To evaluate the feasibility of mucosal delivery of thyrotropin releasing hormone (TRH) through various mucosae, enzymatic degradation and stabilization of TRH in the nasal, rectal and duodenal extracts of rabbits were studied. TRH in the extracts was assayed by HPLC and its degradation was found to follow apparent first-order kinetics. The residual concentrations of TRH in the mucosal extracts of nasal, rectal and duodenal segments after 24 hr of incubation were found to be $65.1({\pm}1.1),\;19.7({\pm}2.7)$ and 0%, and in the serosal extracts, $65.6({\pm}5.5),\;75.2({\pm}1.1)$ and $68.7({\pm}1.4)%$, respectively. This result suggests that there is a significant difference in the activity of TRH-degrading enzymes among the sites of administration. The inhibition of TRH degradation in the mucosa extracts was kinetically investigated using various additives such as thimerosal, benzalkonium chloride, disodium edetate, ${\sigma}-phenanthroline$, dithiothreitol and dithioerythritol, and $IC_{50}$ values of inhibitors were calculated. The results obtained showed that thimerosal (0.5 mM) and benzalkonium chloride (0.141 mM) protected TRH from the enzymatic degradation in all the mucosa extracts more than 95% after 24 hr of incubation.
The antioxidative activity of various enzymatic extracts from leaves of Perilla frutescens var. japonica was evaluated by measuring 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl, and alkyl radical scavenging activity using an electron spin resonance (ESR) spectrometer. For this study, the leaves were enzymatically hydrolyzed by 8 carbohydrases (Dextrozyme, AMG, Promozyme, Maltogenase, Termamyl, Viscozyme, Celluclast, and BAN) and 9 proteases [Flavourzyme, Neutrase, Protamex, Alcalase, PP-trypsin (trypsin from porcine pancreas), papain, pepsin, $\alpha$-chymotrypsin, and BP-trypsin (trypsin from bovine pancreas)]. The DPPH radical scavenging activities of Promozyme and Alcalase extracts were the highest, and the $IC_{50}$ values were 77.25 and $109.66\;{\mu}g/mL$, respectively. All enzymatic extracts of the leaves scavenged hydroxyl radical, and the $IC_{50}$ values of Celluclast and pepsin extracts which were the highest activity were 243.34 and $241.86\;{\mu}g/mL$, respectively. The BAN and $\alpha$-chymotrypsin extracts showed the highest scavenging activities, and the $IC_{50}$ values were 21.13 and $33.23\;{\mu}g/mL$, respectively. The pepsin extracts from the leaves showed protective effect on $H_2O_2$-induced DNA damage. In addition, the pepsin extracts decreased cell death in PC-12 cells against $H_2O_2$-induced oxidative damage. The findings of the present study suggest that enzymatic extracts of the leaves possess antioxidative activity.
본 연구에서는 기능성이 높은 참죽을 효소를 이용하여 추출하고 각 효소에 따른 추출물의 기능성 성분의 함량 및 산화방지 활성을 측정하였다. Viscozyme 추출물이 가장 높은 수율을 보였으며, AMG 효소 추출물을 제외한 효소 처리군이 효소 비처리군에 비해 유의적으로 높은 polyphenol 및 flavonoid 함량을 나타내었다. DPPH 라디칼 소거능은 Viscozyme 추출물이 가장 높았으며, 그 다음 AMG, Shearzyme, Celluclast 추출물의 순으로 높았다. ABTS 라디칼 소거능은 추출물을 희석했음에도 불구하고 모든 처리군에서 90% 이상의 높은 활성을 보였다. $Fe^{2+}$ 킬레이트 효과는 Viscozyme 추출물이 가장 높은 활성을 보였으며, 그 다음 Shearzyme, Celluclast, 비효소, AMG 추출물 순으로 나타났다. 환원력은 Shearzyme과 Viscozyme 추출물이 가장 높았으며, 그 다음으로 비효소, AMG, Celluclast 추출물 순으로 나타났다. 이상의 결과에서 효소를 이용하여 참죽을 추출할 경우 효소를 처리하지 않는 경우에 비해 높은 산화방지 활성을 나타내었으며, 특히, Viscozyme 처리 시 가장 높은 수율과 산화방지 활성을 나타내어 참죽의 기능성 식품 소재화를 위해 기능성 성분 추출 시 효소의 이용을 기대할 수 있을 것으로 판단된다.
Pylaiella littoralis was collected in the Chuuk lagoon of the Federated States of Micronesia (FSM). The FSM has a variety of coral reef ecosystems, which provide essential materials, such as minerals, vitamins, essential amino acids, for marine organisms. In this study, the antioxidant activities of ethanol and enzymatic extracts of P. littoralis were evaluated by measuring their scavenging activities on DPPH free radical, Alkyl radical, hydroxyl radical and cell viability. The enzymatic extracts were hydrolyzed to prepare water soluble extracts by using five carbohydrate degrading enzymes (AMG, Celluclast, Termamyl, Ultraflo, and Viscozyme) and five proteases (Alcalase, Flavourzyme, Kojizyme, Neutrase, and Protamex). As a result, the enzymatic extracts prepared by Flavourzyme, Ultraflo, and Kojizyme exhibited the greatest effects in DPPH free radical, alkyl radical scavenging activity and cell viability. Also, these enzymatic extracts had a higher antioxidant effect then commercial antioxidants in DPPH free radical and Alkyl radical scavenging activity. This study suggests that P. littoralis might be a useful source of natural antioxidants for the development of dietary supplements.
The antioxidative activity of various enzymatic extracts from Sarcodon aspratus (S. aspratus) was evaluated by measuring 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), and alkyl radical scavenging activity using an electron spin resonance (ESR) spectrometer. For this study, the S. aspratus were enzymatically hydrolyzed by seven carbohydrases (Viscozyme, Celluclast, Dextrozyme, AMG, Promozyme, Maltogenase, and Termamyl) and eight proteases (${\alpha}$-chymotrypsin, Alcalase, Flavourzyme, Neutrase, papain, pepsin, Protamax, and trypsin). The DPPH radical scavenging activities of Viscozyme and pepsin extracts were the highest, and the half maximal inhibitory concentration ($IC_{50}$) values were 0.896 and 0.734mg/mL, respectively. The Celluclast and trypsin extracts showed the highest scavenging activities on alkyl radical, and their $IC_{50}$ values were 0.278 and 0.575mg/mL, respectively. The Celluclast extracts was decreased cell apoptosis in PC-12 cells against $H_2O_2$-induced oxidative damage. The findings of the present study suggest that enzymatic extracts of S. aspratus exhibit antioxidative activity against oxidative stress on PC-12 cells.
제주지역에 서식하고 있는 블루베리 (Vaccinium corymbosum L.)로부터 수용성 추출물을 효과적으로 제조하기 위하여 5가지 종류의 탄수화물 분해효소 (AMG, Celluclast, Termamyl, Ultraflo, Viscozyme)와 또 다른 5종의 단백질 분해효소 (Alcalase, Flavourzyme, Kojizyme, Neutrase, Protamex)를 이용하여 효소적 추출을 시도하였다. 이들 효소를 이용하여 제조된 여러 가지 블루베리 효소 추출물에 대하여 1,1-diphenyl 2-picrylhydrazyl (DPPH), 활성산소종 (ROS), 일산화질소 $(NO{\cdot})$ 등의 소거 활성, 금속 킬레이트결합능, 그리고 지질 과산화 저해능과 같은 항산화 효과를 검토하였다. 모든 효소 추출물의 페놀함량은 $517.85\~597.96\;mg/100 g$ 건조시료이었으며, 항산화 효과에 대한 평가에서 특히 DPPH 및 $NO{\cdot}$ 소거활성, 그리고 금속 킬레이트 결합능 등이 우수한 것으로 나타났다. Viscozyme 추출물은 DPPH 소거활성 $(0.046{\pm}0.002\;mg/mL)$이, 그리고 AMG 추출물은 $NO{\cdot}$ 소거활성$(0.339{\pm}0.011\;mg/mL)$ 및 지질 과산화 억제활성 $(0.28{\pm}0.01\;mg/mL)$이 각각 우수하였다. 과산화 수소 소거활성에 있어서는 블루베리 효소 추출물들이 천연 항산화제인 a-토코페롤보다 상대적으로 높았다. 이러한 결과로 볼 때 블루베리는 항산화 효과가 우수한 화합물들을 함유하고 있을 것으로 판단되며, 향후 천연 항산화 자원으로서 이용이 가능할 것으로 사료된다.
3가지의 다당류 분해효소를 사용한 가수분해가 미역추출액의 상징액율, 고형분 수율, 점도에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 추출전에 효소분해할 때 고형분 농도를 27.31%, 고형분 수율을 14.04%까지 증가시켰다. 그러나 미역 분산액을 원심분리 후의 상징액율은 약간 낮았다. 추출액의 점도는 효소분해 초기에 유의적으로 증가하였다.
This study aimed to investigate the hepatoprotective activities of the sea cucumber products, including extracts and hydrolysates, in vitro and in vivo. Dried sea cucumber, produced on the western coast of Korea, was boiled in water or 70% ethanol at 85℃ or 100℃ for 18 or 24 h, respectively, to extract bioactive compounds. The enzymatic hydrolysates were prepared by reacting the dried sea cucumber with pepsin or neutral protease (PNL) under optimal enzyme conditions. The anti-inflammatory effect of the samples was investigated using RAW 264.7 cells treated with lipopolysaccharide (LPS). The amount of nitric oxide (NO) was produced from the cells treated with LPS and each sample was compared. Therefore, the pepsin hydrolysate treatment decreased NO production compared to LPS sole treatment. Furthermore, the effects of the samples on cell injury in the hepatic cell line and bisphenolA-induced hepatic injury mouse model were investigated. The water extracts and the pepsin hydrolysates of sea cucumber significantly inhibited cell injury generated in the hepatocytes without cytotoxicity (p < 0.05), whereas the ethanol extracts were cytotoxic. However, these results indicate that the extracts and the enzymatic hydrolysates derived from sea cucumber can be used as beneficial materials for inhibiting liver damage.
Allergen extracts from dust mites and cockroaches commonly found in Korean homes were used to evaluate their enzymatic activity as they are believed to influence allergenicity. Allergen extracts were prepared from 3 dust mite species (Dermatophagoides farinae, D. pteronyssinus, and Tyrophagus putrescentiae) and 3 cockroach species (Blattella germanica, Periplaneta americana, and P. fuliginosa) maintained in the Korea National Arthropods of Medical Importance Resource Bank. Proteins were extracted in PBS after homogenization using liquid nitrogen. The activities of various enzymes were investigated using the API Zym system. No significant difference in phosphatase, lipase, or glycosidase activity was observed among the 6 allergen extracts, but much difference was observed in protease activity. Protease activity was assessed in more detail by gelatin zymography and the EnzChek assay. Extract from T. putrescentiae showed the highest protease activity, followed by those of the cockroach extracts. Extracts from D. farinae and D. pteronyssinus showed only weak protease activity. Gelatinolytic activity was detected mainly in a 30-kDa protein in D. farinae, a 28-kDa protein in D. pteronyssinus, a > 26-kDa protein in T. putrescentiae, a > 20-kDa protein in B. germanica, and a > 23-kDa protein in P. americana and P. fuliginosa. The information on various enzymatic activities obtained in this study may be useful for future studies. In particular, the strong protease activity found in cockroach extracts could contribute to sensitization to cockroach allergens, which is known to be associated with the development of asthma.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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