In order to investigate the effects of gelling agent on rice anther culture, anthers of rice (Japonica cv Daecheongbyeo) were cultured on N$_{6}$ media supplemented with 0.8, 1.2 or 1.6% Junsei agar and 05, 0.4, 0.6, 0.8 or 1.0% Gelrite (Phytagel, Sigma). On Junsei agar media, the frequency of callus induction was decreased in proportion to agar concentration. The frequency of callus induction was more increased as 67.6% and 54.8% in media containing 0.4 and 0.6% Gelrite than in agar media. The frequency of plant regeneration and spontaneous doubled-diploid was directly proportional to Junsei agar and Gelrite concentration. The number of green and spontaneous doubled diploid plant was highest on 0.6% Gelrite medium. In order to optimize the concentration of growth regulators for the callus induction medium containing 0.6% Gelrite, anthers were cultured on N$_{6}$ media supplemented with 2mg/L NAA, 2 mg/L 2,4-D, 1mg/L NAA and 1mg/L 2, 4-D, or 1mg/L NAA, 1mg/L 2,4-D and 0.5mg/L kinetin. The maximum frequency of callus induction and plant regeneration was obtained from the medium supplemented with 2 mg/L NAA and 0.6% Gelrite. In conclusion the induction of embryogenic callus, the frequency of plant regeneration and in vivo chromosome doubling was more effective in Gelrite media than in Junsei agar media.dia.
To identify the effects embryo developmental stage and gelrite concentration on plant regeneration in seed culture of rice, mature and immature seeds of rice were cultured on the $N_{6}$ medium supplemented with2 mg/$\ell$ 2.4-D and different levels of gelrite(0.2~1.0%). The calli formed immature embryos were produced more plants than those from mature embryos. The maximum frequency of plant regeneration was achieved in the culture of the calli of immature embryos which was harvested at the 21$^{th}$ day after pollination. The plant regeneration on the medium with gelrite was more accelerate than that on the medium with agar. The highest frequency(55%) of plant regeneration was obtained from the calli transferred to the medium with 6g/$\ell$ gelrite.
This study was conducted to evaluate effects of somatic embryos (SEs) induction with different kinds and concentrations of osmoticum, with gelrite and SEs germination with different abscisic acid (ABA) and embryogenic tissue lines (ETLs) in Japanese red pine (Pinus densiflora). In comparison of somatic embryos induction with different kinds and concentrations of osmoticum, the highest record (45/90 mg FW) was obtained from the treatment of 0.1 M maltose+3.75% PEG 4000. In addition, the higher one was also recorded from 0.2 M maltose (41 SEs), it turned out this treatment was also effective in induction of SEs with previous one. In effects of various gelrite concentrations for SEs production, no SEs were occurred in the treatment of 0.4 or 0.6% gelrite, however, the highest no. of SEs shown in 1.0% gellrite (41 SEs), and some comparable results were also marked with 0.8 (37.3 SEs) or 1.2% (39.7 SEs) gelrite. Therefore, SEs can be produced from above 0.8% concentration of gelrite. Finally, in comparison of SEs germination with different concentrations of ABA, ETLs, and AC, the best germination rates (45%) were obtained from the SEs derived from both concentrations of 150 and $200{\mu}M$ ABA in 06-6 ETL and when cultured on germination supplemented with 0.2% AC. When SEs were cultured on germination medium without AC, best germination rate (28.9%) came from the SEs which cultured on $250{\mu}M$ ABA in 06-6 ETL.
This experiment was conducted to evaluate growth rate among 15 embryogenic tissue lines (ETLs), comparison of maturation on somatic embryos (SEs) with 13 ETLs and efficiency with various concentrations of gelrite on SEs germination in Japanese red pine (Pinus densiflora). In comparison of ETLs growth rate (folds) with 15 lines, the 05-4 line (5.3 folds) showed the highest rate, on the other hand, the lowest one was recorded in the line of 05-37 (1.4 folds). The 13 ETLs were tested for the extent of SEs production. The best production was recorded in the line of 05-4 (39.8/90 mg F.W.). However, most of ETLs, except 5 lines (05-4, 12, 21, 29 and 37), did not produce SEs at all, therefore, big differences in the ability of SEs production existed among the ETLs tested. Effects of various gelrite concentrations for SEs germination with 3 ETLs were also compared. The highest result was obtained from 0.2% gelrite concentration with 05-4 line (47.3%), there was a inclination that the rate of germination was gradually declined over 0.2% gelrite concentration with the 05-4 and 29 lines. respectively. In contrast, in the line of 05-37, no SEs germination occurred on medium with 0.1 or 0.2% gelrite. In conclusion, the growth rate, SEs production and germination frequency were appeared to deeply depended on the ETLs.
For in vitro minimal-growth conservation of S. sarmentosum, the in vitro shoots with 10 mm length were cultured on Murashige and Skoog's media (MS) containing different levels of agar (0.8, 1.2, 1.6, 2%), Gelrite (0.4, 0.6, 0.8, 1%), ABA (0, 5, 10, $20mg{\cdot}L^{-1}$), and sucrose (2, 3, 6, and 9%) without subculture at $4^{\circ}C$ and $25^{\circ}C$. All media were supplemented with $0.2mg{\cdot}L^{-1}$ BA, agar and Gelrite media, with 5% sucrose, sucrose media, with 1.2% agar, and ABA media, with 5% sucrose and 1.2% agar, respectively. In vitro minimal-growth conservation in room-temperature ($25^{\circ}C$) was effective in the media containing with $10mg{\cdot}L^{-1}$ ABA or 1.6% agar, and the healthy plantlets could be preserved for 10 months without subculture. After 12 months at $4^{\circ}C$, survival rate was 100% in all media. The in vitro minimal-growth conservation in low temperature ($4^{\circ}C$) was effective in the media containing with $10mg{\cdot}L^{-1}$ ABA or 6% sucrose, and the healthy plantlets could be preserved over 18 months without subculture. Especially, long-term conservation using minimal growth of S. sarmentosum was much more efficient in the medium containing high level sucrose at $4^{\circ}C$ compared to others.
To detect the effects of gelling agent brands and concentration on rice anther culture, anthers of rice(O. sativa L. japonica, cv, Nagdongbyeo) were inoculated on N6-Y1 basic media supplemented with 0.4~1.6% Bacto agar(Difco, 04140-01), Agarose(Sigma, Type 1) and 0.2~0.8% Gelrite(Kelco, 143364) as gelling agents. On 0.4% Bacto agar and Agarose media, the frequency of callus formation which was significantly decreased in proportion to gelling agent's concentration was 39% and 55%, respectively. On 0.6% Gelrite media, the frequency of callus formation which was not statistically significant among the 0.2~0.8% concentration was 44%. Calli derived from the higher concentration of gelling agents showed embryogenic with slow growth, small, whitish and hard shape compare to that of the lower concentration. The frequency of green plant regeneration was high not only in calli derived from the higher concentration but also in plant regeneration medium with the higher concentration after callus transfer. Calli derived from the higher concentration was effective to maintain the frequency of green plant regeneration up to 60 days after anther inoculation. Introduction of 0.6~0.8% Geltite for callus formation, then transferred 1.6% Bacto agar and Agarose or 0.8% Gelrite for green plant regeneration was effective to increase anther culture efficiency.
Effects of plant growth regulators and anti-oxidants for rapid multiplication of Cymbidium kanran were investigated. The best gelling agent was 2.5 g/1 gelrite which needed less quantity (about 28%) and half price than 9 g/1 chemi-cal agar. Undefined edible agar was only a little bit worse than chemical agar in growth, but the price was half as much as the latter. The higher concentration of BA and NAA, the deeper browning of medium that prevented from performing its functions of plant growth regulators. Polyvinylpyrrolidone (M.W. 40,000) was the most effective anti-oxidant other than ascorbic acid, aspartic acid, and rutin in protecting the browning of medium, enhancing the effect of plant growth regulators, and thus prolonging the subculture cycle. Vigorous seedlings were obtained by 0.1∼1.0 mg/1 BA,0.1 mg/1 NAA and 1 g/1 polyvinylpyrrolidone treatments. Therefore, the best result for growth and econo-mic aspects in rhizome culture of Cymbidium kanran were obtained by using MS basal medium with 2.5 g/1 gelrite, 1 g/1 polyvinylpyrrolidone, 0.1∼1.0 mg/1 BA and 0.1 mg/1 NAA.
Effects of kanamycin concentration on regeneration and rooting of transgenic 'McIntosh Wijcik' were investigated to establish the efficient Agrobacterium-mediated transformation system. Relatively high regeneration frequency of explants appeared even at the high concentration of $150mg{\cdot}L^{-1}$ kanamycin, but the regeneration frequency and the number of normal shoots decreased significantly at a concentration of higher than $100mg{\cdot}L^{-1}$ kanamycin in the gelrite-gellifying medium. Rooting response varied with the transgenic lines in the agar-solidifying medium supplemented with the different concentrations of kanamycin and they were grouped with the inhibition level at $30mg{\cdot}L^{-1}$ concentration. No correlation between copy number and root response was observed. The optimum concentrations of kanamycin for the regeneration of 'McIntosh Wijcik' apple in the medium gellified with gelrite and for indirect-selection of putative transformants in the rooting medium solidified with agar were found to be $100mg{\cdot}L^{-1}$ and $30mg{\cdot}L^{-1}$ respectively.
Kim, Yong-Kyung;Lee, Ji-Yeon;Kim, Eung-Hwi;Cho, Dong-Ha;Park, Sang-Un
Korean Journal of Medicinal Crop Science
/
v.15
no.3
/
pp.210-214
/
2007
The study was carried out to establish in vitro microtuber production from leaf and petiole explant cultures of Pinellia ternata. Culture conditions were optimized by investigating the effect of plant growth regulators, different media, and gelling agents on the efficiency of microtuber indurtion. Among the different combinations of plant growth regulators tested, the combination of 0.1 mg/l 2,4-Dichlorophenoxyacetic (2,4-D) and 0.5 mg/l 6-benzylaminopurine (BAP) showed the highest yield fer microtuber production from leaf (3.9) and petiole (4.7) explant culture on MS medium far 6 weeks. SH(Schenk and Hildebrandt) medium was the most effective medium for microtuber induction and the half strength SH medium was better than SH medium for microtuber production from both leaf and petiole culture. Gelrite was better than agar in the formation of microtubers and 4% Gelrite showed the highest number of microtubers per explant frome leaf (5.9) and petiole (7.8) culture. Germination rate of microtubers after cold storaged for one months long was 86% from in vitro culture and 43% from autoclaved soil.
Genetic transformation was affected by material of explant, age of callus, and medium of regeneration. Two rice seed cultivars (Ilpum and Baekjinju) and mediums were investigated in this study for enhancing regeneration of transgenic rice expressed AtBI-1 gene encoding the Arabidopsis thaliana Bax inhibitor. Regeneration rate of Ilpum rice transformant in gelrite of 5 and 8 g were 27.4% and 18.0%, respectively. In Baekjinju, regeneration rate of transformant was 5.4% and 4.3% in 5 and 8 g gelrite, respectively. The highest number of transformant plant in this study was regenerated from Ilpum cultivar on MS medium (30.4%) and was applied for the subsequent experiment. The callus regeneration rate of transformant were 40.7% in callus infection of up-side, it was higher regeneration then in the down-side (3.9%). The regeneration rate of callus of 25 days and 35 days were 14.7% and 38.6%, respectively. The most important application of this work is in genetic transformation of rice, particularly for improvement transgenic plant tissue culture protocol with high frequency of plant regeneration.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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