The efficient fermentative production of L-threonine fermentation was achieved by using Escherichia coli MT201, transformed a plasmid carrying pyruvate carboxylase gene. It is an attempt to supply oxaloacetate to the L-threonine biosynthetic pathway. In order to improve the L-threonine productivity of E. coli MT201, a plasmid pPYC which is an expression vector of the pyruvate carboxylase gene of Coryne-bacterium glutamicum, was introduced. When E. coli MT/pPYC was incubated with medium containing only glucose as a carbon source, both the cell growth and L-threonine production were reduced, compared to the results from fermentation of E. coli MT201. In order to circumvent this effect, we attempted the addition of a mixed carbon source, composed of glucose and sodium citrate at a ratio of 1.5:3.5. It was shown that L-threonine production and cell growth (OD660) with E. coli MT/pPYC reached up to 75.7 g/l and 48, respectively, at incubation for 75 hr under fed-batch fermentation conditions. It is assumed that overproduction of L-threonine by anaplerotic pathway leads unbalance of TCA cycle and sodium citrate might playa role to recover normal TCA cycle.
Escherichia coli O157 is an important pathogenic organism which causes diarrhea, haemorrhagic colitis, and haemolytic ureamic syndrome (HUS) in human. E. coli O157 KNIH317 was isolated form patients suffering with HUS in Korea. We designed a primer set for cloning shiga-like toxin (slt) gene. The amplified PCR product was used to Southern and colony hybridization as a probe. As a result, we cloned 4.5-kb KpnI fragment containing the slt gene encoding shiga-like toxin from chromosomal DNA of E. coli O157 KNIH317. This recombinant plasmid was named pOVT45. E. coli XL1-Blue harboring pOVT45 showed cytotoxicity in Vero cells. We sequenced the slt gene of this strain. The A-subunit gene of the slt was composed of 960 base pairs with ATG initiation codon and TAA terminationcodon. The B-subunit was composed of 270 base paris with ATG initiation codon and TGA termination codon. Nucleotide sequence comparison of the slt gene exhibited 100%, 98.4%, 93.7%, and 93.7% identity with that of shiga-like toxin type II (sltII) of E. coli bacteriophage 933W, variant slt of E. coli, slt of E. coli, and variant sltII of E. coli, respectively. From these results, it was concluded that the cloned slt gene belongs to SltII family and that the strain used in this study may be a lysogeny of E. coli bcteriphage 933W.
Kim, Kyungmi;Lee, Heeyoung;Lee, Soomin;Kim, Sejeong;Lee, Jeeyeon;Ha, Jimyeong;Yoon, Yohan
Food Science of Animal Resources
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v.37
no.4
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pp.579-592
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2017
This study assessed the quantitative microbial risk of non-enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). For hazard identification, hazards of non-EHEC E. coli in natural and processed cheeses were identified by research papers. Regarding exposure assessment, non-EHEC E. coli cell counts in cheese were enumerated, and the developed predictive models were used to describe the fates of non-EHEC E. coli strains in cheese during distribution and storage. In addition, data on the amounts and frequency of cheese consumption were collected from the research report of the Ministry of Food and Drug Safety. For hazard characterization, a doseresponse model for non-EHEC E. coli was used. Using the collected data, simulation models were constructed, using software @RISK to calculate the risk of illness per person per day. Non-EHEC E. coli cells in natural- (n=90) and processed-cheese samples (n=308) from factories and markets were not detected. Thus, we estimated the initial levels of contamination by Uniform distribution ${\times}$ Beta distribution, and the levels were -2.35 and -2.73 Log CFU/g for natural and processed cheese, respectively. The proposed predictive models described properly the fates of non-EHEC E. coli during distribution and storage of cheese. For hazard characterization, we used the Beta-Poisson model (${\alpha}=2.21{\times}10^{-1}$, $N_{50}=6.85{\times}10^7$). The results of risk characterization for non-EHEC E. coli in natural and processed cheese were $1.36{\times}10^{-7}$ and $2.12{\times}10^{-10}$ (the mean probability of illness per person per day), respectively. These results indicate that the risk of non-EHEC E. coli foodborne illness can be considered low in present conditions.
Atmospheric-pressure nonthermal corona discharge plasma was applied to the sterilization of biologically contaminated scoria powder. Escherichia coli (E. coli) culture solution was uniformly sprayed throughout the scoria powder for artificial inoculation, which was well mixed to ensure uniformity of the batch. The effect of the key parameters such as discharge power, treatment time, type of gas and electrode distance on the sterilization efficiency was examined and discussed. The experimental results revealed that the plasma treatment was very effective for the sterilization of scoria powder; 5-min treatment at 15 W could sterilize more than 99.9% of E. coli inoculated into the scoria powder. Increasing the discharge power, treatment time or applied voltage led to an improvement in the sterilization efficiency. The effect of type of gas on the sterilization efficiency was in order of oxygen, synthetic air (20% oxygen) and nitrogen from high to low. The inactivation of E. coli under the influence of corona discharge plasma can be explained by cell membrane erosion or etching resulting from UV and reactive oxidizing species (oxygen radical, OH radical, ozone, etc.), and the destruction of E. coli cell membrane by the physical action of numerous corona streamers.
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), Escherichia coli (E. coli) and Staphylococcus aureus (S. aureus) are typical opportunistic pathogens. Moreover, these bacteria are known to possess multidrug-resistant (MDR) properties. This study investigates the antimicrobial activity of six fermented products, which have varying efficacies against P. aeruginosa, E. coli, and S. aureus. To identify novel candidate genes, differential expression analysis was performed using an annealing control primer. In the disk diffusion method, Fig vinegar (FV) and Diospyros kaki Thunb vinegar (DTV) showed the greatest increase in inhibition compared to other fermented products, whereas fermented Korean traditional nature herb (FKTNH) had no antibacterial effect. This study identified down-regulation of Escherichia coli O157:H7 ompW gene for outer membrane protein W, whereas gene for synthetic construct Lao1 gene for L-amino acid oxidase were up-regulated in E. coli treated with 5% FV. Consuming fermented vinegar helps prevent bacterial infections. Especially, FV and DTV are potentially useful alternative natural products for multidrug resistance. Furthermore, both are expected to be used as effective natural antimicrobial agents, such as disinfectants.
Gamma irradiated and non-irradiated Agrimonia pilosa Ledebour were extracted by 70% ethanol. The combined effects of the Agrimonia pilosa Ledebour extract and NaCl on survival of Escherichia coli O157:H7 in tryptic soy broth were investigated. E. coli O157:H7 decreased ca 1 log cycle by the addition of 2% sample extract, and the anthbacterial activity was increased as the concentration of sample extract was increased. The irradiation effect of the sample on antibacterial activity was not observed. On the treatment of NaCl alone, E. coli O157:H7 was inactivated (ca 3~4 log cycle reduction within 48 hr) in more than 7% NaCl. The higher inactivation(ca 5 log cycle reduction within 48 hr) occurred in the presence of 2% sample extract and 5% NaCl than in the addition of each alone. The extracted antibacterial substance was stable in the pH range of 4.0 to 7.0, heat treatment at 121$^\circ C$ for 15 min, and freezing at -18$^\circ C$ and thawing at 37$^\circ C$. There fore, the sample extract, would substantially increase the food-safety in terms of E. coli O157:H7.
The FimH subunit of type l-fimbriated Escherichia coli has been determined as a major cause of urinary tract infection. To produce a possible vaccine antigen against urinary tract infection, the fimH gene was genetically coupled to the ctxa2b gene, which was then cloned into pMAL -p2E expression vector. The chimaeric construction of pMALfimH/ctxa2b was transformed into Escherichia coli TB1 and its N-terminal amino acid sequence was analyzed. (omitted)
Verotoxin non-producing E coli O157 strains have been isolated from cattle feces and compared in particular regard to biochemical properties and genotypes with verotoxin-producing E coli (VTEC). E coli O157 : nonH7 strains had different phenotypes in sorbitol fermentation and ${\beta}-glucuronidase$ activity from E coli O157 : H7. Regardless of verotoxin production ability of E coli O157 : H7, uidA gene was uniquely detected from sorbitol and ${\beta}-glucuronidase$ negative E coli O157 : H7. Forty five fecal samples from 6 dairy farms were obtained and VTEC was detected as 15.6% (7 strains) of the samples. Most VTEC isolates were positive for sorbitol fermentation and ${\beta}-glucuronidase$ activity but negative for eaeA gene. This study suggested that cattle could be a reservior for VTEC. However, absence of eaeA gene in VTEC isolates from most of healthy cattle suggested that they might be less virulent than eaeA-positive E coli against human health.
The present study evaluated the antibacterial effect of Flos syzygii Aromatici methanolic extracts (FSAE). In addition, the effectiveness of FSAE against Escherichia coli O157:H7 infection was studied using ICR female mice. At 24 h after incubation of E. coli O157:H7, FSAE at the concentration of 0.269 (p < 0.05), 0.538 (p < 0.001) and 1.075 mg/mL (p < 0.001) significantly inhibited the growth of E. coli O157:H7 compared to the control group. After single challenge with E. coli O157:H7, forty female ICR mice were divided into four experimental groups which were orally administered with saline (control), 0.538 (group 1), 1.075 (group 2) and 2.15 mg/mL (group 3) of FSAE, respectively. On the 3rd day, the number of fecal E. coli O157:H7 in group 2 (p < 0.05) and group 3 (p < 0.01) was significantly decreased compared to that in the control group. On the 7th day post-treatment, the number of fecal E. coli O157:H7 in all FSAE-treated groups was significantly decreased compared to that in the control group (group 1, p < 0.05; group 2 and 3, p < 0.001). According to the results of the present study, administration of FSAE to mice can reduce the severity of E. coli O157:H7 infection. Therefore, the current study suggests that FSAE could be a good candidate for the treatment of enteric infections in domestic animals.
The objective of this study was to determine the minimum enrichment time for different types of food matrix (pork, beef, and fresh-cut lettuce) in an effort to improve Escherichia coli detection efficiency. Fresh pork (20 g), beef (20 g), and fresh-cut lettuce (20 g) were inoculated at 1, 2, and 3 Log CFU/g of Escherichia coli. Samples were enriched in filter bags for 3 or 5 h at $44.5^{\circ}C$, depending on sample type. E. coli cell counts in the samples were enriched in E. coli (EC) broth at 3 or 5 h. One milliliter of the enriched culture medium was used for DNA extraction, and PCR assays were performed using primers specific for uidA gene. To detect E. coli (uidA) in the samples, a 3-4 Log CFU/mL cell concentration was required. However, E. coli was detected at 1 Log CFU/g in fresh pork, beef, and fresh-cut lettuce after 5, 5, and 3-h enrichment, respectively. In conclusion, 5-h enrichment for fresh meats and 3-h enrichment for fresh-cut lettuce in EC broth at $44.5^{\circ}C$, and PCR analysis using uidA gene-specific primers were appropriate to detect E. coli rapidly in food samples.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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