Although many developed countries (USA, Canada, and several EU countries) allow raw milk cheese to be aged more than 60 days, these countries have strict standards for the aging conditions, such as temperature, of raw milk cheese. Spiking experiments were conducted with Camembert cheese made from raw milk, to assess the microbiological safety of raw milk cheese aged for more than 60 days. We spiked Escherichia coli O157:H7 into raw milk with different inoculation levels (high, medium, and low). Camembert cheese was prepared from the inoculated raw milk, then aged in an incubator for up to 9 weeks (63 days). There were no significant differences in pH and water activity (aW) between uninoculated cheese and cheese samples inoculated with E. coli O157:H7 (p<0.05). The pH and aWof the Camembert cheese decreased throughout the storage period. In conclusion, E. coli O157:H7 did not affect the pH and aW of the cheese samples. Cell counts were conducted every week using the agar-plating method. Inoculated cells were completely eliminated, especially in Camembert cheese, after 60 days, and the reduction rate of cells was much faster in Camembert cheese.
The antagonistic activity of probiotic strains (Bifidobacterium animalis BB-12, Bifidobacterium bifidum A, Bifidobacterium longum B6, Lactobacillus acidophilus ADH, Lactobacillus paracasei ATCC 25598, and Lactobacillus rhamnosus GG) against nalidixic acid resistant ($NA^R$) Escherichia coli O157:H7 MF1847, E. coli O157:H7 H2439, E. coli O157:H7 ATCC 43894, and E. coli O157:H7 C7927 was investigated using the agar-overlay, well diffusion, and broth culture tests. L. paracasei ATCC 25598 was the most effective probiotic strain in terms of in vitro antagonistic activity against $NA^R$ E. coli O157:H7, followed by L. rhamnosus GG, B. longum B6, and L. acidophilus ADH. The use of selected probiotic strains could be an effective pre-harvest intervention strategy to reduce the risk of $NA^R$ E. coli O157:H7 by maintaining a balanced microflora in animals and might provide many potential benefits in lieu of using antimicrobials.
The inhibitory effect of various organic acids on the growth and survival of Escherichia coli O157:H7 in tryptic soy broth with 0.6% yeast extract at 37$^{\circ}C$ or 4$^{\circ}C$ was determined. Minimal inhibitory pHs of acetic acid, citric acid, fumaric acid, hydrochloric acid and lactic acid were 5.0, 4.0, 4.5, 4.0 and 4.5, respectively. Acetic acid (0.012 m) showed the strongest antimicrobial activity, based on the pH values or equivalent molar concentrations, followed by lactic acid (0.0006 M), fumaric acid (0.004M) and citirc acid (0.004 M), respectively, E. coli O157:H7 with an initial inoculum of {TEX}$10^{7}${/TEX} CFU/ml and {TEX}$10^{5}{/TEX} CFU/ml in tryptic soy broth supplemented with 0.6% yeast extract, acidified to target pH with citric, fumaric and lactic acids at 37$^{\circ}C$, was completely inactivated after 7 d and 5 d incubation, respectively, except for the acetic acid (9 d). The bactericidal effect decreased at the same pH when the incubation temperature a was reduced from 37$^{\circ}C$ to 4$^{\circ}C$. The pH values of 0.2% acetic (pH 5.1), 0.6% citric (pH 4.2) and 0.4% lactic acid (pH 4.3) in TSBYE were almost correspondent to the minimal inhibitory pH values on E. coli O157:H7 of acetic (pH 4.0), citric (pH 4.0) and lactic acids (pH 4.5).
Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) strains of serotype O157:H7 have been shown to colonize the intestinal epithelial cell by the attaching and effacing (AE) mechanism. The AE lesion is mediated by an intimin, of which production and expression are controlled by a 3-Kb eaeA gene located EHEC chromosomal DNA. If the eaeA gene is mutated, EHEC O157:H7 strains lose capacity of adhesion to intestinal epithelial cells. In this study, a 891 bp of the 3'-end region of a gamma intimin was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was inserted into pSTBlue-1 cloning vector and transformed into DE3 (BL21) competent cell. After plasmid mini-preparation and restriction enzyme digestion of eaeA/891-pSTBlue-1 vector, target eaeA gene was re-inserted into pET-28a expression vector and was transformed. Then the expression of recombinant eaeA/891 (891 bp) gene was induced by isopropyl-$\beta$-D-thiogalactopyranoside (IPTG). The expression of the 40-KDa recombinant protein was identified in SDS-PAGE and confirmed by immunoblotting using the His.Tag$^{\circledR}$ and T$_{7}$.Tag$^{\circledR}$ monoclonal antibody. This recombinant protein expressed by eaeA gene could be applied in further studies on the mechanisms of E. coli O157:H7 infection and the development of recombinant vaccine.
This study determined the thermal resistance of Bacillus cereus, Escherichia coli O157:H7, and Listeria monocytogenes in multi-grain soymilk and proposes processing conditions that meet the national standard for retort food products in Korea. D and z values were calculated from thermal inactivation kinetic curves after heating at 55, 60, and $65^{\circ}C$. The D value for B. cereus at $55^{\circ}C$ was the highest (22.8 min), followed by that for E. coli O157:H7 (18.8 min) and L. monocytogenes (17.6 min). At $60-65^{\circ}C$, the order was L. monocytogenes ($D_{60-65^{\circ}C}=3.4-0.9min$), E. coli O157:H7 (3.0-0.3 min), and B. cereus (1.2-0.3 min). The z values for these species were 5.2, 5.5, and $7.7^{\circ}C$, respectively. The Korean national standard for retort food products was achieved by thermal processing at $124{\pm}2^{\circ}C$ for 0.3-2.2 min. This study provides useful data for ensuring both the microbiological safety and product quality of multi-grain soymilk products.
본 연구에서는 양상추에 접종된 E. coli O157:H7, S. Typhimurium과 L. monocytogene에 대하여 저온 플라즈마와 UV-C 단독처리 및 병행처리 효과를 측정하였다. E. coli O157:H7, S. Typhimurium, L. monocytogenes는 양상추에 초기 농도가 5.82, 5.09, 5.65 log CFU/g이 되도록 각각 접종하였다. 저온 플라즈마와 UV-C를 처리된 양상추는 $4^{\circ}C$에서 9일간 보관하며 미생물학적 분석과 관능평가를 실시하였다. 저온 플라즈마 처리는 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, L. monocytogenes의 개체 수를 각각 0.26, 0.65, 0.93 log CFU/g 수준으로 감소시켰다. 또한, UV-C 처리 시 각각 0.87, 0.88, 1.14 log CFU/g 수준으로 감소되었다. 또한 UV-C 처리 후 저온 플라즈마를 처리한 병행처리에서는 각각 1.44, 2.70, 1.62 log CFU/g 수준으로 감소하였다. 저온 플라즈마와 UV-C 단독처리 보다는 병행처리가 좀 더 효과적으로 균을 저감하는 것으로 판단되었다. 관능평가 결과는 외관, 질감, 전체적인 수용도 면에서 대조구와 비교하였을 때, 보관 6일까지 유의적인 차이가 없었다. 따라서 저온 플라즈마와 UV-C 병행처리는 양상추에 존재하는 균을 저감하기 위한 효과적인 기술로 활용될 수 있을 것으로 생각되었다.
화분발효물(FPE)을 함유하는 Gelidium corneum - 젤라틴(GCG) 필름을 제조하여 돈육의 포장재로 사용하였다. FPE를 첨가한 GCG필름의 투습계수는 대조구 필름 보다 향상되었고 FPE 첨가 농도가 증가함에 따라 Escherichia coli O157:H7와 Listeria monocytogenes에 대한 항균효과는 증가하였다. 특히, 0.15% FPE 첨가는 E. coli O157:H7와 L. monocytogenes에 대해 대조구 대비 각각 2.98 and 3.68 Log CFU/g 감소시켰다. 또한 돈육 시료를 E. coli O157:H7 와 L. monocytogenes로 접종시킨 후 GCG 필름으로 포장한 후 저장 중 미생물 수의 변화를 측정한 결과, 0.15% 화분발효물이 첨가한 GCG 필름으로 포장 시 E. coli O157:H7와 L. monocytogenes 숫자가 저장 4일 후 대조구 대비 각각 1.49, 1.01 Log CFU/g 더 감소시켰다. 이러한 연구 결과는 0.15% 화분발효물이 첨가한 GCG 필름으로 포장한 돈육의 유통기한이 증대될 수 있음을 시사한다.
50가지 생약재를 95% 에탄올과 물추출하여 식중독 세균인 S. aureus와 E. coli O157:H7에 대한 항균활성을 조사하였다. 한천배지확산법에 따른 생육저해효과를 측한 결과, S. aureus 에 대하여 우슬>목단피>지실>황백, 건강, 민들레 순으로, E. coli O157:H7에 대하여 목단피>우슬>건강>지실, 황백 순으로 활성을 나타내었다. MIC는 S. aureus에 대하여 우슬이 156.25 $\mu$g/mL, 목단피와 황백이 625 $\mu$g/mL로 나타났으며, E. coli O157:H7에 대하여 우슬과 목단피의 MIC는 각각 625, 312.5 $\mu$g/mL로 높은 항균력을 나타내었다. 가장 높은 활성을 보인 우슬과 목단피를 용매분획(hexane, CHC1$_3$, ethyl acetate, butanol)하여 한천배지 확산법에 의한 두 균에 대한 생장저해 효과를 측정하였다. 우슬은 ethyl acetate 분획물에서, 목단피는 CHC1$_3$과 ethyl acetate 분획물에서 각각 높은 활성을 나타내었다.
E coli O157:H7은 식품과 물에 의해서 전염되는 식중독균으로서 이들의 생성하는 vero toxin 이 장관의 상피세포내로 침입되어 질병을 유발시키게 된다. 또한 E coli O157:H7 이 체내에 감염되기 위해서는 유산균과 마찬가지로 장상피세포에 정착하여야 한다. 따라서 본 연구에서는 비피더스균이 E. coli O157:H7의 생육 및 정착에 대해서 억제효과가 있는지를 파악하기 위해서 비피더스균과 E. coli O157:H7을 혼합 배양했을 때의 억제 효과 비피더스균의 Caco-2 세포 정착에 따른 억제 효과 등을 조사하였다. B infantis K9 균주와 E. coli O157:H7을 단독 또는 혼합배양하면서 배양시간에따른 pH 균수 암모니아 함량을 측정하였다. 그결과 배양시간이 결과되어 B infantis K9 균주에 의해서 산성물질이 생성되면서 E. coli O157:H7의 균수는 급격히 감소되는것으로 나타났다. 한편 암모니아 함량은 E. coli O157:H7 단독배양 시료에 비해서 혼합배양 시료에서 8시간 이후부터 감소되는 것으로 볼때 비피더스 균 E. coli O157:H7이 생성하는 암모니아를 이용하는것으로 확인되었다.B infantis K9 균주와 E. coli O.157:H7 P4 균주를 정착시기를 달리하여 Caco-2 세포에 혼합 정착시켰을 때 B. onfantis K9 균준느 정착시기에 상관없이 유사한 정착율을 나타냈다. 반면에 B infantis K9 균주가 2시간 전에 미리 정착되어 있을 때에는 E. coli O157: HP P4 균주의 정착율이 2.6%에서 1.86%로 감소되는 경향을 보였다. 결론적으로 비피더스균의 E coli O157:H7에 대한 생육 및 정착 억제를 검토한 결과 생육억제효과는 비피더스균에 의해서 생성된 산성물질 에 의해서 pH4.40 이하 일때 저해 효과를 보였으며 비피더스균과 E. coli O157:H7 이 정착 부위를 동일하게 이용하지만 비피더스균이 우선적으로 정착이 되었을 때 E. coli O157:H7의 정착율이 저하되는 결과를 나타냈다.
E. coli O157:H7은 요독증후군, 출혈성 대장염 및 설사 등을 유발하는 원인균으로, 전세계적으로 이들의 오염에 따른 식중독 발생이 증가하고 있어, 본 연구에서는 E. coli O157:H7을 신속 정확하게 분석할 수 있는 면역크로마토그래피법을 개발하였고, 보다 신속한 검출을 위하여 육류와 새싹시료를 대상으로 최소 증균시간을 확인하였다. 먼저, 면역크로마토그래피법의 개발을 위해 colloidal gold와 EC MAb를 합성하여 EC MAb-gold conjugate를 제작한 다음, 접합여부를 확인한 결과, test line과 control line에 각각 처리되는 EC MAb와 anti-mouse IgG에 특이적으로 반응하였다. 제작된 EC MAb-gold conjugate를 이용하여 개발된 면역크로마토그래피법의 검출한계는 $1{\times}10^5$ CFU/mL 수준까지 검출이 가능한 것으로 확인되었고, 다른 대장균속 및 주요 식중독균과의 교차반응성은 나타나지 않았다. 개발된 면역크로마토그래피법을 이용하여 임의로 E. coli O157:H7을 오염시킨 돼지고기, 소고기, 닭고기 및 새싹채소를 증균하는 동안 분석한 결과, 돼지고기와 닭고기는 6시간, 소고기는 10시간, 특히 새싹채소는 2시간 후부터 $1{\times}10$ CFU/100 ${\mu}L$ 수준까지 검출이 가능한 것으로 나타났다. 따라서 본 연구에서 개발된 면역크로마토그래피법을 이용하여 육류와 채소 등에 오염된 E. coli O157:H7을 최대 10시간 이내로 신속히 분석할 수 있을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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