국내에서 식용으로 유통 및 판매가 가능한 7종의 곤충 중 누에(Bombyx mori), 갈색거저리(Tenebrio molitor) 유충, 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis) 유충, 쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus)의 4종을 대상으로 단백질을 분리하고, 유청 단백질과 비교하여 항산화 및 영양 특성을 분석하였다. 원물시료에서 분리한 단백질의 수율은 65.0-75.0%로 나타났다. 각 단백질의 아미노산을 분석한 결과, 모든 곤충 시료에서 필수 아미노산인 Phe, Trp은 유청 단백질보다 높은 함량을 보였다. 근육생성에 도움이 되는 세 종류의 BCAA아미노산 중 Val은 모든 곤충단백질에서 유청단백과 유사한 함량을 보였으며, BCAA함량은 곤충분리단백질 중 쌍별 귀뚜라미와 갈색거저리 유충에서 그 함량이 각각 16.8과 16.4%로 가장 높아 유청단백(22.2-23%)의 73-76% 수준인 것으로 나타났다. 곤충 단백질의 총 폴리페놀함량은 유청단백보다 유의적으로 많았으며 곤충단백중에는 누에의 함량이 유의적으로 낮게 측정되었다. 항산화활성 또한 곤충단백이 유청단백보다 유의적으로 높았으며, 특히 갈색거저리 유충에서의 활성이 가장 높게 측정되었다. 관능검사결과에서는 시판 단백질파우더와 동일한 조성으로 제조했을 경우, 유청단백의 25%의 대체가 가능할 것으로 보이나 맛과 향이 대조군에 비해 많이 떨어지므로 보완할 필요가 있다. 곤충단백질은 유청단백질에 비해 BCAA함량은 다소 낮았지만 폴리페놀 함량이 높고 항산화활성이 있으므로 아미노산 조성을 참고하여 특정목적 단백질 제품으로 사용될 가능성이 높음이 확인되었다.
The seasonal variation in the proximate composition, pH, and glycogen contents of oysters Crassostrea gigas collected in Geoje and Jaran Bays on the southern coast of Korea was studied between March 2012 and February 2013. In the Geoje Bay oysters, the moisture content was 77.49-81.50 g/100 g, lipids ranged between 1.22 and 2.47 g/100 g, proteins between 9.46 and 13.11 g/100 g, and ash between 1.88 and 2.58 g/100 g. In the Jaran Bay oysters, the moisture content was 74.22-82.05 g/100 g, lipids comprised 1.32-2.37 g/100 g, proteins 9.19-13.35 g/100 g, and ash 1.96-2.45 g/100 g. The moisture content was highest in October and January in Geoje and Jaran Bay, respectively, and tended to increase from July until September. The highest protein levels occurred in August in both bays, which coincided with the timing of oocyte maturation, and then decreased at the beginning of total spawning. The highest lipid levels occurred in April in Geoje Bay, and February in Jaran Bay. The glycogen content was 0.40-2.28 g/100 g in Geoje Bay, and 0.61-3.53 g/100 g in Jaran Bay, and was highest in February and decreased from March onwards. The lowest glycogen content occurred in September and then increased from October onwards. The pH ranged between 6.29 and 6.48, and 6.32 and 6.59, for Geoje and Jaran Bay, respectively, and was highest in February.
Superoxide dismutase (SOD) is physiologically important in regulating cellular homeostasis and apoptotic cell death, and its mutations are the cause of familial amyotrophic lateral sclerosis (FALS). Mitochondrial serine protease HtrA2 has a pro-apoptotic function and has known to be associated with neurodegenerative disorders. To investigate the relationship between genes associated with apoptotic cell death, such as HtrA2 and SOD1, we utilized the pGEX expression system to develop a simple and rapid method for purifying wild-type and ALS-associated mutant SOD1 proteins in a suitable form for biochemical studies. We purified SOD1 and SOD1 (G93A) proteins to approximately 90% purity with relatively high yields (3 mg per liter of culture). Consistent with the result in mammalian cells, SOD1 (G93A) was more insoluble than wild-type SOD1 in E. coli, indicating that research on the aggregate formation of SOD1 may be possible using this pGEX expression system in E. coli. We investigated the HtrA2 serine protease activity on SOD1 to assess the relationship between two proteins. Not only wild-type SOD1 but also ALS-associated mutant SOD1 (G93A) were cleaved by HtrA2, resulting in the production of the 19 kDa and 21 kDa fragments that were specific for anti-SOD1 antibody. Using protein gel electrophoresis and immunoblot assay, we compared the relative molecular masses of thrombin-cleaved GST-SOD1 and HtrA2-cleaved SOD1 fragments and can predict that the HtrA2-cleavage sites within SOD1 are the peptide bonds between leucine 9-lysine 10 (L9-K10) and glutamine 23-lysine 24 (Q23-K24). Our study indicates that SOD1 is one of the substrate for HtrA2, suggesting that both HtrA2 and SOD1 may be important for modulating the HtrA2-SOD1-mediated apopotic cell death that is associated with the pathogenesis of neurodegenerative disorder.
국내 우점종인 노랑털깔따구(Chironomus flaviplumus) 성충의 조항원을 제조하여 IgE 항체에 관여하는 주 항원 단백질을 찾아내고자 본 연구를 수행하였다 노랑털깔따구 성충의 조항원을 마우스에 $1{\;}\mu\textrm{g}$과 $10{\;}\mu\textrm{g}$으로 각각 3회씩 면역시킨 결과 ELISA와 PCA 반응시험에서 모두 $1{\;}\mu\textrm{g}$ 면 역군 중 9주째 얻은 혈청에서 가장 높은 깔따구-특이-IgE 항체를 얻을 수 있었다. 노랑털깔따구 성충의 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동하여 16-18개의 단백질 구획을 얻었고 이를 chemiluminescent substrate를 이용하여 면역이적법을 시행한 결과 65 kDa에서 강한 단백질 구획이 52 35 및 25 kDa에서 약한 단백질 구획이 관찰되었다. 깔따구 조항원을 전기영동한 겔을 30개 절편으로 절단하여 추출한 각각의 단백질 분획을 P-K 피부반응검사한 결과, 65, 52 및 35 kDa 부위에서 강한 양성반응을 보여 항원성이 확인되었고, 25 kDa 부위에서는 약한 반응을 보였다. 면역이적법에서 관찰하지 못한 15 kDa 부위의 단백질에서도 높은 P-Ktiter값을 보여 15 kDa 단백질도 항원성이 있음을 알 수 있었다. 이상의 결과에서 국내 우점종인 노랑털깔따구 성충이 알레르기 질환의 원인 항원으로 작용하며 주항원 단백질은 15, 35, 52 및 65 kDa의 4개이고 이중 65 kDa 단백질이 가장 강한 allergen으로 관찰되었다.
Human chorionic gonadotropin hormone(H.C.G.) is secreted from the villus tissues of the placenta and excreted in lange amount into the urine. Its isolation is chiefly made from the urine of a pregnant woman. Recently, Matsushima attempted isolation of H.C.G. directly from the placenta itself. In order to prepare H.C.G. from human placenta, general method of extractiag and purifying proteins was applied. Its way was as follow: Crude H.C.G. was extracted from placenta with pH 9.0 and pH 5.0 aqua ammonia, and purified with pH 8.0 ammonia and 50% ethanol at pH 4.8. The purified H.C.G. showed two moving bands on the anode by paper electrophoresis. On the other hand, the H.C.G. from pregnancy urine (Standard. Pharm. Co.) showed same two bands but their moving ratio were different. The purified H.C.G. showed gonadotropin effect when it was injected young fomale rats 40r/cc per day for 5 days and weighted the increased ovary weight.
Germanium (Ge) content in Zingiberis Rhizoma was determined by flameless atomic absorption spectrometry with a graphite tube atomizer. The Ge content of the cortical layer was 65.mu.g/g, the central cylinder, $98\mu$g/g and the total, $87\mu$g/g. In the effect of the extraction of Ge by various solvents, polar solvent was more effective than the nonpolar one, Especially, water was the most effective solvent. The water extract of Zingiberis Rhizoma, separated by sephadex G-25 gel filtration, was fractionated into 2 peaks at 254nm. Both the peaks showed atomic absorptions of Ge. It may be concluded that the Ge components of Zingiberis Rbizoma exist as the form of an aqueous organic compounds or associated forms with proteins.
A varient strain of budding yeast, Hansenula anomala B-7 which had been identified to be highly resistant to cadmium ions, were observed by transmission electron microscopy. It was shown that the cells accumulated excess amounts of cadmium ions throughout inside the cell rather than on the cell surface. The cell growth in response to cadmium or heat shock stress has also been investigated. It was observed that the cells precultured in the presence of 500 $\mu$ g/ml of Cd ions grew slower than those precultured at 1, 000 $\mu$ g/ml of the metal ions, when they were cultivated in the media containing 1, 000 $\mu$g/ml of the metal ions. Heat shock, however, stimulated the cell growth transiently, when the cells were allowed to grow in the presence of 1, 000 $\mu$g/ml of the metal ions. But the cells given heat shock for more than 100 min received permanent damage to growth. Effects of both stresses on budding rate was also examined. It revealed that the stresses did not change the budding ratio much, which was contradictory to that observed from the same budding yeast, Saccharomyces cerevisiae. Furthermore, the cells treated with 1, 000 $\mu$g/ml of the metal ions not only induced, but also switched off the expression of several new proteins. Some of the cadmium stress-inducible proteins were estimated to be also induced by heat shock stress.
This study was designed to elucidate the synergistic cytotoxic mechanisms of the co-treatment of adriamycin and Paljinhangahm-dan in human hepatoma malignant cancer cell line, HepG2. The combination of adriamycin and the ethanol extract of Paljinhangahm-dan synergistically augmented the cytotoxicity of Adriamycin and Paljinhangahm-dan in HepG2 cells. The cytotoxicity of two drugs was revealed as apoptosis characterized by DNA fragmentaton in agarose gel electrophoresis. The apoptotic cytotoxicity of adriamycin and Paljinhangahm-dan was accompanied by the cleavage of procaspase -3 protease and PARP. Of note, anti apoptotic Bcl2 protein was obviously decreased, but Fas was dramatically increased in HepG2 cells co-treated with Adriamycin and Paljinhangahm -dan. In addition, through 2-D gel electorphoresis, we observed that the expression levels of a lot of proteins were obviously changed by the status of drug treatments. This results suggest that the synergistic cytotoxicity of the co-treatment of adriamycin and Paljinhangahm-dan might be caused by the changes of the expression levels of a lot of proteins which play pivotal roles in cell survival or death.
본 연구에서는 항암효과를 가진 성분을 포함하여 여러 다양한 생리활성 물질을 함유하고 있을 것으로 기대되는 노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceus)을 이용하여 암세포 성장저해효과와 세포주기 조절자인 cyclin 단백질의 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 노루궁뎅이 버섯의 메탄을 추출물과 그 분획물들의 사람의 암세포주인 HT29와 HepG2에 대한 성장 저해 효과를 MTT assay로 검토한 결과 노루궁뎅이 버섯의 메탄을 추출물과 헥산, 클로로포름 그리고 에틸아세테이트 분획물들이 높은 암세포 성장 저해 효과를 나타내었으며 농도 의존적인 경향을 보였다. 그러나 사람의 정상 간세포인 Chang cell에서는 세포독성이 나타나지 않았다 그리고 노루궁뎅이 버섯 메탄올추출물이 간암 세포주인 HepG2의 cyclin 단백질 발현에 미치는 영향을 조사한 결과 노루궁뎅이 버섯 메탄을 추출물이 cyclin A와 D 단백질 발현을 다소 감소시켰으며 특히 cyclin B1에 대한 효과가 더욱 크게 나타나 1 mg/mL 농도에서 48시간 처리 하였을 때 대조군에 비해 30% 정도까지 단백질 발현이 감소하였다. 이러한 결과로 노루궁뎅이 버섯은 세포주기 중 G2기에서 M기로의 전환에 관여하는 cyclin B1 단백질의 발현을 크게 감소시키므로 세포주기 진행을 차단시켜 간암세포의 증식을 억제시키는 것으로 사료된다.
Korean red pine (Pinus densiflora) bark extract, PineXol (PX), was investigated for its potential antioxidant and anti-inflammation effects in vitro. It was hypothesized that PX treatment ($25-150{\mu}g/ml$) would reduce the lipid synthesis in HepG2 hepatocytes as well as lipid accumulation in 3T3-L1 adipocytes. Hepatocytes' intracellular triglycerides and cholesterol were decreased in the PX $150{\mu}g/ml$ treatment group compared with the control (p < 0.05). Consequently, de novo lipogenic proteins (acetyl-CoA carboxylase 1, stearoyl-CoA desaturase 1, elongase of very long chain fatty acids 6, glycerol-3-phosphate acyltransferase 1, and sterol regulatory element-binding protein 1) were significantly decreased in hepatocytes by PX $150{\mu}g/ml$ treatment compared with the control (p < 0.05). In differentiated 3T3-L1 adipocytes, the lipid accumulation was significantly attenuated by all PX treatments (p < 0.01). Regulators of adipogenesis, including CCAAT-enhancer-binding proteins alpha, peroxisome proliferatoractivated receptor gamma, and perilipin, were decreased in PX $100{\mu}g/ml$ treatment compared with the control (p < 0.05). In conclusion, PX might have anti-obesity effects by blocking hepatic lipogenesis and by inhibiting adipogenesis in adipocytes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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