This study was carried out to investigate the histomorphological changes and the electrophoretic patterns of egg components, obtained from 100 of 1-year-old female catfish(Silurus asotus). Especially, the light microscopic and ultrastructural changes of ooplasm and follicular membranes of oocytes, were observed by light and transmission electron microscope. All data were collected from October in 1992 to May in 1993. The size of the nucleoli and number of the yolk granules increased as the oocyte grew. Yolk granules were deposited in the oocyte as fluid. Due to the presence of large early and late maturing oocytes, their ovaries were large, transparent, granular, and greenish in color. As the percentages of fish in LMO and RO stage increased from March to April, mean of GSI values(19.95%) increased. Follicle cells such as granulosa cell and thecal cell change a squamous into cuboid shape in LPO and EMO stage. Processes, microvilli, from the granulosa cells and from the oocyte grow and make contact with each other in the pore canals of the zona radiata during vitellogenesis, but are withdrawn as the zona radiate becomes more compact and devoid of pore canals during oocyte maturation. The electrophoretic pattern of major band in mature stage was much thicker(21k, 24k, 32k, 45k, 67∼110k, 170k dalton) than that in previtellogenic phase.
Effect of somatic cell coculture on hatching of mouse blastocyst was examined. Mid-blastocysts were cocultured with granulosa cell primary culture or Sertoli cell line ($TM_{4}$) derived from mouse testis for 48 hr. Blastocysts cultured in medium (10% FBS) started to hatch more faster than cocultured embryos during 12 hr of coculture. After then blastocysts cocultured with somatic cell hatched faster than control. Degeneration of embryos was also greately reduced by coculture. This result suggested the potentiation of hatching as well as embryonic viability by coculture with somatic cell and Sertoli cell line can be used for embryo coculture.
본 연구는 6 MeV LINAC에서 발생한 X-선을 생쥐 생체에 조사한 후 난소에서 난포의 형태적 변화 양상과 난포의 세포자연사가 일어나는 과정을 TUNEL 염색방법을 이용하여 광학현미경으로 관찰하였다. 정상난포와 퇴화난포 및 방사선이 조사된 난포에서 세포예정사가 발생하는 것을 확인하기 위해서 TUNEL 염색을 실시한 결과, 정상난소의 퇴화난포에서 양성반응을 보이는 과립층세포들은 갈색을 띠고 있었고, 핵은 응축되어 나타났다. 그러나, 정상난포에서는 양성반응이 나타나지 않았다. X-선을 조사한 난소의 난포는 TUNEL 염색에 강한 양성반응이 나타났고, 600 cGy의 X-선 조사에서 난모세포는 이미 세포예정사가 진행되어 파괴되었음을 확인할 수 있었다. 그리고 난포막을 형성하고 있는 난막세포의 핵들도 양성반응으로 나타나, 갈색으로 염색이 되었으며, 수질의 결합조직세포들의 핵도 갈색으로 염색되어 관찰되었다. 또한, 대부분의 세포들은 세포예정사가 진행되어 있으며, apoptotic body들이 난포 내에 산재되어 있었다. 이 시기의 난소조직의 전반적인 염색도는 저선량의 X-선 조사에서보다 더 현저히 강한 염색성이 나타났다.
Cortisol은 난소내 다량으로 존재하며, 난소 세포에 그 수용체가 있는 것으로 보고되고 있다. 또한 사람의 과립 및 황체화 세포에서 cortisol은 스테로이드 생성과 세포 대사에 영향을 미치는 것으로 알려지고 있으나, 배란 후 난포액에 높은 농도로 존재하는 cortisol이 과립-황체화 세포에 어떤 영향을 미치는 지는 정확히 밝혀져 있지 않다. 따라서 본 실험에서 과배란 유도후 획득한 사람 과립-황체화 세포를 배양하면서 5, 50, $500{\mu}g/m\ell$ cortisol과 1 IU/$m\ell$ FSH를 처리하고 세포의 세포자연사와 분비된 progesterone$(P_4)$과 estradiol$(E_2)$량의 변화를 조사하였다. DNA 분절화 분석과 TUNEL 방법으로 세포자연사를 평가한 결과, cortisol는 농도 의존적으로 과립-황체화 세포의 세포자연사를 증가시켰고, 특히 50과 $500{\mu}g/m\ell$ cortisol을 처리한 군에서 유의한 차이를 보이며 세포자연사 비율을 증가시켰다. 또한 cortisol에 의한 세포자연사의 증가는 FSH에 의해 억제되지 못함을 알 수 있었다. 화학발광면역 측정법을 이용하여 배양내 $P_4$와 $E_2$의 양을 측정한 결과, cortisol을 처리한 후 $E_2$의 양은 변화가 없었던 반면 $P_4$의 양은 감소하였다. 이러한 cortisol의 $P_4$ 합성 억제 효과는 세포자연사 결과와 마찬가지로 FSH에 의해 회복되지 못함을 확인할 수 있었다. 이상의 결과는 일정 농도 이상의 cortisol은 과립-황체화 세포의 세포자연사를 유발시킬 수 있으며, 또한 $P_4$의 합성을 억제시킴으로써 난포 폐쇄를 직접적으로 유발시킬 수 있음 보여준다. 그러나 본 연구 결과들은 기존의 연구 결과와 상반된 결과를 보이고 있으며, 앞으로 과립-황체화 세포에 대한 cortisol의 생리적인 관련성을 밝혀 그 기전을 명확히 할 필요성이 있다.
Background: Ovarian sex-cord stromal tumours (SCST) are rare, and relatively infrequent in children. These have to be distinguished from more common germ cell tumors in children and also from benign epithelial neoplasms. Objectives: The purpose of our study was to report the clinical and pathological findings in young patients with these tumours in our population. Material and Methods: The present observational cross-sectional study included all subjects <21 years of age diagnosed with ovarian SCST, in Aga Khan University Hospital Histopathology Laboratory, Karachi, Pakistan, from January 1992 till July 2013. Results: Of the total of 513 SCSTs presented during the study period, 39 fulfilled inclusion criteria and were assessed. The age range was 4-250 months. Most of the tumours presented at stage-1 and an abdominal mass was the most common presenting symptom, along with menstrual disturbance. The left side ovary was slightly more affected (53.5%). Of the total, 15 were juvenile granulosa cell tumours (JGCT), 11 sclerosing stromal tumours (SST), 10 of the fibrothecomas spectrum, 2 Sertoli leydig cell tumours (SLCT) and one a sex cord tumour with annular tubules (SCTAT). Detailed immunohistochemical analyses were performed in 33 cases. Recurrence/metastasis was noted in 4/21 cases with follow-up data. Conclusions: Ovarian sex cord stromal tumours are very rare in young age in our population, and usually present at an early stage. Most common among these are juvenile granulosa cell tumours, although surprisingly sclerosing stromal tumours were also common. Clinical symptoms due to hormone secretion in premenstrual girls and menstrual disturbance in menstruating girls are common presenting features.
본인 등은 참개구리를 이용하여 여포의 스테로이드 생성에 관한 two-cell type model을 제시한바 있다. 본 연구에서는 이 model이 북방산 개구리 (R. dybowskii)에도 적용 되는지와 협막세포층에 minor pathway(P 5$\longrightarrow$17$\alpha$-OHP$_4$)가 있는지의 여부를 조사하였다. 이를 위하여 북방산 개구리 난소로부터 intact follicles (IFs), granulosa cell enclosed-oocytes (GcEOs), theca/epithelium (THEP) layers 및 난구세포가 포함되어 있지 않은 순수한 theca/epithelium (P-THEP) layers를 미세해부기술로 분리해 내었다. 이들 여포 조직들은 전구 스테로이드나 개구리 뇌ㅏ수체추출물(FPH)이 포함되어 있는 배양액에서 6시간 배양한 후, 각 여포조직 의해 전환된 산물스테로이드의 양을 방사면역측정법으로 조사하였다.외부에서 첨가된 P 5와 P$_4$는 GcEOs와 IFs에 의하여 효율적으로 P$_4$혹은 17 $\alpha$-OHP$_4$로 전환되었으나 THEP에 의해서는 전환되지 않았다. 더욱이 순수한 협막층(P-THEP)에 의해서는 전환이 거의 이루어지지 않았다. 17 $\alpha$-OHP$_4$및 testosterone 역시 GCEOs와 IFs에 의해서 estradiol (E$_2$) 및 androstenedione (AD)으로 각각 전환되었으나 THEP에 위해서는 정환되지 않았다. 반면에, AD는 THEP과 IFs에 의해서만 T로 전환되어졌으며, AD를 제외한 다른 전구스테로이드들은 THEP 의해서도 T로 전환되지 못했다. 이러한 결과들은 P$_4$, 17 $\alpha$-OHP$_4$AD 및 E$_2$는 주로 난구세포에서 생성되고, T는 주로 협막세포에서 생성되며 T나 E$_2$의 효율적인 생성에 이들 두 세포의 협조가 필요하다는 것을 말해준다. 이는 참개구리에서 제시한 two-cell type model이 북방산개구리 여포의 스테로이드 생성과정에도 적용되며 협막 세포층에는 minor pathway ( P5 to 17$\alpha$-OHP$_4$)가 존재하지 않음을 또한 보여주고 있다.
These studies were carried out to investigate the effects of fetal calf serum(FCS), estrous porcine serum(EPS), porcine follicular fluid(PFF), hormone and matured cumulus cell(MCC) on in vitro maturation and fertilization of porcine follicular oocytes. The ovaries and testes were obtianed from slaughtered Landrace sow and boars, respectively. The follicular oocytes surrounded with cumulus cells were recovered by aspirating follicular fluid from the visible follicles of diameter 3~5 mm and the semen were prepared from boar's epididymal cauda. The follicular oocytes were cultured in TCM-199 medium containing hormones, FCS, EPS, PFF and MCC for 48hrs. in a incubator with 5% CO2 in air at 36$^{\circ}C$ and then matured oocytes were again cultured for 18~20 hrs. with $1.5\times$106/ml motile capacitated sperm in the modified Tyroide solution containing 100$\mu\textrm{g}$/ml of heparin. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The maturation and fertilization rate of the follicular oocytes, cultured in the TCM-199 medium supplemented with 10% FCS and PMSG+HCG were 55.6~64.5% and 33.3~37.1%, respectively. 2. The maturation and fertilization rate of the follicular oocytes cultured in the TCM-199 medium supplemented with 20% EPS and PMSG+HCG were 50.0~55.0% and 30.3~33.3%, respectively. 3. The maturation rate(59.0~64.2%) and fertilization rate(34.8~39.3%) of follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented 20% FCS and 50% PFF were higher than those of follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 5%, 10% and 15% FCS and 10% and 50% PFF. 4. The maturation rate(60.0%) and fertilization rate(40.0%) of follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 20% FCS and granulosa cell (1$\times$106/ml) were significantly higher than those of fiollicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 5%, 10% and 15% FCS and granulosa cell.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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