Kanamycin Concentration for Selection of 'Mcintosh Wijcik' Transgenic Apple

사과 'McIntosh Wijcik' 형질전환체 선발을 위한 Kanamycin 농도

Effects of kanamycin concentration on regeneration and rooting of transgenic 'McIntosh Wijcik' were investigated to establish the efficient Agrobacterium-mediated transformation system. Relatively high regeneration frequency of explants appeared even at the high concentration of $150mg{\cdot}L^{-1}$ kanamycin, but the regeneration frequency and the number of normal shoots decreased significantly at a concentration of higher than $100mg{\cdot}L^{-1}$ kanamycin in the gelrite-gellifying medium. Rooting response varied with the transgenic lines in the agar-solidifying medium supplemented with the different concentrations of kanamycin and they were grouped with the inhibition level at $30mg{\cdot}L^{-1}$ concentration. No correlation between copy number and root response was observed. The optimum concentrations of kanamycin for the regeneration of 'McIntosh Wijcik' apple in the medium gellified with gelrite and for indirect-selection of putative transformants in the rooting medium solidified with agar were found to be $100mg{\cdot}L^{-1}$ and $30mg{\cdot}L^{-1}$ respectively.

사과에서 효율적인 형질전환 체계를 마련코자 'Mclntosh Wijcik' 형질전환체 계통을 이용하여 재분화 및 발근 배지내 kanamycin 농도에 따른 반응을 조사하였다. Gelrite 고형 재분화 배지에서는 $150mg{\cdot}L^{-1}$의 고농도에서도 재분화율에 대한 저해 정도는 낮았으나, 정상 신초 재분화 면에서는 $100mg{\cdot}L^{-1}$이상의 농도에서 는 저해 정도가 높았다. Agar 고형 발근배지에서 kanamycin 농도에 따른 발근 반응은 계통간 차이를 보여, $30mg{\cdot}L^{-1}$이상의 농도에서 발근율이 크게 저해되는 계통과 거의 영향을 받지 않는 계통이 존재하였다. 또한 이들 형질전환체 계통간 발근율 차이는 전이 유전자 삽입수보다는 삽입 위치에 따른 효과로 보아졌다. 따라서 'McIntosh Wijcik' 품종의 형질전환시 gelrite 고형 재분화 배지내 적정 kanamycin 농도는 $100mg{\cdot}L^{-1}$정도로 판단되며, 형질전환체에 대한 일차적인 간접선발에 적당한 agar 고형 발근배지내 kanamycin 농도는 $30mg{\cdot}L^{-1}$정도인 것으로 판단되었다.