H. pylori 유래의 위장 질환에 대한 예방 및 치료에 대체할 수 있는 방법으로 감염 원인균의 부착 억제와 탈착이 가능한 물질의 사용이 타당성 조사 및 그 기초연구를 목적으로 조사하였다. 우선, 닭에 면역접종을 하여 면역접종 횟수에 따른 IgG 항체의 증가를 확인하여 면역접종을 하지 않은 군에 비해 10배 이상 H. pylori에 대한 항체가 생산되는 것을 확인하였다. H. pylori가 위 상피세포에 결합하는 현상이 H. pylori의 감염에 중요한 첫 단계라는 점에 착안하여 H. pylori의 위벽세포에 대한 결합의 특성을 조사하는 한편, 여러가지 부착 억제 후보물질을 이용하여 단독 또는 H. pylori에 대한 난황 항체와 함께 H. pylori의 부착 억제 정도를 실험하였다. 부착 억제 실험의 결과, 난황 항체를 이용하여 H. pylori(NCTC11637, ATCC43526)가 AGS에 부착하는 것을 저해가 가능하였으며 NCTC11637와 ATCC43526 모두 균체 및 외막단백으로 면역접종하여 생산된 항체의 경우 0.5 mg/mL의 농도로 NCTC11637은 80%, ATCC43526은 60% 정도의 부착 억제를 하는 것으로 나타났다. 탈착 실험의 결과도 면역접종을 실시한 난황 항체가 40-60% 정도의 탈착 효과를 보였으며 균체 자체와 외막 단백을 항원으로 사용한 군 사이의 탈착력 차이는 크지 않았다. 그러나 이러한 결과들이 사용 균주에 따라, 특히 분리 균주를 이용한 경우에는 상이한 결과들이 나타나므로 항체를 이용한 경우에는 더 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다. 그러나 난황 항체는 식품성분의 하나로서 안정성의 면에서 매우 유리하고 대량 생산이 가능하므로 특이적 항체를 많이 생산할 수 있는 항원의 개발과 함께 정제도를 높인다면 더욱 좋은 효과를 기대할 수 있을 것이다. 그러나 외국의 다른 연구에서 보고된 경우와 같이 in vitro에서 유효한 물질이 in vivo에서 효과가 없는 경우도 종종 보고되고 있어 지금까지 탐색한 물질의 in vivo에서의 부착 억제 효과에 대한 진단도 함께 이루어져야 할 것으로 사료되며 또한 앞서 기술한 바와 같이 H. pylori의 결합에 관계하는 receptors 및 ligands가 어떤 특정한 한가지가 아니라 여러 가지의 복합적인 물질이 관여하는 것이기 때문에 여기에 대해서는 더 많은 연구가 뒷받침되어야 할 것이다.
Helicobacter pylori (H. pylorl) infection is now established as the major pathogenic factor in chronic gastritis and peptic ulcer disease. in addition, there is accumulating evidence that H. pylori plays an important role in the process of gastric carcinogenesis. On the other hand, oriental traditional medicines have been used for stomach disease for thousands of years. In the present study, methanol extract from the stem bark of Magnolia sieboldii (M. sieboldii) and its components were investigated on their inhibitory effects against urease activity and growth of H. pylori in vitro. The methanol extract of M. sieboldii significantly inhibited the growth of H. pylori ATCC 43504 at 5 mg/ml. From the further fractionation, the chloroform fraction inhibited the bacterial growth dose-dependently. Among four fractions separated from the chloroform fraction by silica gel column chromatography, MS-C-2 was the most potent. Costunolide was isolated from the MS-C-2 subtraction by preparative TLC and recrystallization using n-hexane. Anti-H. pylori effect of costunolide was investigated using one commercial strain (H. pylori ATCC 43504) and three clinical strains (H. pylon 4, 43, 82548). Costunolide exhibited potent anti-H. pylori activity, and the MIC was around $100-200{\mu}g/ml$. However, costunolide had no inhibitory effect of H. pylori urease activity at the concentration used for the growth inhibition assay. From these results, we conclude that costunolide inhibits the, growth of H. pylori by the independent manner of H. pylori urease inhibition.
소화성 질환의 중요 인자인 Helicobacter pylori를 저해하는 IgY, 목이버섯, 김치와 타락 유산균을 이용하여 생육 저해 상승 효과를 분석하고자 하였다. 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 다양한 효소 처리 결과, 지질 분해 효소를 제외하고는 활성을 나타냈다. GC 분석을 통해 유산균 동결건조액의 지방산 조성은 undecanoic acid($C_{11:0}$), palmitic acid($C_{16:0}$), steraic acid($C_{18:0}$), oleic acid($C_{18:1}$)가 L. mensenteroides LABKW5와 S. thermophilus LAB KW15에서 모두 확인되었으며, eicosadienoic acid($C_{20:2}$)는 LAB KW5에서만 나타났다. 또한 유산균 동결건조액은 다른 식중독균에서도 spot assay의 결과, 그람 음성균 중에서 특히 E. coli O157:H7, E. coli, C. sakazakii 등에서 생육 저해능이 확인되었다. 목이버섯 추출물은 열수 추출과 ethanol를 이용해 분리하였으며, HPLC를 이용하여 목이버섯 추출 다당체를 분석한 결과, glucurono-xylomannan 혹은 glucomannan이 ${\beta}$-glucan과 함께 존재하는 혼합물일 것으로 되었다. 또한, 면역란은 1차 접종 후 11일째부터 주마다 2회씩 회수하여 IgY를 분리, 정제하였다. 실험을 통해 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액을 혼합 배양하여 배양시간에 따른 생육 저해력의 변화를 확인한 결과, 유산균에 의해 H. pylori의 저해 효과가 있었으며, IgY와 목이버섯의 혼합 시 추가 억제 효과가 있는 것으로 나타났다. 그러므로 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액의 복합처리는 H. pylori를 제어하는데 효과적인 것으로 보인다.
The aim of this study was to evaluate the anti-helicobacter activity and anti-inflammatory activity of Angelica dahurica (AD). The minimum inhibitory concentration(MIC) of AD against Helicobacter pylori(H. pylori), expression of the H. pylori cagA gene in the presence of AD was determined. Inhibition of H. pylori urease by AD, inhibition of nitric oxide (NO) production in AGS cells was measured. IL-8 mRNA expression in AGS cells which were infected with H. pylori and IL-8 level was measured. The MIC of MeOH Ex. of AD was $250{\mu}g/mL$ and the expression of cagA gene was decreased about 88% in the presence of AD. The activity of H. pylori urease was inhibited 70% by AD. mRNA expression of IL-8 and the production of NO and IL-8 were significantly decreased in the presence of AD. In conclusion, AD showed anti-Helicobacter activity and has potent anti-inflammatory effect on H. pylori-induced inflammation in human gastric epithelial AGS cells.
위염 및 위궤양, 심이지장궤양, 위암의 주요한 발병 원인균으로 알려져 있는 Helicobacter pylori의 생육을 특이적으로 억제하는 유산균을 선발하기 위해서, 45종의 유산균에 대하여 paper disk법을 이용한 항균 효과, Caco-2세포에 대한 정착능, urease activity법을 이용한 H. pylori 억제능 등을 파악하고, 유산균 배양액과 H. pylori의 동시배양에 따른 요소 분해효소의 활성 변화와 우유 발효능 등을 실험하였다. H. pylori의 생육을 억제하는 물질의 생성 유무를 확인하기 위하여 paper disk법으로 유산균 배양액에 의한 H. pylori의 생육 억제환을 측정한 결과, 28종의 유산균에서 생육 억제환이 형성되었다. 대부분이 유산 생성에 의한 낮은 pH 때문인 것으로 판단되지만, 일부 균종에서는 항균성 물질에 의한 억제환이 형성되었다. 다른 유산균에 비해서 생육 억제환이 가장 큰 Lactobacillus gasseri MK-03 균주가 H. pylori에 대한 항균 활성이 가장 우수한 것으로 나타났다. 항균 활성을 나타낸 28종의 유산균을 대항으로 Caco-2 세포에 대한 정착능을 실험한 결과, 18종의 유산균에서 정착능이 확인되었으며, Bifidobacterium longum MK-26 균주가 가장 우수한 것으로 나타났다. 특히 반응 2시간 전에 미리 Caco-2 세포에 정착시켰을 때, H. pylori의 정착율은 0.105%에서 0.004%로 감소되었다. 한편 요소 분해효소 활성을 저해하여 H. pylori를 억제하는 유산균을 선발하기 위해서 항균활성이 인정되는 28종의 유산균을 대상으로 실험한 결과, 21종의 유산균에서 요소 분해효소 활성의 저해 효과가 나타났으며, 이중에서 Lb. acidophilus MK-07 균주가 가장 우수한 것으로 판명되었다. 따라서 Lb. gasseri MK-03 균주는 항균 활성에서, Lb. acidophilus MK-07 균주는 요소 분해효소의 활성 억제에 의해서, Bif. longum MK-26 균주는 정착능 저해에 있어서 각각 우수한 H. pylori 생육 억제능을 나타냈다. 한편 최종적으로 선발된 3종의 유산균과 대조균주로서 13종의 유산균에 대해서는 우유 배양실험을 실시한 결과, 3종의 선발균주 모두가 발효유 제품에의 응용 적합성을 나타냈다.
Helicobacter pylori specifically adhere to host cells through a number of putative receptors and ligands, mainly based on carbohydrate-protein interactions. Polysaccharide fractions isolated from the leaves of Artemisia capillaris showed different inhibitory activities against H. pylori adhesion by using hemagglutination assay. Among these fractions, an acidic polysaccharide fraction FlA showed highly effective inhibitory activity, and its minimum inhibition concentration was 0.63 mg/ml. The inhibition results by the hemagglutination assay were consistent with those obtained by the enzymelinked glycosorbent assay, which was developed by the conjugation of horseradish peroxidase with fetuin, a sialic acid-containing glycoprotein which was specific to H. pylori adhesion. FlA contained the highest carbohydrate content among polysaccharide fractions, and no protein was detectable when further purified by gel filtration FPLC. Sugar composition analysis using GC revealed the highest amount of galacturonic acid among sugars, which suggests that FlA contains essentially acidic polysaccharides. Our data suggest that acidic polysaccharides may play an important role in the inhibition of H. pylori adhesion to host cells.
Effects of kimchi and its ingredients, vitamin C and $\beta$-sitosterol on the growth of Helicobacter pylori were investigated. Three kimchi variations were studied: a standard recipe (kimchi I) and two functional variations for cancer prevention and treatment made with organically grown ingredients (kimch II and III). Methanol extracts and juices from kimchi I and III did not inhibit the growth of H. pylori. However, 10 mm and 12 mm inhibition zones were formed by methanol extract and juice from kimchi II, which had higher concentrations of red pepper powder (RPP) than those of kimchi I and III. Among the major kimchi ingredients, methanol extracts of RPP, garlic and ginger substantially inhibited the growth of H. pylori. The maximal inhibition zone (30 mm) was attained with garlic treatment. Inhibitory effects of the RPP, garlic and the sub-ingredient mixture (prepared with radish, garlic, RPP, ginger, green onion, sugar and fermented anchovy juice) on H. pylori were decreased by lactic acid bacteria fermentation. Neither the fermented garlic nor the fermented sub-ingredient mixture inhibited the growth of H. pylori. But, the inhibition Bone of fermented RPP was 12 mm, which was less than the 16 mm inhibition zone formed by the non-fermented RPP. Vitamin C and $\beta$-sitosterol which are known to be functional active compounds of kimchi also showed no inhibitory effect on the growth of H. pylori after 3 days of incubation. Further study is needed to determine why the inhibitory effect is removed or decreased by lactic acid fermentation, and to determine if fresh kimchi and lactic acid bacteria of kimchi can inhibit the growth of H. pylori.
Helicobacter pylori에 대한 항균효과는 열수추출물에서는 Fomitopsis pinicola가 15 mm의 생육저해환으로 가장 높았으며 그 다음으로는 Codyceps militaris, Coriolus versicolor, Phellinus linteus, Fomitella traxinea가 비교적 높은 항균력을 나타내었다. 열수 추출물들의 pH가 낮았으나 항균력이 없는 것으로 보아서 버섯추출물의 수소이온 농도는 항균력에 영향을 미치지 않는 것으로 여겨졌다. Methanol 추출물에서도 Fomitopsis pinicola가 Helicobacter pylori에 대한 생육저해환의 크기가 44 mm로 가장 높은 항균력을 보였다. 이미 알려진 바와 같이 버섯의 주성분은 당과 단백질이며 주로 단백다당체를 이루고 있다. 이를 구성하는 성분 및 함량에 따라 다른 기작을 보이는 갓으로 추정되며 결합하고 있는 형태도 기작에 영향을 끼치는 것으로 사료된다. 본 실험을 통해 Fomitopsis pinicola methanol 추출물이 DEAE-Sepadex의 초기 분획에서 Helicobacter pylori에 대한 항균효과를 나타냈다. 이 분획은 당과 단백질의 함량이 높게 나타났다. Fomitopsis pinicola, Codyceps militaris는 Helicobacter pylori에 대한 항균력이 뛰어나 기능성식품에 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
This study evaluated the anti-Helicobacter and anti-inflammatory effects of Sohamhyungtang (SHHT). The minimum inhibitory concentration (MIC) of SHHT against Helicobacter pylori (H. pylori) was determined by the agar dilution method. Expression of the H. pylori cagA gene in the presence of SHHT was determined by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Inhibition of H. pylori urease by SHHT was determined by the phenol-hypochlorite assay. Antiadhesion activity of SHHT was measured by urea-phenol red reagent. Inhibition of nitric oxide (NO) production in AGS cells was measured with Griess reagent. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) and IL-8 mRNA expression in AGS cells which were infected with H. pylori was determined by qRT-PCR. IL-8 level was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The MIC of SHHT was $100{\mu}g/mL$ and the expression of cagA gene was decreased about 25 folds in the presence of SHHT. H. pylori urease was inhibited 90% by SHHT. SHHT inhibited H. pylori adhesion on AGS cell in a concentration dependent manner. mRNA expression of iNOS and IL-8 and the production of NO and IL-8 were significantly decreased in the presence of SHHT. In conclusion, SHHT showed anti-Helicobacter activity and has potent anti-inflammatory effect on H. pylori-induced inflammation in human gastric epithelial AGS cells.
본 연구의 목표는 발효식품인 된장의 섭취가 Helicobacter pylori에 의한 감염의 억제에 효과가 있음을 확인하는데 있다. 된장 추출물과 된장으로부터 분리된 균이 H. pylori의 생장을 억제시키는지 여부를 표준균주인 H. pylori ATCC 26695와 위궤양 환자의 조직으로부터 분리한 H. pylori 균주를 대상으로 실시하였다. 된장 추출물과 된장으로부터 분리된 대부분의 세균은 H. pyloir의 생장을 억제하였다. 된장의 섭취효과를 측정하기 위해 무자각 증상의 H. pylori 보균자를 대상으로 $^{13}C$-요소호기검사법을 실시하였으며, H. pylori 감염 농도는 ${\Delta}^{13}C(T_1-T_0)$ 값(P)으로 판정하였다. 1일 30 g ($10g{\times}3$회)씩 6주간 섭취한 지원자들의 섭취 전 후의 P값은 58에서 28로 감소하여 H. pylori의 밀도가 낮아졌음을 입증하였다. 즉, 된장이 위 점막에서 H. pylori의 생장을 억제하는 것을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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