Lactic acid bacteria that accumulated ${\gamma}-aminobutyric$ acid (GABA) in culture medium were screened to identify strains with high GAB A-producing ability. One strain, MS, which was isolated from kimchi, showed the highest GABA-producing ability among the screened strains. MS was identified as Lactobacillus buchneri based on Gram-staining, metabolic characteristics, and 16S rDNA sequence determination, Optimum culture conditions for GABA production were determined: MRS broth containing 5% MSG, 1% NaCl, and 1% glucose, at an initial pH of 5.0, the incubation temperature at $30^{\circ}C$ for 36 h. Under these conditions, MS produced GABA at a concentration of 251 mM with a 94% GABA conversion rate. Moreover, culture extracts of Lb. buchneri MS partially or completely protected neuronal cells against neurotoxicantinduced cell death.
Succinic semialdehyde dehydrogenase (SSADH) catalyzes the oxidation of succinic semialdehyde (SSA) into succinic acid in the final step of ${\gamma}$-aminobutyric acid degradation. Here, we characterized Bacillus subtilis SSADH (BsSSADH) regarding its cofactor discrimination and substrate inhibition. BsSSADH showed similar values of the catalytic efficiency ($k_{ca}t/K_m$) in both $NAD^+$ and $NADP^+$ as cofactors, and exhibited complete uncompetitive substrate inhibition at higher SSA concentrations. Further analyses of the sequence alignment and homology modeling indicated that the residues of catalytic and cofactor-binding sites in other SSADHs were highly conserved in BsSSADH.
The crystal structure or $\gamma$-hydroxy-$\betha$-aminobutyric acid was determined by MULTAN system with X-ray intensity data on a diffractometer and refined by the least-squares method to an R-value 0.034 for 711 reflections. The crystals were orthorhombic, space group $P2_{1}2_{1}2_{1}$, Z = 4, with a = 10.220, b = 8.257 and c = 6.556$\AA$. The molecule takes the zwitterionic form and skeletal conformation is trans-transform. The molecules are held together by intra-and intermolecular NH-O and OH--O hydrogen bonds.
${\gamma}$-Aminobutyric acid-enriched sea tangle extract was obtained from the fermentation of Lactobacillus brevis BJ-20. The fermented sea tangle extract (FST) was separated into three fractions by molecular weight: FST I (greater than 10 kDa), FST II (1-10 kDa), and FST III (less than 1 kDa). The anti-inflammatory characteristics of the FST fractions were investigated by measuring the production of nitric oxide (NO) and the expression levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in lipopolysaccharide (LPS)-induced mouse macrophage (RAW 264.7) cells. Both NO production and iNOS expression levels were significantly inhibited by FST treatments in a dose-dependent manner. FST III was the most effective inhibitor of processes. This demonstrates that the effect of FST on LPS-induced inflammation might be closely correlated with the inhibition of inflammatory cytokine expression.
In order to understand the biological role of calmodulin in plants, transgenic plants expressing a mutant calmodulin (VU-4, Iys to ile-115) have been analyzed. We found that tobacco plants expressing VU-4 calmodulin have approximately twofold higher $\gamma$-aminobutyric acid (GABA) levels than the control plants. Cell suspension cultures established from the stem explants of the transgenic tobacco seedlings also have higher levels of GABA than the control cell cultures. Specific activity of glutamate decarboxylase (GAD), which catalyzes the decarboxylation of glutamate to $CO_2$ and GABA, of the transgenic tobacco cell extracts was about twofold higher than the activity of the control cell extracts. Western-blot analysis showed that the GAD is highly expressed in the transgenic tobacco plants. GAD partially purified from tobacco cell extracts showed approximately threefold $Ca^{2+}$/calmodulin-dependent activation. These data suggest that GABA synthesis in the transgenic tobacco plants is elevated, possibly due to higher levels of the calmodulin-dependent GAD enzyme and/or as a result of enhanced activation due to increased levels of the foreign calmodulin.
This study was done to produce ${\gamma}$-aminobutyric acid (GABA) from wild yeast as well as investigate its anti-hyperglycemic effects. Among ten GABA-producing yeast strains, Pichia silvicola UL6-1 and Sporobolomyces carnicolor 402-JB-1 produced high GABA concentration of $134.4{\mu}g/mL$ and $179.2{\mu}g/mL$, respectively. P. silvicola UL6-1 showed a maximum GABA yield of $136.5{\mu}g/mL$ and $200.8{\mu}g/mL$ from S. carnicolor 402-JB-1 when they were cultured for 30 hr at $30^{\circ}C$ in yeast extract-peptone-dextrose medium. The cell-free extract from P. silvicola UL6-1 and S. carnicolor 402-JB-1 showed very high anti-hyperglycemic ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity of 72.3% and 69.9%, respectively. Additionally, their cell-free extract-containing GABA showed the anti-hyperglycemic effect in streptozotocin-induced diabetic Sprague-Dawley rats.
Son, Sang Jae;Yu, Gwang Sig;Choe, Yun Hui;Kim, Youn-Joong;Lee, Eunji;Park, Jong-Sang;Choi, Joon Sig
Bulletin of the Korean Chemical Society
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v.34
no.2
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pp.579-584
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2013
In this study, we synthesized functional dendrimer derivatives as nonviral gene delivery vectors. Poly(amidoamine) dendrimer (PAMAM, generation 4) was modified to possess functional amino acids to enhance gene transfection efficiency. PAMAM G4 derivatives conjugated with L-arginine (Arg) and ${\gamma}$-aminobutyric acid (GABA) showed higher transfection efficiency and lower cytotoxicity compared to the native PAMAM G4 dendrimer. The polyplex of the PAMAM G4 derivative/pDNA was evaluated using an agarose gel retardation assay and Picogreen reagent assay. Additionally, the MTT assay was performed to examine the cytotoxicity of synthesized polymers. All PAMAM G4 derivatives showed lower cytotoxicity than PEI25kD. Particularly, PAMAM G4-GABA-Arg displayed enhanced transfection efficiency compared to the native PAMAM G4 dendrimer.
Choi, Se Mi;Kim, Jeong A;Kim, Geun Su;Kwon, Do Young;Kim, Sang Gu;Lee, Sang yun;Lee, Kang Wook
Journal of Food Hygiene and Safety
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v.37
no.1
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pp.21-28
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2022
In this study, a new lactic acid bacterium (LAB) that could produce gamma-aminobutyric acid (GABA) was isolated from Oenanthe javanica (water celery) and identified as an Enteroccoccus casseliflavus strain. Until recently, there have been many studies on the gamma-aminobutyric acid producing lactic acid bacterium, as well as on some lactic acid bacterium in Enteroococcs genus, but none on the species E. casseliflavus. Therefore, in the purpose of finding the optimal conditions for GABA production of E. casseliflavus PL05, the effects of several conditions including the type of mediums, growth temperatures, initial pH, growth time, L-mono sodium glutamate (MSG) concentration, and carbon source were tested. The study revealed that the PL05 strain grew better in the Brain Heart Infusion (BHI) medium than in the Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) or Tryptic Soy Broth (TSB) medium. Also, similar results were obtained with GABA production conditions. As a result of analysis on the GABA production yield by concentration of MSG, a GABA substrate, the highest production was found at 7% of MSG concentration. However, since similar level of production was found at 5%, it is considered to be more efficient to use 5% MSG concentration. The analysis on the growth and GABA production yield by carbon sources showed the highest results when maltose was used. From the final test under the optimal conditions found, 140.06±0.71 mM of GABA was produced over 24 hours with the conversion rate of 78.95%. Lastly, from the sensitivity analysis on the 10 different antibiotics, including vancomycin, it was found that there were not confirmed cases of resistance.
In our study, lactic acid bacteria (LAB)-fermented whey solutions were applied in the soybean soaking process to minimize bacterial contamination and to enrich the biologically functional components of isoflavone and $\gamma$-aminobutyric acid (GABA). Among the 11 LAB tested, Bifidobacteria infantis and a mixed culture (Lactobacillus acidophilus, Bifidobacteria lactis, and Streptococcus thermophilus; ABT-3) displaying the greatest $\beta$-glucosidase activity were selected to produce improved biologically functional soybean preparations. In the soybean soaking processing (without water spraying), the LAB-cultured 10% whey solution was used to soak and to ferment the soybeans and the fermented soybeans were finally dried by heat-blowing at $55^{\circ}C$. The processing conditions used in this study demonstrated that the final soybean product had a reduced contamination by aerobic and coliform bacteria, compared to raw soybeans, likely due to the decrease in pH during LAB fermentation. The aglycone content of the isoflavone increased up to 44.6 mg per 100 g of dried soybean by the processing method, or approximately 8-9 times as much as their initial content. The GABA contents in the processed samples increased as the processing time of soaking-fermentation proceeded as well. The soybean sample that fermented by ABT-3 culture for 24 hr showed the greatest increase in GABA content (23.95 to 97.79 mg/100 g), probably as a result of the activity of glutamate decarboxylases (GAD) released from the soybean or produced by LAB during the soaking process.
Dominant lactic acid bacteria (LAB) strains were isolated from traditional fermented foods to obtain rare ${\gamma}$-aminobutyric acid (GABA)-producing LAB. Out of 147 isolates, 23 strains that could produce GABA with 1% (w/v) L-monosodium glutamate (MSG) were first isolated. After further screening of these rare GABA-producing LAB by analysis of the glutamate decarboxylase and 16S rRNA gene sequences, Enterococcus faecium JK29 was isolated, and 1.56 mM of GABA was produced after 48 h cultivation in basic de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) medium. To enhance GABA production by E. faecium JK29, the culture conditions were optimized. When E. faecium JK29 was cultivated in optimized MRS medium containing 0.5% (w/v) sucrose and 2% (w/v) yeast extract with 0.5% (w/v) MSG, GABA production reached 14.86 mM after 48 h cultivation at initial conditions of pH 7.5 and $30^{\circ}C$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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