hnRNP L은 pre-mRNA에 결합하는 단백질들 중에서 핵심이 되는 단백질이다. hnRNP L은 양이 아주 많은 핵 단백질로서 핵과 세포질을 왕복하는 특성을 지니고 있다. 이 단백질은 염색질 변형(chromatin modification), pre-mRNA 스플라이싱, 인트론이 없는 유전자들에서 유래한 mRNA들의 세포질로의 반출(export), IRES-매개성 번역, mRNA의 안정성 조절, 정자형성과정 등, 세포 내의 여러 가지 과정에 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. 이 논문에서는 hnRNP L과 결합하는 세포 내 단백질을 찾아내기 위하여 사람의 간세포 cDNA library를 사용하여 이스트 two-hybrid 탐색 실험을 수행하였다. 그 결과 사람의 간세포에서 IGFBP-4가 hnRNP L과 상호결합하는 새로운 파트너라는 것을 발견하였다. 본 연구를 통하여 hnRNP L이 이스트 two-hybrid 시스템에서 IGFBP-4와 특이적으로 상호 결합한다는 것을 처음으로 발견하였다. 본 연구에서는 또한 이스트 two-hybrid 시스템에서 hnRNP L이 IGFBP-4와 상호결합한다는 점을 in vitro pull-down 실험을 통하여 재확인하였다.
Agrobacterium tumefaciens $A_4$T에 의해 형질전환된 사리풀 (Hyoscyamus niger L.)의 모상근으로부터 tropane alkaloids (scopolamine, hyoscyamine)의 생산성 향상을 위한 최적배지, 배양기간 및 탄수화물의 영향을 조사하였다. Tropane alkaloids의 생산성이 우수한 모상근 (HNl8, HN57)의 최적 배지는 SH배지이며, 모상근의 생장, tropane alkaloids 함량 및 생산성에서 조사한 6가지 배지보다 높게 나타났다. Tropane alkaloids생산을 위한 최적 배양기간은 HNl8 clone이 6주, HN57 clone은 5주로 나타났으며, 배양기간에 따라 scopolamine의 함량은 계속적으로 증가하는데 반하여 hyoscyamine의 함량은 일정 수준을 유지하는 것으로 나타났다. 두 세포주는 sucrose농도가 7%까지 증가할수록 생장률이 증가하는 반면, tropane alkaloids 함량은 감소하였으며, tropane alkaloids생산성은 3% sucrose처리구에서 가장 높게 나타났다. HN18 clone의 경우 최적 sucrose(3%)및 dextrose (2%)에서 유사한 tropane alkaloids 생산성을 나타내었다. 하지만 HN57 clone은 sucrose 처리구에 비하여 dextrose 처리구에서 매우 낮은 tropane alkaloids생산성을 나타내었다.
세계적으로 구리약제에 대해서 저항성을 나타내는 균주들이 발견되있으며, 이들은 구리약제의 방제효과를 감소시켰다. 국내에서도, 구리 저항성 균주 Xanthomonas campestris. pv. vesicatoria HN94-2, -3, -4, -5, -6 들이 천안지역의 고추재배지에서 처음으로 분리되었으며, 이들 균주들의 nutrient agar에서 황산구리(CuSo\ulcorner)에 대한 최소억제농도(minimum inhibitory concentration, MIC)는 1.4~1.6 mM이었다. 이들은 모두 황산아연(ZnSO\ulcorner)에 대해서는 감수성을 보여, 구리저항성 균주에 대한 방제약제로서 아연 함유 약제를 사용할 수 있을 것이다. 분리된 균주중 HN94-2와 HN94-6을 이용하여 접합(conjugation)을 통해 구리저항성의 전파를 실험한 결과, 이들 두 균주 모두 구리감수성 균주에게 4.3$\times$10\ulcorner에서 1.0$\times$10\ulcorner(transconjugant/donor)의 정도로 구리 저항성이 전이되었다. 이들 HN94-2와 HN94-6 균주의 구리정항성 유전자들은 약 200 kb 정도의 커다란 플라스미드(plasmid)에 존재하며, 이들은 각각 pXVK9402와 pXVK9406이라 명명되었다.
활성탄(activated carbon, A.C)은 휘발성 유기화합물(volatile organic compounds, VOCs) 제거를 위해 가장 많이 사용되고 있지만 흡/탈착 시 열화현상으로 인한 화재위험성, 잦은 교체 주기로 인한 비용 부담, 수분에 의한 성능 저하 등의 문제점을 가지고 있다. 이러한 문제들을 해결하기 위하여 소수성 제올라이트 흡착제가 연구되고 있다. 본 연구에서는 소수성 개질법 중 하나인 수증기처리 및 산 처리를 통해 $NH_4{^+}Y$-zeolite를 소수성 Y-zeolite로 합성하여 높은 표면적, 열적 안정성과 습도저항성을 확보하고자 하였다. Y-zeolite와 개질된 Y-550-HN, Y-600-HN, Y-650-HN의 흡착성능은 23, 38, 77, $61mg\;g^{-1}$으로 나타났으며, 소수성 개질 정도를 확인할 수 있는 지표인 Si/Al ratio 변화를 XRF 분석으로 확인하였다. 그 결과, Y-zeolite를 개질하였을 때 흡착성능이 증진되었고, Si/Al 비는 Y, Y-550-HN, Y-600-HN, Y-650-HN 순으로 각각 3.1765, 6.6706, 7.3079, 7.4635 임을 확인하였다. 반면에 높은 열처리 온도에 의한 구조적 결정화가 성능 저하에 영향을 미칠 수 있음을 확인하였다. 반면에 Y-zeolite의 최적 열처리 온도가 존재하며, 이와 같은 최적 개질 조건 연구는 높은 내구성과 안정성을 갖는 흡착제를 제조할 수 있는 조건으로써 향후 활성탄을 대체할 수 있을 것으로 판단하였다.
본 논문에서는 이동성이 좋고 경제적이며, 간편하게 일회용 진단칩으로 제작 가능한 스크린 프린팅 한 탄소칩 전극[screen printed carbon electrode (SPCE)] 기반의 전압전류법 나노물질 융합형 바이오센서를 제작하여 폐암 조기진단에 활용 가능한 단백질 표지 인자 중에 하나인 heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 (hnRNP A1) 단백질의 농도를 정량 분석하고자 하였다. 먼저 SPCE 표면에 금 나노입자를 전기적으로 증착한 후 크로스링커를 이용하여 hnRNP A1에 특이적으로 결합할 수 있는 바이오리셉터인 DNA 압타머를 고정하였다. Ethanolamine을 블로킹 시약으로 사용하여 압타머와 함께 센서 표면에 고정하여 그 표면을 처리함으로써 비특이적인 생물질의 흡착에 의한 방해 신호를 최소화하고자 하였다. DNA칩과 hnRNP A1 용액을 접촉하여 DNA와 hnRNP A1을 결합시킨 후 alkaline phosphatase (ALP) 효소로 접합한 hnRNP A1 항체(anti-hnRNP A1)을 센서칩 표면으로 주입하여 샌드위치 복합체를 형성하고, 이를 기질인 4-aminophenyl phosphate (APP)와 효소-기질 특이적 산화 반응에 의한 전류 변화를 순환 전압전류법과 시차 펄스전압전류법으로 측정하여 단백질의 농도를 정량적으로 분석하였다. 상기 산화 반응에 의한 피크 전류 변화는 순환전압전류법과 시차 펄스 전압전류법을 사용할 때 -0.05와 -0.17 V (vs. Ag/AgCl) 전위 값에서 각각 일어났다. 개발한 나노바이오센서를 실제 정상인 혈청 시료 분석에 적용 가능함을 보여줌으로써 혈청 한 방울로 폐암의 조기진단 가능성을 제시하고자 하였다.
Antisense transcripts were initially identified as transcriptional noise, but have since been reported to play an important role in the quality control of miRNA functions. In this report, we tested the hypothesis that heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K (hnRNPK) regulates miRNA function via competitive endogenous RNAs, such as pseudogenes, long non-coding RNAs, and antisense transcripts. Based on analyses of RNA sequencing data, the knockdown of hnRNPK decreased the antisense PTOV1-AS1 transcript which harbors five binding sites for miR-1207-5p. We identified heme oxygenase-1 (HO-1) mRNA as a novel target of miR-1207-5p by western blotting and Ago2 immunoprecipitation. The knockdown of hnRNPK or PTOV1-AS1 suppressed HO-1 expression by increasing the enrichment of HO-1 mRNA in miR-1207-5p-mediated miRISC. Downregulation of HO-1 by a miR-1207-5p mimic or knockdown of hnRNPK and PTOV1-AS1 inhibited the proliferation and clonogenic ability of HeLa cells. Taken together, our results demonstrate that hnRNPK-regulated PTOV1-AS1 modulates HO-1 expression via miR-1207-5p.
The gene encoding the HN protein from the CBP-1 strain, a heat stable Newcastle disease virus (NDV) isolated from diseased pheasants in Korea, was characterized by reverse transcriptase- polymerase chain reaction(RT-PCR) and the nucleotide and amino acid sequences were analyzed following cloning of the HN gene. In all of the NDV strains studied, a 1.75 kb size cDNA fragment for the HN gene was generated by RT-PCR and smaller specific band sizes harboring the internal portions of the HN gene were also detected by using four pairs of primers. The RT-PCR was sensitive enough to detect viral transcripts when the virus titer was above 25 hemagglutination units. The amplified 1.75 kb cDNA was cloned into a BamHI site of the pVL1393 Baculo transfer vector. The nucleotide sequences of the 1,758 bp HN gene from the CBP-1 strain were determined by the dye terminator cyclic sequencing method. The gene sequences were compared among the strains of CBP-1, Texas GB, Beaudette C, LaSota, B1 and Ulster. The homology of the CBP-1 HN gene to other HN variants was 97.8% to Texas GB, 98.4% to Beaudette C, 95.4% to LaSota, 95.6% to B1 and 90.2% to Ulster. As the deduced 577 amino acid sequences were compared among the strains, the homology for CBP-1 HN appeared to be 96.7% to Texas GB, 97.9% to Beaudette C, 95.5% to LaSota, 95.5% to B1 and 92.7% to Ulster. It was evident that the amino acid sequences included 5 sites for N-asparagine linked glycosylation and 12 cysteine residues. The three conserved leucine residues within the predicted transmembrane domain of the HN protein are amino acid 30, 37 and 44. The three antigenic sites on the HN protein of NDV are amino acids 347(Glu), 481(Asn) and 495(Glu). These data indicate that the genotype of the CBP-1 strain is more closely associated with the strains of Texas GB and Beaudette C than it is for the LaSota, B1 and Ulster strains.
An annular denuder filter pack sampling system (ADS) was used to collect acidic air pollutants in Pusan. During the study period (from June 1995 to November 1995), forty eight samples were collected every 12 hours starting from 6:00 in the morning. These samples were devided into two sets of data for day (6:00 a.m.-6:00 p.m.) and night (6:00 p.m.-6:00 a.m.). The chemical species were analyzed for HN $O_3$, HN $O_2$, S $O_2$ and N $H_3$ in the gas Phase, and N $O_3$$^{[-10]}$ , S $O_4$$^{2-}$ and N $H_4$$^{+}$ in the particulate phase. The mean concentrations measured from this study were 0.24, 1.91, 30.07 and 4.24 $\mu\textrm{g}$/㎥ for HN $O_3$, HN $O_2$, S $O_2$ and N $H_3$, respectively. The mean concentrations of N $O_3$$^{[-10]}$ , S $O_4$$^{2-}$ and N $H_4$$^+{\ulcorner}$ were 1.95, 7.36 and 3.48 $\mu\textrm{g}$/㎥, respectively. The mean concentrations of gaseous species except for HN $O_2$ were higher in daytime than in nighttime, but the reverse was true in the particulates except for N $H_4$$^{+}$. +/..
The cyclone/annular denuder system/filter pack sampling system (ADS) was used to collect the acidic air pollutants in Chongju city. The data set was collected on fifty -eight different days with 24 hour sampling period from October 27, 1995 through August 25, 1996. The chemical species measured were HN $O_3$, HN $O_2$, S $O_2$ and N $H_3$ in the gas phase, and PM2.5( $d_{p}$ <2.5 ${\mu}{\textrm}{m}$), S $O_4$$^{2-}$, N $O_3$$^{[-10]}$ and N $H_4$$^{+}$ in the Particulate Phase. Mean concentrations measured for this study were: 0.45 $\mu\textrm{g}$/㎥ for HN $O_3$, 3.39 $\mu\textrm{g}$/㎥ for HN $O_2$, 26.4 $\mu\textrm{g}$/㎥ for S $O_2$, 3.83$\mu\textrm{g}$/㎥ for N $H_3$, 44.2 $\mu\textrm{g}$/㎥ for P $M_{2.5}$, 8.22 $\mu\textrm{g}$/㎥ for S $O_4$$^{2-}$, 3.63 $\mu\textrm{g}$/㎥ for N $O_3$$^{[-10]}$ , and 2.84 $\mu\textrm{g}$/㎥ for N $H_4$$^{- }$. HN $O_3$ and N $H_3$ were higher during the summer. However, HN $O_2$ and S $O_2$ were higher during the fall and winter. P $M_{2.5}$ , S $O_4$/ sup 2-/ and N $H_4$$^{+}$ were not showed seasonal variations, but N $O_3$$^{[-10]}$ was higher in the winter.ter.r.
Although extensively characterized in human cells, no heterogeneous nuclear ribonucleoprotein(hnRNP) has been found in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe which is amenable to genetic studies and more similar to mammals than Saccharomyces cerevisiae is in terms of RNA processing. As a first step to characterize hnRNPs from S. pombe, attempt was made to find human hnRNP A1 homologs from S. pombe. The RNA molecule (A1 winner) containing the consensus high-affinity hnRNP A1 binding site (UAGGGA/U) was synthesized in vitro and used in an ultraviolet(UV) light-induced protein-RNA cross-linking assay. A number of S, pombe proteins bound to the A1 winner RNA. An approximately 50-kDa protein(p50) cross-linked more efficiently to the A1 winner RNA than other proteins. The p50 protein did not cross-link to a nonspecific RNA, but rather to the A1-5’ SS RNA in which the consensus 5’ splice junction sites of S. pombe introns were abolished. This suggests that the p50 protein, however, did not bind to the single-stranded DNA to shich the human hnRNP A1 could bind and be eluted with 0.5M NaCl. Further analysis should reveal more features of this RNA-binding protein.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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