The seeds and callus induced from the root of Glycine max were used as test materials. When the seed was treated with the different concentrations of Pinus rigida extract, there was a more striking inhibition of seedling growth than of seed germination. The callus of the control group was in good condition, but when treated with 5% extract there was generalized browning and cell division was decreased in the upper part of the callus. There was no difference in the fresh and dry weights in 2% extract treatment but there was dramatic repression at concentrations higher than 5%. The band activity of peroxidase isozyme in treated callus was elevated, while that of esterase was inhibited.
In order to establish efficient plant regeneration from embryogenic suspension cultures of soybean, Glycine max L, we examined the effects of auxin type and concentration, cytokinin type and concentration, and amino acid type and concentration on the growth of embryogenic clumps from induced callus, and the effect of desiccation of mature somatic embryos obtained from these clumps on the frequency of somatic embryo germination. Embryogenic callus was induced from the edge of the cotyledons cultured on MS medium containing 6% sucrose, 40 mg/L 2,4-D, 0.2% gelrite and pH 5.7. The growth of embryogenic clumps was best in early staged, embryogenic callus that was placed in suspension culture of MS medium containing 5 mg/L 2,4-D and 0.5 mg/L asparagine. Single somatic embryos were isolated from the clumps and plated on the same medium for maturation. When the mature single somatic embryos were desiccated for 96 h, somatic embryo germination came up to approximately 90%. The plantlets germinated after embryos desiccation for 2 weeks were transfered to MS medium containing 3% sucrose,0.2% gelrite and pH 5.7.
대두(Glycine max)의 ${\beta}$-1,3-glucanase를 분리동정하고 benzyladenine(BA)이 이 효소의 세포내 함량과 활동도에 미치는 영향을 조사하였다. 또 세포벽의 callose함량과 protoplast의 세포벽재생에 미치는 BA의 영향을 조사하여, cytokinin이 식물의 세포벽재생을 촉진하는 기능이 있음을 확인하고 세포벽재생에 있어서 cytokinin의 작용기구를 검토하였다. 대두 ${\beta}-1,3-glucanase$는 21 kD의 polypeptide로 동정되었는데 이 polypeptide의 세포내함량과 효소활성은 BA처리에 의하여 저하되었다. 그리고 callus세포벽의 callose함량과 protoplast의 세포벽재생율이 BA처리에 의하여 증가되었다. 이 결과들은 cytokinin이 세포의 ${\beta}-1,3-glucanase$수준을 저하시켜 callose분해를 억제함으로써 세포벽 재생을 촉진할 수 있음을 보여주었다.
The isolation and culture of protoplasts from hypocotyl-derived calluses of Glycine max (L.) Merr. cv. Jangyeop were obtained by digestion for 6 hrs in an enzyme solution containing 3.5% cellulase, 1.5% macerozyme, 10% sorbitol and 0.1% CaCl2.2H2O at pH 5.8. Newly formed cell wall of protoplasts cultured in MS agar medium containing 10 $\mu$M $\alpha$-naphthaleneacetic acid (NAA) and 32 $\mu$M N6-benzylaminopurine (BAP) could be observed after 24 hrs culture. The first cell division of the protoplasts was observed after 3 days of culture; cell clusters after 2 weeks of culture. When transferred to solid media, the protoplasts formed cell clusters gave rise to proliferating calluses.
본 연구는 Glycine max (L.) Merr.의 태좌부위를 순수 분리하여 callus 세포를 유도하고 2차 대사산물인 isoflavone류에 속하는 daidzein의 생산성을 증진시킬 수 있는 방법을 찾는데 있다. 배양된 callus를 다양한 용매를 사용하여 추출하고, 추출물을 액체 크로마토그래피로 분석해 daidzein 함량의 차이를 확인하였다. 또한 핵자기공명분광법으로 50% 에탄올 추출물 내에 daidzein이 함유되어 있음을 증명하였다.
대두의 자엽 절편을 이용한 부정근 형성과 품종 반응을 비교하였다. 품종별 부정근 형성 양상은 직접적인 부정근 형성 품종과 callus형성이 동시에 이루어지는 품종들로 구분되었으며, callus 형성이 많은 품종에서는 부정근 형성수가 적었다. 자엽 절편에서의 부정근 형성은 절편의 향축면 치상시에만 부정근이 형성되었고, 배축면과 향축면이 동시에 치상될 경우에도 향축면에서만 부정근이 형성되며, 절편의 배축이 존재하였던 방향에서만 부정근이 형성되는 방향성이 존재하였다. 부정근 형성시 자엽 절편 내 탄수화물은 형성초기보다 형성이 가장 많은 유기 4일에 가장 많이 관찰되었으며 ,형성된 부정근의 생장이 이루어지는 7일 이후에는 관찰되지 않았다.
대두(Glycine max var. Acme)의 자엽조직에서 유래된 callus의 부유배양세포로부터 protoplast를 분리하고, 이들 protoplast의 viability, 세포벽재생 및 세포분열에 대한 benzyladenine(BA)의 영향과 protoplast에 의한 BA의 흡수특성을 조사하였다. Protoplast의 viability는 BA처리에 의하여 증가되었고, 세포벽재생과 세포분열 그리고 callue의 생장도 BA처리에 의하여 촉진되었다. Protoplast에 의하여 흡수된 BA의 양은 BA 처리후 약 20시간에 최대에 이르렀고, 이중에서 약 2/3가 6시간 이내에 흡수되었다.
국내 콩 품종의 기내 재생 효율을 개선하고자 국내 장려품종인 우람, 진품2호, 청자3호, 태광콩 품종의 기관형성 및 자엽 크기별 체세포배발생을 검토하였다. 식물체 조직절편 부위별 (자엽, 배축, 자엽+배축 절편) 신초 형성율을 조사한 결과, 자엽과 배축을 포함한 절편(자엽 + 배축)이 절편 당 분화된 신초수가 가장 많았다. 반면에 자엽 절편과 배축 절편에서는 신초가 형성되지 않았다. 배지 종류별로는 B5 배지보다 MS 배지에서 신초형성이 양호했으며, BA 2 ㎎/L 처리구가 TDZ 2 ㎎/L을 첨가한 배지보다 신초 형성율이 높았다. 공시한 4 가지 품종 중 태광콩이 BA 2 ㎎/L를 포함한 MS배지에서 신초형성율이 83.3%로 가장 높았다. 또한 체세포 배발생을 통한 캘러스 유도율을 조사하기 위하여 미성숙 자엽을 크기(S: 1∼2 ㎜, M: 3∼5 ㎜, L: 6∼8 ㎜) 별로 구분하여 배양한 결과, 4 가지 품종 모두 중간 크기(M, 3∼5 ㎜)에서 가장 높았으며, 태광콩이 65.8%로 가장 높은 캘러스 유도율을 보였다.
Plant secondary metabolites have always been a focus of study due to their important roles in human medicine and nutrition. We transferred the isoflavone synthase (IFS) gene into soybean [Glycine max (L.) Merr.] using the Agrobacterium-mediated transformation method in an attempt to produce transformed soybean plants which produced increased levels of the secondary metabolite, isoflavone. Although the trial to produce transgenic plant failed due to unestablished hygromycin selection, transformed callus cell lines were obtained. The induction rate and degree of callus were similar among the three cultivars tested, but light illumination positively influenced the frequency of callus formation, resulting in a callus induction rate of 74% for Kwangan, 67% for Sojin, and 73% for Duyou. Following seven to eight subcultures on selection media, the isoflavone content of the transformed callus lines were analyzed by high-performance liquid chromatography. The total amount of isoflavone in the transformed callus cell lines was three- to sixfold higher than that in control callus or seeds. Given the many positive effects of isoflavone on human health, it may be possible to adapt our transformed callus lines for industrialization through an alternative cell culture system to produce high concentrations of isoflavones.
Compositae plants are known to contain biologically active substances that are allelopathic to agricultural crops as well as weed species. Aqueous or methanol extracts and plant residues from leaves of Xanthium occidentale were assayed against alfalfa (Medicago sativa) to determine its allelopathic effects, and the results showed that the extracts applied onto filter paper significantly inhibited seed germination as well as root growth of alfalfa. Aqueous leaf extracts of $40g\;L^{-1}$ were completely inhibitory on root growth of alfalfa, while root growths of barley (Hordeum vulgare L.) and soybean (Glycine max L.) were less sensitive. Leaf residue incorporation at $100g\;kg^{-1}$ into soil on seedling growth of barnyard grass (Echinochloa crus-galli Beauv. var. oryzicola Ohwi) inhibited both shoot and root fresh weights of barnyard grass by 94 and $96\%$, respectively. Methanol extracts from BuOn and EtOAc fractions of X. occidentale reduced alfalfa root growth more than did those from hexane and water fractions. The results based on bioassay of extracts and residues show that X. occidentale had potent an allelopathic activity against other plant species.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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