Background: NADPH oxidase (NOX) modulates cell proliferation, differentiation and immune response through generation of reactive oxygen species. Particularly, NOX2 is recently reported to be important for regulating Treg cell differentiation of CD4+ T cells. Methods: We employed ovalbumin-induced airway inflammation in wild-type and NOX2-deficient mice and analyzed tissue histopathology and cytokine profiles. Results: We investigated whether NOX2-deficiency affects T cell-mediated airway inflammation. Ovalbumin injection which activates T cell-mediated allergic response increased airway inflammation in wild-type mice, as evidenced by increased immune cell infiltration, allergic cytokine expression, and goblet cell hyperplasia in the lung. Interestingly, NOX2 knockout (KO) mice were more susceptible to allergen-induced lung inflammation compared to wild-type mice. Immune cells including neutrophils, lymphocytes, macrophages, and eosinophils were drastically infiltrated into the lung of NOX2 KO mice and mucus secretion was substantially increased in deficiency of NOX2. Furthermore, inflammatory allergic cytokines and eotaxin were significantly elevated in NOX2 KO mice, in accordance with enhanced generation of inflammatory cytokines interleukin-17 and interferon-${\gamma}$ by CD4+ T cells. Conclusion: These results indicate that NOX2 deficiency favorably produces inflammatory cytokines by T cells and thus increases the susceptibility to severe airway inflammation.
망상어, Ditrema temmincki 소화관의 형태 조직화학적인 특징은 다음과 같이 요약할 수 있다. 체장에 대한 식도에서 항문까지의 소화관 길이의 비 (RLG)는 0.89정도이며, 소화관에는 식도와 담관 입구사이의 팽창부인 위(胃)가 없다. 소화관은 형태 조직화학적인 특징에 의하여 식도, 식도 - 장이행부, 전장, 중장, 후장, 장 - 직장 이행부, 직장, 직장 - 항문 이행부, 항문으로 나눌 수 있다. 점막주름은 직장에서 가장 복잡한 형태를 보이며, 근육층은 식도와 항문에서 발달된 상태를 나타낸다. 점막주름의 상피층은 식도 전방부에서는 입방세포로 구성되며, 나머지 부위 에서는 원주상피로 구성된다. 소화관에는 PAS 반응에 양성을 나타내는 배상세포와 다당류 흡수세포 (Polysaccharid Absorptive Cell)가 관찰되는데, 후자는 다당류 계통의 영양물질의 흡수기능을 가진다. 망상어 소화관에서 다당류 계통의 영양물질은 주로 후장부에서 흡수된다.
Objective: The study was to investigate the effects of alanyl-glutamine (Ala-Gln) and glutamine (Gln) supplementation on the intestinal mucosa barrier in piglets. Methods: A total of 180 barrows with initial weight $10.01{\pm}0.03kg$ were randomly allocated to three treatments, and each treatment consisted of three pens and twenty pigs per pen. The piglets of three groups were fed with control diet [0.62% alanine (Ala)], Ala-Gln diet (0.5% Ala-Gln), Gln diet (0.34% Gln and 0.21% Ala), respectively. Results: The results showed that in comparison with control diet, dietary Ala-Gln supplementation increased the height of villi in duodenum and jejunum (p<0.05), Gln supplementation increased the villi height of jejunum (p<0.05), Ala-Gln supplementation up-regulated the mRNA expressions of epidermal growth factor receptor and insulin-like growth factor 1 receptor in jejunal mucosa (p<0.05), raised the mRNA expressions of Claudin-1, Occludin, zonula occludens protein-1 (ZO-1) and the protein levels of Occludin, ZO-1 in jejunal mucosa (p<0.05), Ala-Gln supplementation enlarged the number of goblet cells in duodenal and ileal epithelium (p<0.05), Gln increased the number of goblet cells in duodenal epithelium (p<0.05) and Ala-Gln supplementation improved the concentrations of secretory immunoglobulin A and immunoglobulin G in the jejunal mucosa (p<0.05). Conclusion: These results demonstrated that dietary Ala-Gln supplementation could maintain the integrity of small intestine and promote the functions of intestinal mucosa barriers in piglets.
배 경: 만성 기도 질환자에서 유신 양의 증가와 생화학적 변화가 예상된다. 기도 질환자에서의 기도내 뮤신의 정량적 측정에 흰쥐 뮤신에 대한 단 세포군 항체(RTO3)의 임상적 유용성을 알아보고자 하였다. 방 법: 기도 질환자와 정상인에서 채취한 객담과 기관지 세척액으로부터 얻은 뮤신과 RTO3와의 교차반응을 확인하기 위하여 western blotting을 이용하였고 단 세포군 항체가 생체내의 기도 뮤신과의 특이적인 반응을 하는지를 면역조직화학적으로 검색 하였다. ELISA를 이용하여 정상인과 기도 질환자의 뮤신 양을 비교하여 보았고 또한 기도 질환에 따른 뮤신양의 변화도 관찰하였다. 결 과: 1) Western blot으로 두명의 기관지 천식환자에서 220kDa 이상에서 면역적으로 반응하는 뮤신을 관찰하였고 2) 사람의 주 기관지에서 상피 세포층의 배상 세포와 점막하층의 분비선에서 뮤신이 분비됨을 PAS 염색법으로 확인하였지만 RTO3를 이용한 면역조직 화학 염색에서는 양성 소견을 보이는 세포의 빈도가 적었다. 3) 뮤신의 양은 정상인에서는 평균 48ng/ml이하로 분비 되지만 기도 질환자에서는 정상인에 비해 뮤신 양의 분비가 증가됨을 알 수 있었다. 4) 기도 질환의 병기에 따른 뮤신 양의 변화는 기관지 천식환자에서 심한 발작시에 뮤신의 분비가 안정한 천식상태에서 보다 증가 됨을 알 수 있었다. 5) 폐암 환자의 기도 세척액에서 얻은 뮤신의 양도 정상인 보다 증가되어 있었다. 결 론: 만성 기도질환자의 뮤신 정량적 측정에 표식자로 단세포군 항체 RTO3를 이용한 ELISA의 시용 가능성을 보여 주었다.
In the intestinal mucosa, mast cells are thought to be responsible for the expulsion of parasites. We investigated the relationship of worm expulsion and mast cells in C3H/HeN and BALB/c mice infected with Echinostoma hortense. In addition, we examined whether the worm recovery rate was associated with the strain of mice, and whether a toluidine stain and immunohistochemistry using the c-kit antibody was effective in the detection of mast cells. In order to investigate the mucosal immune response of C3H/HeN and BALB/c mice, each mouse was infected orally with 30 E. hortense metacercariae. Then, the number of mucosal mast cells and worm recovery rates was observed in experimentally infected mouse strains between 1 week and 8 weeks post infection (PI). Mucosal mast cells were increased in 3 weeks P.I. in C3H/HeN and BALB/c mice. On the other hand, only mucosal goblet cells and worm recovery rates correlated in C3H/HeN mice (P=0.0482). Worm recoveries in C3H/HeN mice were 65.7$\pm$5.6, 53.3$\pm$5.4 and 6.7$\pm$0.6 in week 1, 2, and 3 P.I. and strongly decreased in week 3 P.I. Worm recoveries in BALB/c mice were 23.0$\pm$2.5, 10.0$\pm$1.0, and 6.7$\pm$0.6% in week 1, 2, and 3 P.I. and gradually decreased from week 1 P.I. to week 3 P.I. Worm recoveries in C3H/HeN mice were significantly higher than in BALB/c mice (P<0.00l). The number of mast cells in C3H/HeN and BALB/c mice using the anti-c-kit antibody reached to a peak in week 3 P.I. and recovered as normal level in week 5 P.I. and 6 P.I. The number in E. hortense-infected C3H/HeN mice (P=0.0015) was higher than in E. hortense-infected BALB/c mice (P=0.01) compared with the control group. There were significant differences in the number of mast cells among regions of the intestine in in C3H/HeN mice (P<0.05) but not in BALB/c mice (P>0.05). Immunohistochemistry using the anti-c-kit antibody was significant method as an examination of the number of mast cells (P=0.0002). In conclusion, the present study demonstrated that mast cells play an important role in worm recovery, and immunohistochemistry using the anti-c-kit antibody was superior to toluidine stain as an examination of mast cells.
Objectives In this study, the author intended to investigate whether Gami-cheongpetang (GCP), Gagam-jeongkitang (GJG), Gami-samooltang (GSM) and Gami-ijoongtang (GIJ) significantly affect in vivo (animal model) and in vitro (cultured cells) mucin secretion and MUC5AC gene expression in airway epithelial cells. Methods For in vivo experiment, the author induced hypersecretion of airway mucin in rats by introducing SO2 for 3 weeks. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to assess the effects of orally-administered GCP, GJG, GSM and GIJ in vivo mucin secretion from tracheal goblet cells of rats after 1 week. Also, the effects of the agents on TNF- or EGF-induced MUC5AC gene expression in human airway epithelial cells (NCI-H292) were investigated. Possible cytotoxicities of the agents were assessed by examining the rate of survival and proliferation of NCI-H292 cells. Results (1) GCP and GJG significantly inhibited hypersecretion of in vivo mucin, although GSM and GIJ did not affect hypersecretion of in vivo mucin; (2) GCP and GJG significantly increased in vitro mucin secretion from cultured HTSE cells. However, GSM and GIJ did not affect in vitro mucin secretion from HTSE cells; (3) GCP and GJG significantly inhibited the expression levels of EGF-induced MUC5AC gene in NCI-H292 cells. However, GSM and GIJ increased the expression levels of EGF-induced MUC 5AC gene in NCI-H292 cells; (4) GCP, GJG, GSM and GIJ did not significantly inhibit the survival and proliferation of NCI-H292 cells. Conclusions These results suggest that GCP, GJG, GSM and GIJ can not only affect the secretion of mucin but also affect the expression of mucin gene. The author suggests that the effects of GCP, GJG, GSM and GIJ with their components should be further investigated by using animal experimental models that simulate the diverse pathophysiology of pulmonary diseases.
As a series of studies to investigate the effect of immunosuppression on Ascaris suum infection in undefinitive hosts, and a delicate relationship between host and parasite, in the present studies, SPF ICR mice were alloted to experiment 1(normal undefinitive host group) and experiment 2(immunosuppressive group treated with prednisolone acetate) and inoculated with a single dose of 1,100 embryonated A suum eggs. In normal group, the infection essentially terminates 4 days after inoculation(DAI) with the attainment of middle third-stage in the liver, although few larvae migrate to the lungs where a few advance to late third stage. In immunosuppressive group, significant numbers developed to late third-stage in liver 8 DAI. In general, increasing of the mast cells and the goblet cells in the jejunum mucosa, of T-cells in the spleen and of activity of peritoneal macrophages followed by expulsion of the worms in the both groups. Considering a series of the results, suitabilities for the host of the worm appeared the highest from rabbit, hamster and mouse in that order. In addition, patent infection of A suum in the mice was also not obviously observed in spite of immunosuppression by prednisolone acetate.
Objectives : This study was designed to compare the morphological changes in the nasal, tracheal and main bronchial mucosa in rats exposed to 0, 0.3, 0.6, 0.9 and 1.2 ppm ozone for 7 days, 6 hours per day. Materials and Methods : We observed the nasal, tracheal and main bronchial mucosa in rats exposed to 0, 0.3, 0.6, 0.9 and 1.2 ppm ozone for 7days, 6hours per day with LM, SEM and TEM. Results : In light microscopy, influx of inflammatory cells, epithelial hyperplasia, loss of cilia and increased goblet cells were observed in all rats except those exposed to 0.3 ppm. these findings increased with the increase of ozone concentration, but there were no significant differences among the nasal, tracheal and main bronchial mucosa in rats exposed to the same ozone concentration. In scanning electron microscopy, a loss of cilia was observed in rats exposed to 0.3 ppm in some sections and 0.6 ppm and 1.2 ppm in all sections. In transmission electron microscopy, vacuolization of epithelial cells was observed in rats exposed to 0.3 ppm in some sections and 0.6 ppm in all sections. These results suggest that electron microscopic observation is necessary to study morphology of airway mucosa in rats exposed to ozone below 0.3 ppm. And also the morphological changes in nasal septal epithelium may reflect those of tracheal and bronchial epithelium after high concentration ozone-exposure.
We investigated the anti-inflammatory effect of Pyunkang-tang extract (PGT), a complex herbal extract based on traditional Chinese medicine that is used in Korea for controlling diverse pulmonary diseases, on cigarette smoke-induced pulmonary pathology in a rat model of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). The constituents of PGT were Lonicerae japonica, Liriope platyphylla, Adenophora triphilla, Xantium strumarinum, Selaginella tamariscina and Rehmannia glutinosa. Rats were exposed by inhalation to a mixture of cigarette smoke extract (CSE) and sulfur dioxide for three weeks to induce COPD-like pulmonary inflammation. PGT was administered orally to rats and pathological changes to the pulmonary system were examined in each group of animals through measurement of tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) and interleukin-6 (IL-6) levels in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) at 21 days post-CSE treatment. The effect of PGT on the hypersecretion of pulmonary mucin in rats was assessed by quantification of the amount of mucus secreted and by examining histopathologic changes in tracheal epithelium. Confluent NCI-H292 cells were pretreated with PGT for 30 min and then stimulated with CSE plus PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate), for 24 h. The MUC5AC mucin gene expression was measured by RT-PCR. Production of MUC5AC mucin protein was measured by ELISA. The results were as follows: (1) PGT inhibited CSE-induced pulmonary inflammation as shown by decreased TNF-${\alpha}$ and IL-6 levels in BALF; (2) PGT inhibited the hypersecretion of pulmonary mucin and normalized the increased amount of mucosubstances in goblet cells of the CSE-induced COPD rat model; (3) PGT inhibited CSE-induced MUC5AC mucin production and gene expression in vitro in NCI-H292 cells, a human airway epithelial cell line. These results suggest that PGT might regulate the inflammatory aspects of COPD in a rat model.
Objective: We examined the localization and expression of H+ pumping vacuolar ATPase (V-ATPase) and cytokeratin 5 (KRT5) in the epididymis of pigs, expressed in clear and basal cells, respectively, during postnatal development. Methods: Epididymides were obtained from pigs at 1, 7, 21, 60, 120, and 180 days of age; we observed the localization and expression patterns of V-ATPase and KRT5 in the different regions of these organs, namely, the caput, corpus, and cauda. The differentiation of epididymal epithelial cells was determined by immunofluorescence labeling using cell-type-specific markers and observed using confocal microscopy. Results: At postnatal day 5 (PND5), the localization of clear cells commenced migration from the cauda toward the caput. Although at PND120, goblet-shaped clear cells were detected along the entire length of the epididymis, those labeled for V-ATPase had disappeared from the corpus to cauda and were maintained only in the caput epididymis in adult pigs. In contrast, whereas basal cells labeled for KRT5 were only present in the vas deferens at birth, they were detected in all regions of the epididymis at PND60. These cells were localized at the base of the epithelium; however, no basal cells characterized by luminally extending cell projections were observed in any of the adult epididymides examined. Conclusion: The differentiation of clear and basal cells progressively initiates in a retrograde manner from the cauda to the caput epididymis. The cell-type-specific distribution and localization of the epithelial cells play important roles in establishing a unique luminal environment for sperm maturation and storage in the pig epididymis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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