NO는 대식세포의 면역조절에서 중요한 역할을 하며 iNOS의 과발현시 NO가 다량으로 발생을 하며 결과적으로 NO의 증가는 다양한 염증성 질환을 유발한다. 이에 본 연구에서는 식용 및 약용버섯인 상황, 차가, 능이, 노루궁뎅이 그리고 청버섯을 이용하여 RAW264.7 세포에 LPS로 유도 된 NO의 생성에 억제 활성을 통한 항염증 효능 및 그 기작을 분석하였다. 5종의 버섯 중 노루궁뎅이버섯 열수 추출물의 NO 저해 활성이 가장 우수함을 확인하였다. 노루궁뎅이버섯 열수 추출물은 또한 LPS로 유도된 iNOS, COX-2 등 염증유발 인자의 발현량을 감소시켰다. 이러한 결과는 버섯류의 생리활성을 구체적으로 제시한 것으로, 버섯류를 이용한 생리 기능성 바이오 소재 개발 및 조리연구를 위한 기초자료로 널리 활용되리라 사료된다.
노루궁뎅이버섯의 재배방법에 따른 수량은 병재배로 재배하였을 때 356 g/850 ml으로, 봉지(pot)재배하였을 때의 810 g/2500 ml보다 더 높았다. 그러나 회수율은 병(850 ml)에 재배하였을 때 147.8%로 봉지(pot)에 재배하였을 때의 114.3% 보다 높았다 발이 유기시 균긁기는 하지 않은 것이 좋았으며 특히 병마개를 막아둔 상태에서 발이시키는 방법이 수량도 가장 많고 생물적 효율도 높았다. 노루궁뎅이버섯의 원목재배 수종은 참나무, 물오리나무, 포플러, 아카시나무 원목 순으로 좋았다. 참나무원목은 수량이 $1195.5\;g/0.1\;m^3$, 생물학적 효율이 17.3%, 초발이 소요일수는 69일, 개체중은 143 g이었다.
Kim, Dong-Myong;Pyun, Chul-Woo;Ko, Han-Gyu;Park, Won-Mok
Mycobiology
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제28권1호
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pp.33-38
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2000
Mycelium of Hericium erinaceum isolate KU-1 was cultured in liquid medium (HL medium) and solid medium (Ko medium) at pH 4.0 in $28^{\circ}C$. 1.0% glucose or fructose was the most favorable carbon source, and 0.2% amonium acetate or $NaNO_3$ was an exellent nitrogen source for mycelial growth as well as production of antimicrobial substances. The mixture of saw dust 70% with rice bran 30% (SR medium) was the substrate for formation of sporophores. The active substrates in extracts from mycelium, culture filtrate and fruiting body were separated by TLC. The solvent for TLC was EtOAc: Chloroform: MeOH (10 : 5 : 10). Phenol-like substances appeared at Rf $0.5{\sim}0.9$, and fatty acid-like substances appeared at Rf $0.1{\sim}0.2$. The purified materials from the extracts showed antimicrobial effects to Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Aspergillus niger, Candida albicans and Microsporum gypseum. The S. aureus was the most inhibited. Minimal inhibitory concentration (MIC) of purified white powder and the Hercenone derivatives against S. aureus were $5.65\;{\mu}g/ml$ and $1.85\;{\mu}g/ml$, respectively.
Hot water soluble extract was prepared from Hericium erinaceus and its neuritogenic activity on PC12h cells was analyzed, which is a clone originating from a rat pheochromocytomon. The moisture content of freeze dried hot water extract was 12.08%. The extract was mainly composed of carbohydrate (51.24%) followed by crude protein (24.04%), crude fat (0.26%), dietary fiber (5.09), and ash (12.18%). Fatty acids, glucan and inorganic constituents were found as minor components. The neuritogenic activity of hot water extract was evaluated under microscopic observation of neurite outgrowth in PC12h cells and by measuring the neurite length of induvidual cell. The extract exhibited strong effect of neurite outgrowth in a dose-dependent manner from 0.01 mg/mL to 1 mg/mL, in which longer neurite outgrowth was observed as the treatment dose increased.
본 실험은 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceus isolate KU-1)의 균사생장에 관한 영양원 실험으로 대량의 균사체 수확을 위한 배양기 조성을 밝히기 위한 기초를 확립하고자 실시하였다. 최적온도는 $25^{\circ}C$이며 pH4에서 160.5 mg으로 가장 건물중이 높았고 탄소원 중 glucose, sucrose, galactose, mannose 순으로 균사생장 및 균사밀도가 우수하였다. 무기태질소원으로는 ammonium acetate 30 mM에서 균사생장이 가장 양호하였다. 아미노산 중 arginine 15 mM에서 우수하였다. C/N율 200에서 35.9 mm로 균사생장의 최대치를 보였다. 상술한 실험의 결과를 토대로 Table 1과 같은 새로운 합성배지를 조제할 수 있었고, 이를 Ko배지라 명명하였다. 이 Ko배지와 기존배지간의 한천배지상에서 균사생장 비교한 결과, Ko배지에 가장 우수한 균사생장과 균사밀도를 나타냈다. Ko배지의 조성은 glucose 18.02g, arginine 3.613g, ammonium acetate 2.313g, $CaCl_2\;0.33g$, $KH_2-PO_4\;8.5g$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;2.0g$, $FeSO_4{\cdot}7H_2O\;0.02g$, $ZnSO_4{cdot}7H_2O\;0.02g$, $MnSO_4{\cdot}7H_2O\;0.02g$, water 1 liter이다.
본 연구는 in vivo에서의 6주령의 BALB/C 생쥐(평균체중 $24.73\pm0.11$ g)에게 1주일 간 노루궁뎅이버섯 균사체(Hericium erinaceus mycelia)를 첨가한 식이를 급여한 후 내독소인 LPS로 인한 산화적 스트레스 및 염증반응에 미치는 영향을 조사하고자 하였다. 실험군은 5군으로 분류하였으며 정상 대조군(NC)과 양성 대조군(LC)은 chow를, HMP 10%군과 HMP 3%군은 chow에 노루궁뎅이버섯 균사체를 각각 3%와 10%를 첨가하였으며 HMP 대조군(HMP-C)은 chow에 노루궁뎅이버섯 균사체를 10% 첨가하여 pellet 형태로 조제하여 1주일 간 각각의 실험 식이를 급여하였다. LC군과 HMP 3% 및 HMP 10%군은 각각 LPS(100 mg/kg BW)를 투여하였으며 NC군과 HMP-C군은 생리식염수를 LPS와 동일한 농도로 투여하였다. 실험동물의 식이효율은 노루궁뎅이버섯 균사체를 보충한 군에서 저하되었으며 노루궁뎅이버섯 균사체의 보충군에서 체중감소 효과를 보였다. 노루궁뎅이버섯 균사체 10%를 보충한 HMP-C군과 HMP 10%군은 분변의 배설량이 가장 많았고 분변 중 총지방 양은 노루궁뎅이버섯 균사체를 섭취한 군에서 높은 수준을 보였으나 섭취량에 따른 현저한 차이는 보이지 않았고, 혈장 TG 함량은 군 간에 유의적인 차이는 보이지 않았으나 노루궁뎅이버섯 균사체 10%를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 다소 높은 경향을 보였다. 분변 100 g 당 $\beta$-glucan의 함량은 노루궁뎅이버섯 균사체 3%를 보충한 군에서 가장 높았다. 혈장의 ALT 수준은 LPS를 투여한 후 8시간 경과 후에는 LC군에서 현저하게 증가한 반면 노루궁뎅이버섯 균사체를 첨가한 식이를 급여한 HMP 3%와 HMP 10%군에서는 유의적으로(p<0.05) 저하되어 NC군과 비슷한 수준을 보였다. 간에서의 SOD, GSH-red, GSH-px 활성은 LPS 투여 후 LC군에 비해 노루궁뎅이버섯 균사체를 섭취한 군에서 증가하였으며 GSH-red의 단백질 발현과 GSH 함량 또한 높아지는 것으로 나타났다. 이상의 결과로 미루어 볼 때 노루궁뎅이버섯 균사체의 보충은 내독소인 LPS로 유도된 산화적 스트레스에 저항하여 간 기능을 보호하는 효과가 있는 것으로 보이며 그 기전으로는 항산화 효소계 활성과 GSH-red 단백질 발현 증가, 그리고 GSH 수준 향상 등을 열거할 수 있다.
본 연구는 mushroom complete medium(MCM) 액체배지에 수삼 추출물(GE, $65^{\circ}Bx$)을 첨가하여 면역활성이 증진된 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceum) 균사체를 배양하고, 균사체로부터 활성다당성분을 분획하고자 하였다. MCM에 대하여 GE를 5, 10과 15%(v/v) 첨가한 액체배지에서 균사체를 배양하고, 각각의 조다당획분(HE-GE-5-CP, HE-GE-10-CP와 HE-GE-15-CP)으로 분획하여 면역활성을 측정한 결과, HE-GE-10-CP는 HE-GE-5-CP와 HE-GE-15-CP보다 높은 활성을 나타내었으며, GE를 첨가하지 않은 MCM에서 배양된 균사체 조다당획분(HE-CP)보다 유의적으로 증진된 면역활성을 나타내었다. 또한, HE-GE-10-CP의 DEAE-Sepharose CL-6B 분획물 중 가장 높은 활성을 나타낸 HE-GE-10-CP-II획분은 대조군인 HE-CP의 어떠한 획분보다도 유의적으로 높은 면역활성과 암 전이 억제활성을 나타내었다. 한편, 활성획분인 HE-GE-10-CP-II는 arabinose, rhamnose, galactose, glucose와 uronic acid(molar ratio; 0.34:0.26:0.99:1.00:0.39)로 구성되어 있으나, 대조군인 HE-CP의 동일용매 용출획분으로서 HE-GE-10-CP-II보다는 활성이 낮은 HE-CP-II는 fucose, mannose, galactose와 glucose(molar ratio; 0.32:0.55:1.00:0.96)를 함유하여 다른 구성당 분포를 나타내었다. 따라서 노루궁뎅이버섯 균사체 액체배양에서 수삼 추출물 첨가는 균사체의 구성당 변화를 통한 면역활성 증진에 관여하는 것으로 사료되어 기능성 소재 개발에 유용할 것으로 사료된다.
Most, if not all, Basidiomycetes mushrooms have biologically active polysaccharides showing potent antitumor activity with immunomodulating properties. These polysaccharides have various chemical compositions and belong primarily to the $\beta$-glucan group. In this study, the crude water-soluble polysaccharide HEF-P, which was obtained from the fruiting body of Hericium erinaceus by hot water extraction and ethanol precipitation, was fractionated by DEAE-cellulose and Sepharose CL-6B column chromatographies. This process resulted in four polysaccharide fractions, named HEF-NP Fr I, HEF-NP Fr II, HEF-AP Fr I, and HEF-AP Fr II. Of these fractions, HEF-AP Fr II was able to upregulate the functional events mediated by activated macrophages, such as production of nitric oxide and expression ofcytokines (IL-1${\beta}$ and TNF-${\alpha}$). The molecular mass of HEF-AP Fr II was estimated by gel filtration to be 13 kDa. Its structural characteristics were investigated by a combination of chemical and instrumental analyses, including methylation, reductive cleavage, acetylation, Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Results indicate that HEF-AP Fr II is a low-molecular-mass polysaccharide with a laminarin-like triple helix conformation of a ${\beta}$-1,3-branched-${\beta}$-1,6-glucan.
This study was conducted to determine the antioxidative activity of Hericium erinaceus (HE) and we investigated that HE extract contributes to cell proliferation and to anti-LPS-induced inflammation. HE extract showed high DPPH free radical scavenging activity. However, the reducing power activity slightly increased in compare with control. Nitrite scavenging activity, ABTS radical scavenging activity, SOD-like activity of HE were elevated in dose-dependent. The level of total phenolic and flavonoid showed 30.06 mg/100 g and 33.86 mg/100 g, respectively. Linoleic acid oxidation inhibition had reached a maximum level on the fourth day and started to drop from the fifth day. HE extract contributes to cell proliferation on the RAW 264.7 cell. Our finding demonstrated that water extracts of HE possess significant antioxidant activities and may be suggested a new potential source of anti-inflammatory medicines.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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