Five biflavones and sevenflavonolglycosideswereisolatedfromtheleaves of Ginkgo biloba. They were sciadopitysin(1), ginkgetin(2), isoginkgetin(3), bilobetin(4), amentoflavone(5), kaempferol 3-O-[$6'-O-{\rho}-coumaroyl-{\beta}-_D-glucopyranosyl(1{\rightarrow}2)-{\alpha}-_Lrhamnopyranoside$](6), quercetin 3-O-[$6'-O-{\rho}-coumaroyl-{\beta}-_D-glucopyranosyl(1{\rightarrow}2)-{\alpha}-_Lrhamnopyranoside$](8), rutinosides of kaempferol(7), isorhamnetin(9), quercetin(10), laricitrin(11), and kaempferol 3-O-($2',6'-{\alpha}-_L-dirhamnopyranosyl-{\beta}-_{D}-glucopyranoside$)(12). The structures were established by spectroscopic and chemical methods.
Mature embryo and developing seedlings of Ginkgo biloba L. were embedded in a paraplast and serially sectioned at 10${\mu}{\textrm}{m}$ to examine vascular differentiation and vascular transition. Procambium and protophloem formed a continuous system along the epicotylhypocotyl root axis and cotyledons in mature embryo, whereas protoxylem was differentiated discontinuously in the cotyledons and rarely in the upper hypocotyl. The traces of the first and second leaf primordia apeared almost at the same time oppositely to each otehr at the epicotyl and alternately with the cotyledon traces in the upper hypocotyl. The trace differentiated bidirectionally toward the epicotyl and root tips. the young root initially formed a diarch xylem. Then, as the traces of the first and second leaves were superimposed, the diarch xylem. Then, as the traces of the first and second leaves were superimposed, the diarch xylem of the root was changed totriarch and tetrarch xylem, respectively. On the formation of primary vascular system of Ginkgo biloba, it is suggested that the primary phloem forms a continuous system throughout the seedling, whereas the primary xylem of the epicotyl is formed independently from that of the root-hypocotyl cotyledon system.
천연식물자원으로부터 생물농약을 개발하기 위하여 점박이응애(Tetranichus urticae), 목화진딧물(Aphis gossypii)과 복숭아혹진딧물(Myzus persicae)에 대해 푸른은행잎 추출물(GG-W80)과 노란은행잎 추출물(YG-W80)의 살충효과와 기피효과를 leaf disk법과 유묘검정법에 의해 조사하였다. 점박이응애에 대한 살충효과는 GG-W80이 98.3%로 YG-W80의 20.0%보다 우수하였다. 점박이응애에 강한 살충효과를 보이는 생리활성물질은 high performance liquid chromatography(HPLC)를 이용해 동정하였다. 푸른은행잎 추출물에서는 각각 bilobalide $611\;{\mu}g/kg$, ginkgolide A $37\;{\mu}g/kg$와 ginkgolide B $243\;{\mu}g/kg$이 동정되었으며, 노란은행잎 추출물에서는 bilobalide $214\;{\mu}g/kg$와 ginkgolide B $46\;{\mu}g/kg$이 동정되었으나 ginkgolide A는 확인되지 않았다. 이상의 결과는 은행잎에 존재하는 terpene계 화합물인 bilobalide와 ginkgolide A, B가 점박이응애에 살충력을 갖고 있음을 알수 있으며, 이들 성분을 포함한 은행잎 추출물이 점박이응애에 대한 생물학적 방제 가능성을 가지고 있음을 시사하였다.
In this study, an improved method for the quantitative analysis of ginkgolic acids (GAs) in Ginkgo biloba leaf extract was developed. The samples were extracted with a mixture of chloroform and 50 % ethanol, after which the chloroform extract was dried and reconstituted in methanol. GAs with 13:0, 15:1, and 17:1 in the extract were successfully separated within 40 min and determined with high throughput performance using an online column-switching HPLC method using an SP column C8 SG80 ($4.6{\times}150mm$, $5{\mu}m$) and a Cadenza 5CD C18 column ($4.6{\times}150mm$, $3{\mu}m$). The developed HPLC method was validated for Ginkgo biloba leaf extract. The validation parameters were specificity, linearity, precision, accuracy, and limits of detection and quantitation (LODs and LOQs, respectively). It was found that all of the calibration curves showed good linearity ($r^2$ > 0.9993) within the tested ranges. The LODs and LOQs were all lower than $0.04{\mu}g/mL$. The established method was found to be simple, rapid, and high throughput for the quantitative analysis of GAs in ten commercial Ginkgo biloba leaf extract and dietary supplements. The samples were also analyzed in LC-electrospray ionization (ESI) tandem mass spectrometry (MS/MS) - multiple-ion reaction monitoring (MRM) mode to confirm the identification results that were obtained by the column switching HPLC-DAD method. The developed method is considered to be suitable for the routine quality control and safety assurance of Ginkgo biloba leaf extract.
채취시기(採取時期)를 달리한 초록과 노란은행잎으로부터의 수용추출물(水溶抽出物)에 대한 벼, 피, 바랭이 및 상추의 제초활성검정(除草活性檢定)과 지방산(脂肪酸) 성분(成分)과 페놀성 물질(物質)을 분리(分離) 동정(同定)하여 얻어진 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 은행잎 수용(水溶) 추출물(抽出物)은 벼, 피, 바랭이, 상추의 발아(發芽)와 생육(生育)을 크게 억제(抑制)시켰으며, 특히 20% 수용추출액(水溶抽出液)인 경우는 억제효과(抑制效果)가 뛰어났다. 초록과 노란은행잎 수요 추출물간의 생리활성정도는 별 차이가 없었다. 2. 은행잎의 지방산(脂肪酸)을 검정(檢定)한 결과(結果), 지방산(脂肪酸)이 검정(檢定)되었으며, 그 중에서도 Linolenic acid, Palmitic acid가 많이 포함(包含)되어 있었다. 또한 계절에 따라 은행잎에 함유(含有)된 지방산(脂肪酸)의 함량(含量)이 다소 변화(變化)함을 알 수 있었다. 3. GLC로 phenolic acids를 동정(同定)한 결과(結果), 모든 fraction에서 Salicylic acid의 높은 비율(比率)을 관찰(觀察)할 수 있었으며, 또한 p-coumaric acid, phloroglucinol 등도 검정(檢定)되었다.
다양한 발달단계에 있는 은행종자의 자성배우체, 자엽 및 유근에서 탄수화물의 함량과 여러 가수분해효소(아밀라제, 인버타제 및 인산가수분해효소)의 활성을 비교하였다. 종자의 초기발아시에 아밀라제의 활성이 크게 증가함에 따라 자성배우체의 전분이 현저한 감소를 보인 반면 수용성 당들은 증가하였다. 인버타제의 활성은 건조한 종자에서는 매우 낮았으며 바라된 자엽과 유근에서 점진적으로 증가하였다. 인산가수분해효소의 활성은 유근이 신장되는 단계에서 변화를 나타내었으며 산성-인산가수분해효소가 알카리성-인산가수분해효소보다 더 높은 활성을 보였다.
감자전분젤을 매개로 한 수평식 전기영동장치를 이용하여 은행나무(Ginkgo biloba L.)의 megagametophyte로부터 15개 동위효소의 변이가 분석되었다. 분석된 효소 가운데서 ADH, G6PD, IDH, MPI, UGPP의 5개 효소에서는 변이가 나타나지 않았으며, 나머지 10개 효소의 11개 동위효소 구역(ACON-A, FST-B, GDH-A, GOT-B, MDH-B, MDH-C, MNR-A, PGI-B, PGM-A, 6PGD-B, SKDH-B)에서 다형성이 관찰되었다. 이중 MDH-B를 제외한 모든 구역에서 관찰된 동위효소 변이들이 1 : 1의 독립적 분리비를 보임으로써, 이들이 단일 유전자좌에 의해 조절되는 공우성 대립유전자임을 추정할 수 있었다. 한편, 동위효소 유전자좌의 3가지 조합(ACON-A : MDH-B, GOT-B : PGI-B, MNR-A : SKDH-B)에서 약한 연관관계가 관찰되었으며, 이들의 재조합 비율은 0.38-0.40로 계산되었다 (p<0.05).
Calli and suspension cultures were obtained following inoculation of the explant from leaves of Ginkgo biloba L on the supplemented MS basal medium. The obtained calli and suspension cultured cells were able to produce detectable amounts of ginkgolides which are known as natural specific PAF antagonists. The production of ginkgolides in the calli and suspension cultured celles were identified using GC/MS, GC and HPLC with authentic ocmpounds. Since the production of ginkgolides A and B the calli and suspension cultured cells had been confirmed, effects of types and concentration of plant growth regulators, media and illumination on the induction and growth of the callus were studied. The concentrations of growth regulators for optimal callus were studied. The concentrations of growth regulators for optimal callus induction were studied. The concentrations of growth regulators for optimal callus induction were 1.0 to 2.0 mg/L for NAA and o.1 mg/L for kinetin. The growth of the Callus seemed to be more simnultaed with the combination of NAA and kinetin than NAA and BA with illumination at all concentration ranges of 1.0 to 4.0 mg/l for NAA and o.1 to 1.0 mg/L for kinetin or BA studied. Amogn 8 different media used, the induction rate of callus on Anderson, Eriksson, and Shenk and Hildebrant at 4 weeks after the innoculation was almost the same as that of MS. However, callus was rarely induced on Heller or White medium. Suspension cultures were easily initiated with 3 g of callus (fresh weight) derived from ginkgo leaves on supplemented MS medium. A typical growth curve of suspension cultured cells could be obtained by measuring the fresh weight of the suspension cultured cells at every 3 days. To improve the growth of suspension cultured cells of ginkgo, effects of concentrations of NAA, sucrose, phosphate ions and molar ratio of $NH_{4}^+\;to\;NO_{3}^-$ ions in the culture medium were studied. The maximum growth of the cells was achieved when the culture medium contained 1.0 mg/L of NAA, 30 g/L sucrose, 1.75 mM phosphate ions and 1:5 molar ratio of $NH_{4}\;to\;NO_{3}^-$ ions.
은행 종자와 잎은 많은 연구와 개발이 이루어졌으나, 외종피는 알러지 등의 부작용으로 사용을 기피해왔다. 본 연구에서는 버려지는 은행 외종피로부터 작물재배에 많은 피해를 주는 선충을 방제할 수 있는 천연물을 찾고자 했다. 은행 외종피 유기용매추출물의 H2O 분획물과 EtOAc 분획물에서 살선충 활성을 확인하였고, EtOAc 분획물에서 살선충 활성이 가장 높게 나타났으며, EtOAc 분획물을 0.1 mg/mL 농도 처리에서 74%의 살선충 활성이 나타났다. 4차례의 TLC를 실시하여 살선충 물질을 순수 분리하였으며, prep-TLC 에서 Rf 0.5에 single spot을 확인하였고, HPLC 분석에서 Rt 8.609에서 single peak를 확인하였다. 순수 분리한 물질을 GB4-3으로 명명하고, 살선충 활성을 조추출물과 농도별 비교하였다. 은행 외종피 조추출물 10 ㎍/mL 처리 후 18시간 후에 약 45%의 살선충 활성을 나타냈고, 20 ㎍/mL 처리한 곳에서는 55%의 활성을 보였다. 은행 외종피 추출물로부터 순수 분리한 물질 GB4-3을 20 ㎍/mL 처리한 곳에서는 18시간 후에 약 69%의 살선충 활성을 나타나 살선충제 개발 후 보소재로서 가치가 있는 것으로 판단된다. 부식선충에 대한 살선충 활성과 식물기생 선충에 대한 살선충 활성의 유의성은 선행 보고에서 볼 수 있으나, 은행 외종피를 이용한 선충방제제 개발을 위해서는 식물기생성 선충류에 대한 살선충 활성을 조사할 필요가 있다. 농산물재배와 식물생육에 심각한 피해를 주는 선충 방제를 위한 친환경적 방제제의 개발은 절실히 필요하다. 이를 위해서는 식물이나 미생물 등의 생물소재를 이용하거나 천연소재의 부산물을 이용 또는 이들을 혼용한 혼합제제로 개발한다면 상승효과를 기대할 수 있을 것으로 판단한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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