Mesenchymal stem cells (MSCs) are promising candidates for cell therapy and tissue engineering, but their application has been impeded by lack of knowledge of their core biological properties. In order to identify MSC-specific proteins, the hydrophobic protein fraction was individually prepared from two different umbilical cord blood (UCB)-derived MSC populations; these were then subjected to two-dimensional (2D) gel electrophoresis and peptide mass fingerprinting matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)-time of flight (TOF)-mass spectrometry (MS). Although the 2D gel patterns differed somewhat between the two samples, computer-assisted image analysis identified shared protein spots. 35 spots were reliably identified corresponding to 32 different proteins, many of which were chaperones. Based on their primary sub-cellular locations the proteins could be grouped into 6 categories: extracellular, cell surface, endoplasmic reticular, mitochondrial, cytoplasmic and cytoskeletal proteins. This map of the water-insoluble proteome may provide valuable insights into the biology of the cell surface and other compartments of human MSCs.
소형 UV 챔버 내부온도 및 챔버 내 체류시간이 Urethane Acrylate 의 경화속도에 미치는 영향을 조사하였다. UV 램프에 가해지는 Power를 60, 80, 100% 로 조절하여 UV 조사량 (UV dose)를 변경하였고 필름이 지나가는 챔버 내부의 가이드롤 (또는 패턴롤)에 냉각수를 투입하여 롤 자체의 온도에 변화를 주었다. 또한 코팅속도를 조절하여 챔버 내부에서의 체류 시간을 변경시켰는데 이들 조건들이 Urethane Acrylate 의 경화에 어떠한 영향을 미치는지를 알아보기 위하여 경화된 필름의 gel 분율을 측정, 비교하였다. 본 연구를 통해 Power가 증가 할수록 경화기 내부의 온도는 상승 하였으며 냉각수 투입에 따라 경화기 내부의 온도는 감소하였는데 이러한 경화기 내부의 온도변화는 UV 경화에 큰 영향을 미치지 않음을 알 수 있었다. 반면에 코팅속도가 증가할수록 경화필름의 gel 분율은 감소하였는데 이는 충분한 경화를 위해서는 경화기내부에서의 체류시간이 일정 이상이 되어야 함을 의미하였다. 한편, 체류시간에 따른 UV dose 측정 및 UV 램프주변의 열유동 해석을 통하여 램프주변의 온도분포 해석을 시도하였는데 이러한 결과들을 바탕으로 UV 경화기 구조 및 운전 조건이 UV 경화된 제품의 특성에 어떠한 영향을 미치는지 알 수 있었다.
3M KCl을 이용하여 면양 squamous cell carcinoma 및 정상면양 조직(組織)에서 획득(獲得)한 추출액(抽出液)의 성상을 sephadex column chromatography, lymphocyte blastogenicity assay, acid dissociation method 및 gradient polyacrylamide gel electrophoresis 등을 이용하여 연구하였다. Sephadex column chromatography에서 얻은 5개의 종양분획(腫瘍分劃)중 분획(分劃)III은 가장 종양특이(腫瘍特異)한 항원(抗原)을 보유하고, 분획(分劃)V lymphocyte reactivity를 저하(低下)시키는 성분을 함유하고 있었다. 각 분획(分劃)을 분자량(分子量) > 100,000, 10,000~100,000 및 < 10,000의 3군(群)으로 분리한 바 종양특이항원(腫瘍特異抗原) 및 면역저지물질(免疫沮止物質)은 10,000~100,000분획(分劃)에서 나타났다. 분획(分劃)I tumour specific antigen - antibody complex를 내포하고 있음이 밝혀졌다. Gradient gel electrophoresis를 이용하여 분획(分劃)을 더욱 세분했을 때 분획(分劃)III은 Slice No 4~6에서 종양특이물질(腫瘍特異物質)이 인정되었고, 분획(分劃)V Slice No 9~11에서 면역기능저하물질(免疫機能低下物質)이 있음이 밝혀졌다.
전통된장으로부터 안지오텐신전환효소(angiotensin converting enzyme; ACE)를 저해하는 물질을 추출하여 그 구조를 밝혀냈다. ACE 저해물질을 열수추출한 다음 gel permeation chromatography (GPC)를 통하여 ACE 저해작용이 큰 두 개의 큰 획분을 받았다. 앞획분은 90%와 70%의 ACE 저해효과를 나타내었으나 단일물질로 분리되지 않아 계속하여 역상 HPLC를 통하여 순수 분리를 하였다. 그러나 앞획분은 순수분리되지 않아 결국 2차원 전기영동/TLC를 통하여 분리한 결과 분자량이 759.63인 아미노기를 갖고 있는 비펩타이드 물질임이 밝혀졌다. 뒷획분은 다른 조건의 HPLC(reverse column과 $NH_2$, column)를 이용하여 순수분리에 성공하였다. 이중 ACE 저해효과가 큰 물질은 분자량 271.33인 dipeptide인 arginine-proline임을 밝혀냈다. 이물질의 ACE $IC_{50}$은 $92\;{\mu}M$이었다. 본 연구 결과는 대부분 ACE 저해물질이 3개 내지 7개 등의 긴 펩타이드임을 감안할 때, 짧은 dipeptide로 ACE 저해펩타이드가 한국의 전통된장에서 생산할 수 있음을 보여주고 있다.
된장의 맛성분에 크게 기여할 것으로 보이는 펩타이드의 분리를 통해 된장의 수용도를 높이는 자료를 제공하고자 개량식 제조 된장에서 펩타이드의 특성을 연구한 결과 ,된장 숙성중에 단백질의 분해로 생성되는 pe-ptide는 숙성에 따라 그 길이가 짧아져 A.p.L.(average peptide length)는 숙성 0일에 102에서 10일에는 15로 급격히 줄었고 20일에 7.9, 숙성 60일에는 4.9.E, 180일에는 4.1로 나타났다. HPLC로 분리한 펩타이드는 숙성 60일과 180일 분획이 거의 비슷하여 저분자량의 펩타이드는 숙성에 따른 변화가 크지 않음을 알 수 있었고 확인된 저분자량의 펩타이드는 Gly-Glu, Ala-Ser, Glu-ser, Asp-Tyr, Asp-Glu, Glu-Ser-Ala, Asp-Ala-Ser, Ala-ser-Glu, Ala-Lys-Met이었다. 180일 숙성시킨 시료에서 쓴맛 펩타이드의 특성을 알아보기 위해 chloroform-me-thanol에 추출한 '용매추출 분획1'을 겔 크로마토그라피 한 결과 세개의 피크로 나뉘어 졌는데 fraction I과 ll는 쓴맛을 나타내었고 이들의 아마노산 조성은 각각 Glu-(Asp, Pro, Val, lie or Leu)-Met와 Pro-(Glu, Val, Phe)-lie or Leu인 것으로 나타났다. Chloroform-methanol 불용성인 잔사를 물에 녹인 뒤 분자량 1200이하의 것을 투석시켜 얻은 '용매추출 분획2'는 겔크로마토그칵피 결과 다섯개의 피크로 나뉘어 졌고 여기서 쓴맛을 내는 fraction IV, V, Vl의 아미노산 조성은 각각 Glu-(Asp, Ala, Tyr, Leu or lie)-Phe와 hia-(Met, Glu, Ala, Pro)-lie or Leu와 Asp-(Phe, Ser, Gly)-Val이었다.
생지황을 구증구폭하여 제조한 숙지황은 품질관리를 위한 지표물질이 아직 명확히 밝혀져 있지 않다. 생지황, 건지황과 숙지황을 methanol로 추출하고 ether, butanol, 수층으로 용매 분획하고 각 분획별로 TLC로 성분분석한 결과 ether층에서 숙지황의 특이성분이 나타났고, ether층을 증발농축하고 chloroform/methanol을 이동상으로 한 silica gel column으로 분리하고 다시 chloroform/methanol/물(7:1:1)의 preparative TLC로 단리하여 이 성분이 5-(hydroxymethyl)-2-furancarboxaldehyde(5-HMF)임이 규명되었다. 5-HMF는 생지황과 건지황에서는 숙지황에 비해 극히 미량이 존재하였다.
In this work the antioxidant effects of browning reaction products prepared by xylose-tryrtophan reaction system were discussed. The antioxygenic brown pigments were separated by solvent extraction, and column chromatography and isolated by gel filteration. The functional groups of the brown pigments which had antioxidant activity were examined. The brown pigments extracted with methanol showed antioxidant effect and were fractionated in 5portions on DEAE-cellulose column. The elutes with methanol: acetic acid(10:30 v/v sol n(A), methanol: chloroform(95:5 v/v) sol n(C), and chloroform: acetic acid(10:30 v/v) sol n(E) only showed antioxidant activity and their compositions were 22.43, 21.51 and $34.43\%$ respectively. When each fraction on DEAE-cellulose column was reseparated on Sephadex LH-20 column, 2 fractions were obtained from portion A and C respectively. Molecular weights of A, C and E fraction of brown pigments were from 2,600 to 3,700. By elucidation of IR spectra, the pigment fractions which showed a strong antioxidant activity were tearing the indole group. It is suggested that the antioxidant function of the brown pigment is due to hydroxy and amino group. A higher activity of the brown pigment fraction E might be attributed to carboxylic acid or carboxylic ester compounds.
매미나방 종령유층 혈림프내에 존재하는 JHBP을 Dextran Coated Charcoal (DCC)binding assay와 gel filtration에 의해서 확인하였고, JHBP의 pI값은 5.3으로 밝혀졌다. JHBP의 정저는 혈림프단백질을 먼저 PEG로 침전시킨 후 ion exchange chromatography와 gel filtration 방법을 통하여 행하였다. 정체된 fraction의 JH에 대한 binding activity는 [3H] JH-III의 radioactivity 측정과 DCC binding assay를 통해 확인하였고, 정체된 단백질의 순수도는 각 정체단계에 따라 전지영동을 하여 확인하였다.
Purification of the isocitrate lyase extracted from Microbacterium laevaniformans was investigated. The isocitrate lyase was purified 43.6 folds by the following continuous treatment with ammonium sulfate fraction, DEAE-cellulose, DEAE-sephacel and Sephadex G-200 chromatography. The purified isocitrate lyase was showed to be a single protein band by polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the purified isocitrate lyase was estimated 54,000 Da by the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The Km and Vmax values for isocitrate were estimated to be 0.83mM and 0.33units/ml, respectively. Activity of isocitrate lyase was inhibited by cystein-HCl and glutathione.
To investigate the antitumor activity of mugwort (Artemisia princeps Pampan), petroleum ether extract of mugwork was partially purified by a silica gel chromatography. Among several fractions, the fraction which was obtained under the elution with acetone, showed potent cytotoxicity against mouse leukemia cell line(Ll210), human colon cancer cell line (HCT-48) and human hepatoma cell line (Hep G2) , but was less effective with normal cell line(mouse embryo cell). Acetone fraction appeared to be glycolipid by Benedict test and the major fatty acids of the lipid were C16 ; 0 , C 18: 3by GC/MS analysis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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