Purpose: Vascular endothelial growth factor (VEGF) is known as a growth factor of endothelium and fibroblast. The purpose is to know the VEGF effects on fibroblast proliferation and fibroblast's notch receptor expression. Methods: CCD-986sk fibroblast was purchased from the Korean Cell Bank and was used in XTT assay for proliferation and wound healing assay for migration. Immunofluorescent (IF) staining and western blotting were used in testing notch expression of fibroblast. Semiquantitative RT-PCR was used in checking notch 1 mRNA production by fibroblast. Student-t test was used for analyzing results. Results: Cell proliferation assay using XTT showed significant higher proliferation in VEGF treated fibroblast, $2.324{\pm}0.0026$ vs. $2.463{\pm}0.017$ (p=0.002). Wound healing assay showed longer migration in VEGF treated fibroblast (p=0.062). The fluorescence was brighter in VEGF treated cells of notch 1 IF staining. Notch 1 expressions and mRNA productions increased more in VEGF treated cells. Conclusion: VEGF stimulates fibroblast to proliferate, migrate and to express Notch 1 simultaneously. Notch receptor could be related to VEGF mediated wound healing.
Objectives: This study was performed to elucidate the effects of Kanghwalsokdan-tang extract(KS) on hyper-plasy of collagen and cell damage in UVB-irradiated dermal fibroblast. Methods: To demonstrate the effects of KS on wound healing we used human dermal fibroblast(F6). We evaluated the amount of increased PICP, TIMP-1 in dermal fibroblast. PICP, TIMP-1 concentration was measured using EIA kit. Also, we measured the nitrite production, and LDH release in UVB-irradiated dermal fibroblast to elucidate the action-mechanism of KS. Results: 1. KS decreased the cell proliferation of dermal fibroblast. 2. KS decreased the biosynthesis of collagen in dermal fibroblast. 3. KS decreased the synthesis of TIMP-1 in dermal fibroblast. 4. KS had no effect on the LDH-release of UVB-irradiated dermal fibroblast. 5. KS inhibited nitrite production in UVB-irradiated dermal fibroblast. Conclusions: From the results, we concluded that KS has a protective effect on wound healing and photoaging.
Objectives: This study was performed to elucidate the effects of Danchisoyo-san (DS) on cell damage and gene expression in UVB-exposed dermal fibroblast. Methods: To demonstrate the inhibitory effects of DS on aging of the skin, we used human dermal fibroblast(F6) and UVB light(30 mJ/$cm^2$) was used to damage to dermal fibroblast. We measured the nitrite production, LDH release, and gene expression in UVB-irradiated dermal fibroblast to elucidate the actionmechanism of DS. Also, we evaluated the amount of increased PICP, TIMP-1 in dermal fibroblast. PICP, TIMP-1 concentration was measured using EIA kit, and gene expression (MMP-1, procollagen, c-fos, c-jun, NF-kB, Bcl-2, Bcl-xL, iNOS) were determined using real-time PCR. Results: 1. DS inhibited LDH-release, nitrite production in UVB-irradiated dermal fibroblast. 2. DS suppressed the gene expression of MMP-1 in UVB-irradiated dermal fibroblast. 3. DS increased the gene expression of procollagen in UVB-iradiated dermal fibroblast. 4. DS suppressed the gene expression of c-jun, c-fos, NF-kB, iNOS in UVBirradiated dermal fibroblast. 5. DS increased the gene expression of Bcl-2 in UVB-iradiated dermal fibroblast. 6. DS increased the cell proliferation of dermal fibroblast. Conclusions: From the results, we concluded DS increases the cell proliferation and collagen synthesis in dermal fibroblast. So we suggest that DS has the antiwrinkle effects.
Je, Yun-Mo;Yoo, Jeong-Eun;Choi, Kyung-Hee;Lim, Hyun-Jung;Yoo, Dong-Youl
The Journal of Korean Obstetrics and Gynecology
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v.24
no.4
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pp.10-19
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2011
Objectives: This study was performed to elucidate the effects of Kwibi-tang extract(KB) on dermal fibroblast. Methods: To demonstrate the effects of KB on dermal fibroblast, we used human dermal fibroblast(F6) and UVB light(30 $mJ/cm^2$) was used to damage to dermal fibroblast. we measured the nitrite production, LDH release in UVB-irradiated dermal fibroblast to elucidate the action-mechanism of KB. Also, we evaluated cell proliferation of dermal fibroblast and the amount of increased PICP, TIMP-1 in dermal fibroblast. Results: 1. KB decreased the cell proliferation of F6 dermal fibroblast in concentration of 50 ${\mu}g/ml$. 2. KB decreased the synthesis of PICP in concentration of 50 ${\mu}g/ml$. 3. KB decreased the synthesis of TIMP-1 in concentration of 50 ${\mu}g/ml$. 4. KB have no effect on the damage in UVB-irradiated F6 dermal fibroblast. Conclusions: From the results, we concluded KB decreases the cell proliferation and collagen synthesis in dermal fibroblast. So we suggest that KB has the anti-hyperplasy of dermal fibroblast.
For somatic cell nuclear transfer in Hanwoo, fetal fibroblast cell lines were established from 35, 50, 70 and 90-day fetuses of Korean native cattle. The sex of these fetal fibroblast cells were analyzed by PCR using Y-specific primers and confirmed that two cell lines were female and the other two cell lines were male. Karyotyping of these cell lines indicates that the chromosome numbers of fetal fibroblast cells were not affected by passage number and more than 80% of fetal fibroblast cells have normal chromosome number. To evaluate Go stage in cell cycle of fetal fibroblast cells, Western blotting was performed to detect the expression level of PCNA which is known to be expressed in all cell cycle stages except G$_{0}$ stage. Following serum starvation or confluent culture for 7 days, fetal fibroblast cells were effectively reached to G$_{0}$ stage. The cell cycle was resumed after culture of these Go stage-fetal fibroblast cells with normal medium. These results indicates that fetal fibroblast cells originated from Hanwoo were successfully isolated and culture system and induction of cell cycle of these cells were established for somatic cell nuclear transfer in Hanwoo.woo.
In this study, ultrastructural change of the bile duct fibroblast at infected rat with Clonorchis sinensis, and the distribution of lectin receptors and actin protein in cultured bile duct infected with Clonorchis sinensis. It explored using colloidal gold label complex with lectin WGA purified from wheat germ (Triticum vulgaris) and anti actin antibody purified actin (43 kDa) isolated from chicken back muscle. The lectin WGA with protein A gold complex labeled sections of the cultured fibroblast revealed gold particles specifically distributed on the multi vesicular form Golgi complex and cell surface of the fibroblast. The actin antibody with protein A gold complex labeled sections of the cultured fibroblast revealed gold particles specifically distributed on the cytoplasm of the fibroblast. Labeling of cultured fibroblast in rat bile duct infected with Clonorchis sinensis was then quantified and compared to that of cultured Fibroblast in Rat Bile duct. These results indicate that lectin WGA receptors are located in the multi vesicular form Golgi complex in the cytoplasm to the cytoplasmic process of the Rat bile duct fibroblast infected with Clonorchis sinensis. Therefore, the GlcNAc and NeuNac regions on the cell surface and cytoplasmic process appear to be functionally associated with cell-recognition and protection from other cell of the tissue, and linked with secretion and exocytosis of the fibroblst cytoplasm. GlcNAc and NeuNAc product in the multi vesicular form Golgi complex then it is transported to cell surface. Actin protein is many appears that infected fibroblast rather than normal fibroblast. The fibroblast of infected with Clonorchis sinensis are against of the physical and chemical stimulation. Then development of cytoplasmic process is relative some stimulation.
Variations in physical toughness between muscles and animals are a function of growth rate and extend of collagen type I and III. The current study was designed to investigate the ability of growth rate, collagen concentration, collagen synthesizing and degrading genes on two different fibroblast cells derived from Hanwoo m. longissimus dorsi (LD) and semimembranosus (SM) muscles. Fibroblast cell survival time was determined for understanding about the characteristics of proliferation rate between the two fibroblasts. We examined the collagen concentration and protein expression of collagen type I and III between the two fibroblasts. The mRNA expression of collagen synthesis and collagen degrading genes to elucidate the molecular mechanisms on toughness and tenderness through collagen production between the two fibroblast cells. From our results the growth rate, collagen content and protein expression of collagen type I and III were significantly higher in SM than LD muscle fibroblast. The mRNA expressions of collagen synthesized genes were increased whereas the collagen degrading genes were decreased in SM than LD muscle. Results from confocal microscopical investigation showed increased fluorescence of collagen type I and III appearing stronger in SM than LD muscle fibroblast. These results implied that the locomotion muscle had higher fibroblast growth rate, leads to produce more collagen, and cause tougher than positional muscle. This in vitro study mirrored that background toughness of various muscles in live animal is likely associated with fibroblast growth pattern, collagen synthesis and its gene expression.
The use of basic fibroblast growth factor which function as potent biologic mediators regulating numerous activities of wound healing has been suggested for the promotion of periodontal regeneration. The mitogenic effects of basic fibroblast growth factor on human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts were evaluated by determining the incorporation of 5-Bromo-2'deoxy-uridine into DNA of the cells in a dose -dependent manner. The cells which were prepared were the primary cultured gingival fibroblasts and periodontal ligament cells from human the fourth or sixth subpassages were used in the experiments. The cells which were seeded DMEM contain 10% FBS. The added concentrations of basic fibroblast growth factor were 0.1, 1, 10, 50, $l00{\eta}g/ml$ and basic fibroblast growth factor were added to the quiescent cells for 24 hours, 48 hours and 72 hours. They were labeled with $10{\mu}l/200{\mu}l$ 5Bromo-2'-deoxy-uridine for the last 6 hours of each culture. The results of the five determinants were presented as mean and S.D.. The results were as follows. : The DNA synthetic activity of human gingival fibroblasts was increased dose dependently by basic fibroblast growth factor at 24 hours, 48 hours and 72 hours. The similar mitogenic effects were at the 24 and 48 hours of basic fibroblast growth factor, but the DNA synthetic activity of human gingival fibroblasts generally decreased at 72 hours. The DNA synthetic activity of human periodontal ligament cells was increased dose dependently to $50{\eta}g/ml$ by basic fibroblast growth factor at 24, 48 and 72 hours, but the DNA synthetic activity decreased at $l00{\eta}g/ml$ of each hour. Generally the maximum mitogenic effects were at the 48 hours application of basic fibroblast growth factor. The DNA synthetic activity of human periodontal ligament cells generally decreased lower at 72 hours than at 24, 48 hours the application of basic fibroblast growth factor. In the comparison of DNA synthetic activity between human gingival fibroblasts and human periodontal ligament cells, human periodontal ligament cells had slightly higher proliferation activity than human gingival fibroblasts for a longer time at the high dosage of the basic fibroblast growth factor.In conclusion, basic fibroblast growth factor have important roles in the stimulation of DNA synthesis in human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts, and thus may be useful for clinical applications in periodontal regenerative procedures.
Porphyromonas endodontalis(P. endodontalis) is one of the important causative bacteria of pulpal and periapical disease. P. endodontalis has lipopolysaccharide(LPS) and it plays a major role in stimulating the synthesis and release of cytokines from immune cells and prostaglandin $E_2$ from host cells. The purpose of this study is to prepare LPS from P. endodontalis and to evaluate the effect of LPS on membrane permeability of fibroblast. P. endodontalis ATCC 35406 was cultured in anaerobic condition, and LPS was extracted. LPS was confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Human periodontal ligament cell, colon fibroblast(CCD-18Co, KCLB 21459) and skin fibroblast(Detroit 551, KCLB 10110) were perfused with 0.01% P. endodontalis LPS solution, high concentration of $K^+$ solution and $Ca^{2+}$-free solution, $Ca^{2+}$ concentration ratio was measured by microfluorometry. 1. Intracellular $Ca^{2+}$ concentration was not changed in human periodontal fibroblast and skin fibroblast(Detroit 551) stimulated by P. endodontalis LPS. 2. Intracellular $Ca^{2+}$ concentration was increased in colon fibroblast(CCD-18Co) stimulated by P. endodontalis LPS. 3. Colon fibroblast(CCD-18Co) has voltage dependent $Ca^{2+}$ channel activated by high concentration of $K^+$ solution. 4. P. endodontalis LPS has no effect on the increase of intracellular $Ca^{2+}$ concentration during perfusion of $Ca^{2+}$-free solution.
Kwon, Soon Sung;Oh, Myung June;Lee, Jin Hee;Park, Jong Lim;Chang, Hak;Minn, Kyung Won
Archives of Plastic Surgery
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v.34
no.4
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pp.420-425
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2007
Purpose:The mechanism of scar formation is not fully understood. Fibroblast is an important cell in wound healing process. We experienced a patient who was taking progesterone orally. Upper blepharoplasty was performed on her but, wound healing was delayed. We hypothesized that progesterone was the cause of delayed wound healing and fibroblast proliferation inhibition. We investigated the effect of progesterone in vitro on human dermal fibroblasts to study the effects on fibroblast proliferation. Methods: Human dermal fibroblasts from four persons were cultured initially. Progesterone is mixed to them at various concentrations, and fibroblast cell count was measured by MTT assay method at 570 nm. We confirmed that progesterone has some inhibitory effect on fibroblast proliferation and maximal inhibitory concentration of progesterone was determined. Then fibroblasts from a total of nineteen persons were cultured and the effects of progesterone were studied. Results: The initial study showed the maximal inhibitory concentration of progesterone to be $50{\mu}g/ml$. The main study showed that progesterone had 70.9% inhibitory effect on human dermal fibroblast in vitro. Conclusion: Progesterone has inhibitory effect on cultured human dermal fibroblast proliferation in vitro.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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