Park, Eun-Hee;Lee, Ha-Yeon;Ryu, Yeon-Woo;Seo, Jin-Ho;Kim, Myoung-Dong
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권10호
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pp.1064-1068
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2011
The osmotolerant yeast, Candida magnoliae, which was isolated from honeycomb, produces erythritol from sugars such as fructose, glucose, and sucrose. Erythrose reductase in C. magnoliae (CmER) reduces erythrose to erythritol with concomitant oxidation of NAD(P)H. Sequence analysis of the 5'-flanking region of the CmER gene indicated that one putative stress response element (STRE, 5'-AGGGG-3'), found in Saccharomyces cerevisiae, exists 72 nucleotides upstream of the translation initiation codon. An enzyme activity assay and semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction revealed that the expression of CmER is upregulated under osmotic and salt stress conditions caused by a high concentration of sugar, KCl, and NaCl. However, CmER was not affected by osmotic and oxidative stress induced by sorbitol and $H_2O_2$, respectively. The basal transcript level of CmER in the presence of sucrose was higher than that in cells treated with fructose and glucose, indicating that the response of CmER to sugar stress is different from that of GRE3 in S. cerevisiae, which expresses aldose reductase in a sugarindependent manner. It was concluded that regulation of CmER differs from that of other aldose reductases in S. cerevisiae.
Erythritol 생합성에 중요한 효소인 erythritol 4-phosphate dehydrogenase를 Penicillium sp. KJ81로부터 분리 정제하여 효소의 특성을 조사한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. Erythritol 4-phosphate dehydrogenase의 최적 생산 조건은 30% sucrose, 0.5% yeast extract, 0.5% $(NH_4)_2SO_4$, 0.1% $KH_2PO_4$ 그리고 0.05% $MgCl_2$ (pH 7.0) 배지에서 1 vvm aeration, 교반속도 200 rpm, $37^{\circ}C$로 Penicillium sp. KJ81을 배양한 결과 8일 배양 시 최대의 생산량을 보였다. Penicillium sp. KJ81주의 균체 추출액으로부터 ultrafiltration, 조제용 disc gel electrophoresis를 이용하여 erythritol 4-phosphate dehydrogenase를 분리 정제하였다. 최종 수율은 33%이었으며 정제배수는 39.5였다. 정제된 효소의 pI값은 4.6으로, erythrose 4-phosphate에 특이적으로 반응하였으며, Km값은 1.07mM이었다. Native-PAGE에서 single band를 보인 효소의 분자량은 약 1,500 kDa이었다. 효소활성의 최적 pH와 온도는 pH 7.0, $30^{\circ}C$였으며, 효소는 pH 4.0~9.0, 그리고 $30^{\circ}C$까지 안정하였다. 다양한 금속이온 중 $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$에 의하여 효소의 활성이 저해되었다. 다양한 아미노산 반응 잔기 변형시약 중 iodine과 NBS에 의해 효소의 활성이 저해되는 것을 확인하였다.
인산감수성(燐酸感受性)이 다른 9개대두재배종(個大豆栽培種) Lee, Hill, Harosoy, Clark-63, Chippewa 및 R56-49을 서로 다른 질소원(窒素源)으로 수경재배(水耕栽培)하여 엽중유리당(葉中遊離糖)과 유기산(有機酸)을 gas chronatograph로 조사(調査)하여 미동정(未同定)의 X, Y peak와 Sucrose peak가 주(主) peak로 나타났다. X 화합물(化合物)은 NO3-N 급여(給與)경우 흔적으로 나타난데 반하여 NH4-N나 urea 급여(給與)경우에 다량(多量)나타났다. Y 화합물(化合物)을 Urea 급여(給與)경우 감소하는 경향이었다. Sucrose는 NH4-N 급여(給與)에서 흔적으로 나타나고 Urea에서 NO3-N에서보다 높았다. X 화합물(化合物)은 erythrose에서 유래(由來)한 4 탄소(炭素) 산성당(酸性糖)이거나 Purine이나 Pyrimidine에서 유래(由來)한 환상화합물(環狀化合物)로 Y 화합물(化合物)은 glycolysis path에서 유래(由來)한 6 탄당(炭糖)으로 추정(推定)되었다. Y/X 치(値)는 인산감수성(燐酸感受性)의 좋은 지표(指標)가 되므로(역관계(逆關係)) 이 두 화합물(化合物)은 ammonia 독작용(毒作用) 및 인산감수성(燐酸感受性) 기작(機作)에 관여(關與)하는 요인화합물(要因化合物)로 보였다.
The 3-Deoxy-D-arabinoheptulosonate 7-phosphate (DAHP) synthase is the first enzyme of aromatic amino acid-, folic acid-, and phenazine-1-carboxylic acid biosynthetic pathways. DAHP synthase of Bacillus sp. B-6 that produces phenazine-1-carboxylic acid was feedback inhibited by two intermediary metabolites of aromatic amino acid biosynthetic pathways, prephenate and chorismate, but not by other metabolites, such as anthranilic acid, shikimic acid, p-aminobenzoic acid, and 3-hydroxyanthranilic acid. DAHP synthase of Bacillus sp. B-6 was not inhibited by end products, such as aromatic amino acids, folic acid, and phenazine-1-carboxylic acid. The inhibition of DAHP synthase by prephenate and chorismate was non-competitive with respect to erythrose 4-phosphate and phosphoenolpyruvate. Prephenate and chorismate inhibited 50% of the DAHP synthase activity at concentrations of $2{\times}10^{-5}\;M$ and $1.2{\times}10^{-4}\;M$, respectively The synthesis of DAHP synthase of Bacillus sp. B-6 was not repressed by exogenous aromatic amino acids, folic acid, and phenazine 1-carboxylic acid, single or in combinations.
감미종(甘味種) 소형(小型)고추인 Zairasisi를 저온저장(低溫貯藏)하니 종자(種子)의 갈변(褐變)이 급속(急速)히 일어났기에 여기에 주목(注目)하여 갈변기질(褐變基質)인 polyphenol 성분(成分)을 검색(檢索) 정량(定量)하고 이들 기질(基質)에 이르는 중간(中間) 대사(代謝) 성분(成分)의 변화(變化)를 측정(測定) 고찰(考察)하였다. (1) 종자(種子)의 polyphenol 성분(成分)으로서 chlorogenic acids가 검출(檢出)되었고 flavanol type polyphenols는 검출(檢出)되지 않았다. (2) Chlorogenic acid와 total polyphenol 함량(含量)은 저온처리(低溫處理)에 의하여 급증(急增)하고 갈변후(褐變後)는 감소하여 상온구(常溫區)보다 오히려 함량(含量)이 낮아졌다. (3) 중간대사(中間代謝) 성분(成分)인 phenylalanine, tyrosine, shikimic acid 함량(含量)은 저온처리(低溫處理)에 의하여 크게 증가(增加)하고 있으니 shikimate 계로(系路)가 활발(活潑)해지는 것으로 짐작된다. (4) 효소(酵素)에 대(對)한 특이적(特異的)인 조해제(阻害劑)와 호흡기질(呼吸基質)의 조직(組織) 호흡(呼吸)에 미치는 조해(阻害) 및 첨가(添加) 효과(效果)를 측정(測定)한 결과(結果) 저온처리(低溫處理)에 의하여 고추종자(種子)의 당(糖)은 EMP 계로(系路)를 활발히 움직이다가 이에 연결(連結)되는 TCA cycle에 jaming이 일어남에 따라 phosphoenolpyruvate와 erythrose-4-phosphate가 활발히 결합(結合)하고 shikimate 계로(系路)가 활발해져서 polyphenol 물질(物質)이 활발히 생합성(生合成)된다는 것을 추정(推定)할 수 있었다. (5) 저온처리(低溫處理)에 의하여 고추종자(種子)의 K ion 유출량(流出量)이 증가(增加)하였기에 갈변(褐變)에 따라 원형질막(原形質膜) 이상(異常)이 생긴 것을 짐작 할 수 있었다.
Park, Chang-Hun;Park, Chang-Hun;Lee, Youn-Jin;Lee, Sang-Yup;Oh, Han-Bin;Lee, Jin-Won
Bulletin of the Korean Chemical Society
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제32권2호
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pp.524-530
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2011
In the present study, we demonstrate that SRM LC-MS/MS method developed by Luo et al. (ref. 10) can be successfully applied to the quantitative analysis of intracellular metabolites in E. coli that are collected at the exponential and stationary growth phases. A focus is given on measuring the changes in the concentrations of intracellular metabolites in batch cultures, which were induced during both the dynamically changing exponential and stationary growth phases. The following intracellular metabolites are quantified in the exponential and stationary phases of E. coli growth, using the SRM mode of a triple quadrupole mass spectrometer: glucose-1-phosphate, fructose-1,6-bisphosphate, phosphoenolpyruvate, pyruvate, acetyl-coenzyme A, 6-phosphogluconate, ribulose-5-phosphate, xylulose-5-phosphate, erythrose-4-phosphate. The determined intracellular metabolite concentration profiles are shown to be in a good agreement with the growth profiles of E. coli, which clearly indicates that SRM LC-MS/MS can be successfully used for following the metabolite changes induced at different growth stages.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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