001)되는 것을 확인하였다. 반면, sm22의 증가는 세포 노화가 진행된 세포일수록 증가폭이 감소되는 것이 확인되었고, 초기노화에서 발현이 높은 것을 알 수 있었다. 헛개나무 에틸아세테이트 분획물을 처리시 HDF세포의 EGF (p<0.01), PDGF-BB (p<0.01), SHH (p<0.05)의 사이토카인이 유의적으로 증가를 보이며, 노화 시 발생된 sm22의 수치를 감소시키는 것을 보였다. 이러한 결과는 헛개나무 에틸아세테이트 분획물이 초기 세포 노화의 작용을 조절할 수 있음을 보여준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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