Fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) is a well-established method commonly used to measure the diffusion of fluorescent solutes and biomolecules in living cells or tissues. Here a fiber-optic-based FRAP (f-FRAP) system was developed, and validated using macromolecules in water and agarose gels of different concentrations. We applied f-FRAP to measure the site-specific diffusion of fluorescein (NaFluo) in peritoneal membranes (PMs) on the liver, cecum, and kidney of a living rat during peritoneal dialysis. Diffusion of fluorescein in PM varied in a time-dependent manner according to the type of organ ($D_{PM\;on\;Liver}/D_{NaFluo}=0.199{\pm}0.085$, $D_{PM\;on\;Cecum}/D_{NaFluo}=0.292{\pm}0.151$, $D_{PM\;on\;Kidney}/D_{NaFluo}=0.218{\pm}0.110$). The proposed method allows direct quantitative measurement of the three-dimensional diffusion in local PM in vivo, which was previously inaccessible by peritoneal function test methods such as peritoneal equilibration test (PET) and standardized PM assessment (SPA). f-FRAP is promising for local and dynamic assessments of peritoneal pathophysiology and the mass transport properties of PMs, presumed to be affected by variation of tissue structures over different organs and functional changes of the PM with years of peritoneal dialysis.
Lee Se Yeong;Kim Eun Ok;Seo Hyo Jin;Kim Min Yong;Kim Jong Deog
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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v.9
no.6
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pp.514-518
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2004
Many methods are used in the measurement of antioxidative capacity. These methods require very complex procedures and pretreatment. Our suggestions for research will be simple and accurate methods for obtaining many kinds of samples, especially colored samples such as natural product extracts for measuring antioxidative capacities. For oxidation-reduction potential (ORP) system value, we examined the relationships between the ORP-pH system and the ORAC, FRAP methods. To evaluate ORP System value, we calculated the absolute slope/intercept from the linear regression of each standard material at different concentrations and ORP-pH system, and compared the correlations with ORAC and FRAP values.
Objectives: FDY003 is a raw material for medicine consisting of a natural product that is expected to have the advantages of low side effects and high efficacy. In this study, we predict the efficacy and the standardization of the drug by method validation of anticipated index compounds and the measurement of antioxidant activity. Methods: FDY003 is prepared by extracting and purifying 70% of ethyl alcohol (EtOH). The method validation of cordycepin and chlorogenic acid was determined by high-performance liquid chromatography-photo diode array (HPLC-PDA) and the content of FDY003 was calculated. In order to monitor the biological activity of FDY003, antioxidant activity was measured by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2-azino bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), and ferric-reducing antioxidant power (FRAP). The equivalent values of antioxidants such as trolox, ascorbic acid, gallic acid, and caffeic acid were measured by ABTS and FRAP. Results: Chlorogenic acid and cordycepin were both found suitable for method validation in HPLC and FDY003 containing 9.92±0.50 and 17.97±0.27 ㎍/g, respectively. In DPPH, the electron donating ability (EDA) value of FDY003 was increased in a concentration dependent manner. FDY003 confirmed antioxidant activity by ABTS and FRAP. Conclusions: FDY003 contains certain components including cordycepin and chlorogenic acid and has antioxidant ability by various mechanisms. Therefore, it is expected that FDY003 is capable of various physiological activities including anti-cancer activity.
In order to find out superior corn line which has a strong antioxidant activity in the corn silk, antioxidant compounds and antioxidant activity were measured from various inbred and F1 lines. As a result, the contents of phenolic and flavonoid compounds range from 532 mg/100 g to 3,274 mg/100 g and from 980 mg/100 g to 2,420 mg/100 g respectively. Absorbance at 517 nm for contents of anthocyanins ranges from 0.05 to 0.76. Correlation coefficients between antioxidant compounds and various antioxidant assays such as DPPH, ABTS and FRAP were analyzed. Correlation coefficients between antioxidant activity and phenolic compounds and anthocyanin were significantly high in ABTS and FRAP assays. Considering acidic extraction condition and intervention between anthocyanins and DPPH solution, ABTS assay and FRAP assay are more suitable methods to evaluate antioxidant activity of corn silks. Especially, ABTS assay is thought to be the best method among three assays because the antioxidant activity in ABTS assay showed high correlation with phenol, flavonoid and anthocyanin compounds respectively. Among the samples, S15 which showed the highest contents of total phenolic compounds and the most potent antioxidant activity in ABTS and FRAP assay will be a good source for functional material.
Lee, Sang Gil;Wang, Taoran;Vance, Terrence M.;Hurbert, Patrice;Kim, Dae-Ok;Koo, Sung I.;Chun, Ock K.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.27
no.2
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pp.388-394
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2017
Although several analytical methods for measuring total antioxidant capacity (TAC) have been applied to biological samples, there were often dissimilar results due to the different principles of methods applied. Thus, this study aimed to validate four conventional analytical methods for measuring plasma TAC, including the ABTS assay, DPPH assay, FRAP assay, and ORAC assay, by comparing with urinary 8-isoprostane concentration. In addition, TAC results were compared with antioxidant enzyme activities including superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase in erythrocyte, and catalase in plasma. Plasma TAC measure by ABTS assay was strongly correlated with the result by FRAP assay. Plasma TAC by FRAP and ORAC assays were negatively correlated with erythrocyte SOD activity. The agreement among the four TAC assay methods and 8-isoprostane was determined using 95% prediction limits of linear regression, expressed as the mean of 8-isoprostane ${\pm}95%$ prediction limits. The ABTS method better agreed with 8-isoprostane than the other methods, demonstrating narrow prediction of limits. Furthermore, only plasma TAC determined by the ABTS assay was inversely correlated with urinary 8-isoprostane (r = -0.35, p < 0.05). In summary, the ABTS assay would be an appropriate method to measure overall plasma antioxidant capacity and predict the body's antioxidant status.
The authors evaluated the scavenging activities of ABTS+ radical, hydroxy radical (OH), nitric oxide (NO), and ferric ion reducing antioxidant power (FRAP) from ethanol extracts of four edible alga, Enteromorpha linza, Porphyra tenera, Sargassum fusiforme, and Undaria pinnatifida. ABTS+ scavenging activity was analyzed according to the method of Brand-Williams et al. ABTS+ scavenging activity of S. fusiforme was evaluated to 61.8% at 8.0 mg/ml. ABTS+ scavenging activity of P. tenera was evaluated to 35.7% at 8.0 mg/ml. P. tenera and U. pinnatifida showed similar inhibitions of ABTS+ scavenging activity. According to the results of the OH assay in seaweed, inhibitory activities were in the order of S. fusiforme > P. tenera > U. pinnatifida > E. linza. The results showed scavenging activity for NO in the following order of potency: S. fusiforme > P. tenera > U. pinnatifida > E. linza with concentration values of 8.0 mg/ml. The NO scavenging activities of dough, which was instant noodles mixed with S. fusiforme and 3.5% salt, were 27.2% at 8.0 mg/ml. After boiling for 5 minutes, FRAP scavenging activity of instant noodles mixed with extracts of U. pinnatifida was evaluated to 31.5% at 8.0 mg/ml. S. fusiforme showed the highest inhibition activity of ABTS+, OH, NO, and FRAP among the four algae. Thus, these findings provide evidence that P. tenera, U. Pinnatifida, S. fusiforme, and E. linza extracts could become sources of natural antioxidants.
The total phenolic content and antioxidant activities of grape and fruit juice products in the Korean market were examined The total phenolic content was measured by the Folin-Ciocalteau method, and antioxidant activities were evaluated by FRAP and DPPH assays. The total phenolic content of the grape juice products were within the range $57.95{\sim}205.64\;mg/L$. Orange juice had the strongest antioxidant activity, apple juice the weakest, and grape juice was intermediate. Grape juice products exhibited a wide range of antioxidant activities. Especially, GU4, GU5, and GU9 exhibited about 80% of the DPPH radical scavenging activities, similar to the antioxidant activities by the FRAP assay. The antioxidant activities by FRAP and DPPH assays were well correlated with the total phenolic content of grape juice products (> 0.97).
To investigate the natural antioxidant and antimicrobial phytochemicals from black bamboo (Phyllostachys nigra MUNRO) leaves, the solvent fractions from crude methanol extract were made with n-hexane, ethyl acetate, and butanol, and their antioxidant and antimicrobial activities were determined. The antioxidant activities were examined by 1,1-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) method and ferric ion reducing antioxidant power (FRAP) method, and the antimicrobial activities against Staphylococcus aureus were tested by paper disc agar diffusion method. Total phenolic contents and total flavonoid contents of the solvent fractions were also determined. The ethyl acetate fraction with the highest total phenolic contents among all fractions showed the strong antioxidant activities by DPPH method and FRAP method, and antimicrobial activities against S. aureus at all test concentrations. Caffeic acid, ferulic acid, quercetin, and kaempferol were analyzed by HPLC in the ethyl acetate fraction from black bamboo leaves by the comparison with the standard chemicals. It is supposed that the ethyl acetate fraction from black bamboo leaves could be used as natural preservatives in the food industry.
This study was conducted to find out the optimal solvent extraction method [Distilled water (DW), 70% ethanol, 99% ethanol] of mushrooms, including Pleurotus ostreatus (Jacq.) Que, Pleurotus eryngii and Flammulina velutipes and improve their usability as natural antioxidants. To analyze antioxidant activities in each mushroom, total polyphenol, flavonoid contents, 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) cation radical (ABTS+) and fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) were measured. All mushrooms showed the highest total polyphenol contents in DW mushroom extract (p<0.001). Total flavonoid contents were the highest in P. eryngii and F. velutipes DW and 70% ethanol mushroom extracts (p<0.05). All mushrooms showed the highest activities using DPPH and FRAP assays in the DW extraction method (p<0.001). P. ostreatus (Jacq.) Que and P. eryngii showed the highest ABTS+ radical scavenging activity in the DW extraction method, and F. velutipes showed the highest activity in the 70% ethanol extraction method (p<0.001). As a result of comparing IC50 values of DPPH and ABTS+ radicals and FRAP EC50 values, the DW P. ostreatus (Jacq.) Que extract showed high antioxidant activities (p<0.001). Pearson's correlation between total polyphenol contents and antioxidant activities showed a positive correlation in all mushrooms (p<0.01). Therefore, extraction of the mushrooms with DW can enhance the extraction of effective bioactive substances and antioxidant activity.
Purpose: The purpose of this study was to investigate antioxidant capacity and relating factors including gender, obesity, lifestyle factors, and nutrient intake in chronic stroke patients. Methods: A total of 188 chronic stroke patients who visited a medical center in Seoul participated in the study. A structured questionnaire was used to assess their clinical characteristics and lifestyles. Blood samples were collected for ferric reducing ability of plasma (FRAP) for antioxidant capacity. Dietary intake of the patients were obtained for 2 days by 24 hours recall method. Results: The mean FRAP was $392.0{\mu}mol/L$. According to the hierarchical multiple regression analysis, the factors related to high FRAP were male sex (p=.036), alcohol drinking (p=.013), and calorie intake deficiency (p=.005). Conclusion: We found that antioxidant capacity was related to lifestyle factors including alcohol drinking, and calorie intake in chronic stroke patients. A tailored strategy is needed to increase antioxidant capacity according to gender and lifestyles in the chronic phase of stoke patients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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