Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.4
no.2
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pp.71-75
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1996
A bacterium, capable of the degradation of trimethylamine(TMA), dimethylamine, and methylamine, was isolated from an enrichment culture on TMA basal mineral medium. The isolate was identified as Methylobacterium some carbon-carbon bonds compounds like malate, succinate, betaine. When the strain was immobilized to earthworm cast, the biofilter could remove the gaseous TMA of SV $30h^{-1}$, concentration of 120ppm, continuously.
For poly- $\beta$ -hydroxybutyrate (PHB) production, a pink-pigmented facultative methylotrophic bacterium (PPFM) P-10 was newly isolated from soils through methanol-enrichment culture. The optimal medium composition for cell growth was 1.0% (vlv) of methanol as carbon source and l.Og/l of ,TEX>$NH_4Cl$, equivalent to C/N ratio of 13.2 at pH 7.0 and $30^{\circ}C$. To investigate the optimal condition for YHB accumulation, two-stage culture technique was adopted; first stage for cell growth and second stage for accumulation of PHB providing unbalanced growth conditions. The optimal PHB accumulation was 1.0% (vIv) of methanol and 0.26gll of $NH_4Cl$, C/N of 50.8 at pH 6.0. To overcome methanol inhibition on cell growth, intermittent feeding fed-batch culture technique was employed, and the cell concentration as high as 14gll with 40% of PHB was achieved. The purified PHB was identified using IR and $1^H NMR$ as homopolymer of 8hydroxybutyric acid. The absorption spectrum of extracted pink colored microbial pigment was alsa investigated.
값이 저렴한 메탈올로부터 새로운 고점도성 생물고분자인 다당류의 생산과 활용은 산업적으로도 매우 흥미있는 분야이다. 본고에서는 최근 본 연구실에서 개발한 메탄올 자화세균(facultative methylotroph)인 Methylobacterium organophilum이 생산하는 신규의 고점성 다당류인 메틸란(methylan)의 생산 및 그 특성과 응용에 관하여 고찰하고자 한다.
The role of soil microorganisms, specifically rhizobacteria, in the development of rhizoremediation techniques is important to speed up the process and to increase the rate of mobilization or absorption of heavy metals to the plant. In this study, Methylobacterium sp. SY-NiR1 was isolated from the rhizosphere soils of plants in oil and heavy metal-contaminated soil. Based on its pink pigmented colony, rod-shape cells, and belonging in $\alpha-Proteobacteria$, Methylobacterium sp. SY-NiR1 is considered a pink-pigmented facultative methylotroph. SY-NiR1 had the ability to produce indole acetic acid which is one of phytohormones. This bacterium showed resistance against multiple heavy metals such as Cd, Cr, Cu, Pb, Ni, Zn, and the order of its resistance based on $EC_{50}$ was Zn > Ni > Cu > Pb > Cd > Cr. Therefore, Methylobacterium sp. SY-NiR1 can stimulate seed germination and plant growth in soil contaminated with heavy metals.
A restricted facultatively methanol-oxidizing bacterium, Methylovorus sp. strain SS1, was isolate dfrom soil samples from Kuala Lumpur, Malaysia, through methanol-enrichment culture technique. The isolate was nonmotile Gram-negative rod and did not have complex internal membrane system. The colonies were small, pale-yellow, and raised convex with entire margin. The cell did not produce any spores and capsular materials. The cell was obligately aerobic and exhibited catalase, but no oxidase, activity. Plasmid, carotenoid pigment, and poly-.betha.-hydroxybutyric acid were not found. The guanine plus cytosine content of the DNA was 55%. The isolate was found to grow only on methanol methylamine, or glucose. Growth factors were not required. Cells growing on methanol was found to produce extracellular polysaccharides containing glucose, lactose, and fructose. Growth was optimal (t$_{d}$= 1.7) with 0.5%(v/v) methanol at 40.deg.C and pH 6.5. No Growth was observed at over 60.deg.C. Cell-free extracts of the methanol grown cells exhibited the phenazine methosulfate-linked methanol dehydrogenase activity Methanol was found to be assimilate dthrough the ribulose monophosphate pathway.y.
A pink-pigmented facultative methylotrophic bacterium, Methylobacterium sp. strain SY1, was isolated from soil through methanol-enrichment culture technique. The isolate was gram-negative, slightly curved rod, and motile by a single polarly inserted flagellum. The colony was smooth, bright pink, and slimy. The guanine plus cytosine content of the KNA was 66%. The cell was obigately aerobic and exhibited both catalase and oxidase activities. Carotenoid pigment and poly-$\beta$-hydroxybutyrate were present. It was found to have three kinds of plasmid with molecular weights 45,000, 38,500 and 23,000. Growth with methanol(0.5%) was fast ($t_{d}$=6.5h) and was optimal at $30^{\circ}C$ and at pH 7.0. The isolate could grow on several sugars, organic acids, amino acids, amines, and alcohols in addition to the methanol. Methanol was found to be assimilated through the serine pathway.
Methylorubrum extorquens, a facultative methylotroph, assimilates C1 compounds and accumulates poly-β-hydroxylbutyrate (PHB) as carbon and energy sources. The ethylmalonyl pathway is central to the carbon metabolism of M. extorquens, and is linked with a serine cycle and a PHB biosynthesis pathway. Understanding the ethylmalonyl pathway is vital in utilizing methylotrophs to produce value-added chemicals. In this study, we determined the crystal structure of the mesaconyl-CoA hydratase from M. extorquens (MeMeaC) that catalyzes the reversible conversion of mesaconyl-CoA to β-methylmalyl-CoA. The crystal structure of MeMeaC revealed that the enzyme belongs to the MaoC-like dehydratase domain superfamily and functions as a trimer. In our current MeMeaC structure, malic acid occupied the substrate binding site, which reveals how MeMeaC recognizes the β-methylmalyl-moiety of its substrate. The active site of the enzyme was further speculated by comparing its structure with those of other MaoC-like hydratases.
When methanol was the sole carbon source, Methylobacterium organophilum NCIB 11278, a facultative methylotroph, accumulated Poly-$\beta$-hydroxybutyrate (PHB) as 59% (w/w) of dry cell weight under potassium limitation, 37% under sulfate limitation, and 33% under nitrogen limitation. Based on a stoichiometric analysis of PHB synthesis from methanol, it was suspected that PHB synthesis is accompanied by the overproduction of energy, either 6-10 ATP and 1 $FADH_2$ or 6 ATP and 3 NADPH to balance the NADH requirement, per PHB monomer. This was confirmed by observation of increased intracellular ATP levels during PHB accumulation. The intracellular ATP with limited potassium, sulfate, and ammonium increased to 0.185, 0.452, and 0.390 $\mu$moles ATP/g Xr (residual cell mass) during PHB accumulation, respectively. The intracellular ATP level under potassium limitation was similar to that when there was no nutrient limitation and no PHB accumulation, 0.152- 0.186 $\mu$moles ATP/g Xr. We propose that the maximum PHB accumulation observed when potassium was limited is a result of the energy balance during PHB accumulation. Microorganisms have high energy requirements under potassium limitation. Enhanced PHB accumulation, in ammonium and sulfate limited conditions with the addition of 2,4-dinitrophenol, which dissipates surplus energy, proves this assumption. With the addition of 1 mM of 2,4-dinitrophenol, the PHB content increased from 32.4% to 58.5% of dry cell weight when nitrogen limited and from 15.1 % to 31.0% of dry cell weight when sulfate limited.
A large number of methanol-assimilating yeasts and bacteria were isolated from samples of soil, sewage, decomposed milk and spoiled sweet-radish pickles. Among the yeasts, one strain was selected and identified as a strain of Candida boidinii. In 1% (v/v) methanol Candida boidinii YF-3 grew well and could grow in as much as 5%. This yeast required boitin for grwoth. Maximum growth was observed at $30^{\circ}C$ and pH 6 in a semisynthetic medium. The productivity was 2.72g dry cells per liter in batch culture with 1%(v/v) methanol and the cell yield for methanol was $0.39\;gg^{-1}$. The specific growth rate was $0.11\;h^{-1}$ and the generation time was 6.4 hours. The protein content of the cell was 45.5% and total nucleic acid content was 5.9%. The amino acid profile was as good as FAO standard for food protein.
Methylobacterium organophilum, a facultative methylotroph was cultivated on a methanol as a sole carbon and energy source. The cell growth was affected by the various components of minimal synthetic medium and the medium composition was optimized with 0.5% (v/v) methanol at pH 6.8 and at 3$0^{\circ}C$. The maximum specific growth rate of M. organophilum was achieved to 0.26 hr$^{-1}$ in the optimized medium which has following composition: Methanol, 0.5% (v/v):(NH$_4$)$_2$SO$_4$, 1.0g/l:KH$_2$PO$_4$, 2.13g/l:KH$_2$PO$_4$, 1.305g/ι:MgSO$_4$.7$H_2O$. 45g/l and trace elements (CaCl$_2$.2$H_2O$, 3.3mg:FeSO$_4$.7$H_2O$, 1.3mg:MnSO$_4$.4$H_2O$, 130$\mu\textrm{g}$:ZnSO$_4$.5$H_2O$, 40$\mu\textrm{g}$:Na$_2$MoO$_4$.2$H_2O$, 40$\mu\textrm{g}$:CoCl$_2$.6$H_2O$, 40$\mu\textrm{g}$:H$_3$BO$_3$, 30$\mu\textrm{g}$ per liter). By the limitation of nitrogen and deficiency of Mn$^{+2}$ or Fe$^{+2}$, the cell growth was significantly repressed. Methanol greatly repressed the cell growth and the complete inhibition was observed at concentration above 4% (v/v). In order to overcome the methanol inhibition and to prevent the methanol limitation, intermittent feeding of methanol was conducted by a D.O.-stat technique. PHB production by M. organophilum was stimulated by deficiency of nutrients such as NH$_{4}^{+}$, SO$_{4}^{-2}$, $Mg^{+2}$, $K^{+}$, or PO$_{4}^{-3}$ in the medium. The maximum PHB content was obtained as 58% of dry cell weight under deficiency of potassium ion in the optimized synthetic medium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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