• 한국수정란이식학회지
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• 제22권4호
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• pp.213-218
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• 2007

This study was performed to investigate the effect of VEGF on in vitro maturation of porcine oocytes. The base medium for IVM, TCM-199 was supplemented with 0.6 mM cysteine, 0.91 mM pyruvate, 10 ng/ml epidermal growth factor, $75{\mu}g/ml$ kenamycin, $1{\mu}g/ml$ insulin and 10% (V/V) porcine follicular fluid (pFF) as a Group A; Group B was consists of Group A plus 5 ng/ml VEGF; Group C was consists of replacement of pFF by 10% PVA and Group D: was consists of Group C plus 5 ng/ml VEGF. 1. The maturation rate was significantly higher (p<0.05) in control and VEGF+pFF group than other two groups ($76.1{\pm}9.6,\;78.9{\pm}6.0\;vs\;60.4{\pm}14.2\;and\;58.3{\pm}14.3$, respectively). 2. Addition of VEGF without pFF showed a negative effect on oocytes maturation and about 58.26% oocytes were reached to M-II stage. 3. In the parthenogenetic development, the cleavage rate was significantly higher (p<0.05) in control and VEGF+pFF group ($73.2{\pm}1.8\;and\;64.6{\pm}1.1$, respectively) than other groups ($47.9{\pm}1.8\;and\;48.3{\pm}1.7$, respectively). 4. The blastocyst formation rate was significantly higher (p<0.05) in VEGF+pFF group ($32.6{\pm}2.4$) compared to control and other groups. 5. There was no significant difference in cell numbers (inner cell mass or trophectoderm) among these groups.

• 한국수정란이식학회지
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• 제30권3호
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• pp.229-237
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• 2015

To improve the developmental potential of bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos, this study compared the developmental rates to blastocyst stage in the SCNT embryos using donor fibroblasts treated with 5-azacytidine (5AC) and S-adenosylhomocysteine (SAH) at different concentrations. Their reprogramming efficiency level was investigated with level of telomerase activity. Donor fibroblasts isolated from adult ear skin of a cow were exposed to 5AC and SAH at different concentrations during 2 passages. After nuclear transfer into enucleated recipient oocytes, the cleavage and developmental rates were significantly (p<0.05) decreased in the SCNT embryos using 5AC-treated fibroblasts (5AC-SCNT embryos), compared with those of non-treated control (control-SCNT embryos) and SAH-treated fibroblasts (SAH-SCNT embryos). The developmental rates to blastocyst stage tended to be slightly increased in the SAH-SCNT embryos at each of the concentrations, and especially, the developmental rates in the SCNT embryos using 1.0 mM SAH-treated fibroblasts were significantly (p<0.05) higher than that of control SCNT embryos. The mean numbers of total and ICM cell in blastocysts were also significantly (p<0.05) decreased in the 5AC-SCNT embryos, compared with those of other SCNT blastocysts. Further, the level of telomerase activity was also significantly (p<0.05) decreased in the 5AC-SCNT embryos than those of control and SAH-SCNT embryos. Whereas, a significantly (p<0.05) up-regulated telomerase activity was observed in SAH-SCNT embryos, compare with that of control-SCNT embryos. In conclusion, SCNT embryos using hypomethylated donor cells with SAH, not 5AC, may improve the developmental potential and reprogramming efficiency.

• 한국수정란이식학회지
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• 제16권3호
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• pp.193-201
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• 2001

본 연구에서는 DNA marker가 검정된 한우로부터 생산한 체외수정란을 이식하여 육질 및 육량의 유전적 능력이 우수한 한우를 대량생산하여 고품질 한우 쇠고기 생산 시스템을 구축하기 위한 전단계로서 DNA marker 검정 한우로부터 초음파유도 난포란을 채란하여 체외수성 및 수정란의 체외 발달에 미치는 각종 요인들과 배반포기 수정란의 부화율 개선을 위하여 투명대를 laser로 drilling을 실시하여 부화율을 조사하였다. 초음파유래 체외수정란의 분할률은 swim-up과 percoll 방법이 각각 75.0%(48/64) 및 71.4% (45/63)로써 이들간에 유의적인 차이는 없었고, 도축장유래 체외수정란의 분할율도 각각 69.9% (121/173) 및 62.2%(l12/180)로써 유의적인 차이가 없었다. 배반포기로의 발달율을 초음파유래 체외수정란이 25.0%(swim-up; 12/48) 및 22.2%(percoll; 10/45)로써 정자의 처리방법간에 유의적인 차이가 없었다. 초음파유래 체외수정란도 각각 29.8%와 28.6%로써 차이가 없었다. 초음파유래 난포란을 등급별로 분류하여 체외수정을 실시하였을 때 1(G I), 2(G II) 및 3(G III)등급 난포란의 분할율은 각각 60.0%(3/5), 69.2%(18/26) 및 62.1%(59/95)로써 이들간에 유의적인 차이는 없었으나, 4등급 난포란의 36.2%(25/69) 보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다. 배반포기로의 발달율은 1 및 2등급이 33.3% (1/3) 및 38.7%(7/18)로써 3 및 4등급의 16.9% (10/59) 및 4.0%(1/25)보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다 초음파유래 난포란을 체외수정 후 TFB, HT 및 HTB 배양액으로 체외배양을 실시하였을 때 분할율은 68.7%(55/80), 65.0%(13/20) 및 68.2% (15/22) 로써 유의적인 차이가 없었으며, 초음파유래 체외수정란의 배반포기로의 발달율은 TFB (25.5%), HT(23.1%) 및 HTB(20.0%)간에 유의적인 차이가 없었다. Laser system 으로 zona drilling을 실시한 EB, ExB 및 ExBO 수정란의 부화율은 각각 65.8%(25/38), 82.9%(29/35) 및 80%(16/20)로써 초음파유래 ExB 수정란이 가장 높게 나타났으며 (P<0.05), zona drilling 을 하지 않은 배반포기 수정란은 각각 25.0%(EB; 12/48) 및 35.7%(ExB; 15/42)로서 이들간에 유의적인 차이가 없었다. 그러나 zona drilling한 배반포기 수정란은 bona drilling을 하지 않은 배반포기 수정란에 비하여 부화율이 유의적(P<0.05)으로 높게 나타났다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제20권2호
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• pp.105-112
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• 2005

본 연구는 재래산양에서 복제 수정란의 생산효율을 향상시키기 위한 기초 자료를 제시하고자 체세포 핵이식을 실시하여 공핵세포의 종류, 핵이식란의 활성화 처리 방법 및 수핵난자의 조건이 체외발달율에 미치는 영향을 조사, 검토하여 핵이식란 생산을 위한 최적의 조건을 규명하고자 실시하였다. 공핵세포의 종류에 따른 핵이식란의 체외발달율은 융합이 이루어진 핵이식란의 활성화 처리 후 분할율은 귀 유래 섬유아세포를 공핵세포로 사용하였을 때가 $40.5\%$로서 태아 유래 섬유아세포를 공핵세포로 사용하였을 때의 $55.5\%$와 유의적인 차이가 없었다. 또한 상실배 또는 배반포기로의 발달율도 각각 $6.7\%$ 및 $16.0\%$로서 유의적인 차이가 없었다. 핵이식란의 활성화 방법에 따른 체외발달율은 ionomycin+6-DMAP 처리를 하였을 때 분할율은 $79.0\%$로서 전기자극을 주었을 때의 $9.5\%$보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다. 상실배 또는 배반 포기로의 발달율도 ionomycin+6-DMAP 처리를 하였을 때는 $15.6\%$가 발달하였으나, 전기 자극을 주었을 때는 4-세포기 이후로의 발달이 전혀 이루어지지 않았다. 체세포 핵이식란은 단위발생란에 비하여 분할율$(66.1\%\;vs\;59.18\%)$ 및 상실배 또는 배반포배로의 발달율$(19.0\%\;vs\;0.0\%)$이 유의적 (P<0.05)으로 낮았다. 단위발생란의 분할율은 체내 성숙난자에서 $86.8\%$로서 난포란의 $69.0\%$보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다 단위발생란의 상실배 또는 배반포기로의 발달율에 있어서도 체내 성숙난자$(50.0\%)$가 난포란$(23.6\%)$보다 유의적 (p.<0.05)으로 발달율이 높았다. 이상의 결과로 볼 때 재래산양의 체세포를 이용한 복제수정란의 생산효율을 향상시키기 위해서는 다수의 난자 확보를 위한 과배란처리 방법의 개선, 난포란의 이용효율 개선 및 활성화 처리방법 등이 확립되어야 하며, 후기배로의 발달율 향상을 위해서는 최적의 체외 배양조건 확립이 시급한 것으로 생각된다.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제12권1호
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• pp.124-134
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• 1995

Ham's F-10 기본 배양액과 이 배양액에 여러가지 농도의 EDTA와 태아제대혈청을 단독 또는 같이 혼합한 배양액을 얻어 각각의 배양액에서 5-10주된 백서를 이용하여 2 세포기 배아의 단계적 분할정도를 96시간 동안 관찰하였다. Ham's F-10 기본 배양액에 비해 태아제대혈청이나 EDTA $50{\mu}M$에서 $100{\mu}M$을 단독 또는 함께 첨가한 배양액에서 2 세포기의 배아의 상실배기 난할률이 매우 높았으며 (p<0.05), 포배기 난할률은 태아제대혈청과 EDTA $50{\mu}M$에서 $100{\mu}M$을 첨가한 배양액에서 유의하게 높았다(p<0.05). 체외수정실에서 흔히 사용되는 태아제대혈청을 첨가한 배양액과 비교시 태아제대혈청과 EDTA $100{\mu}M$을 첨가한 배양액에서 상실기 난할률이 유의하게 높았다(p<0.05). 태아제대혈청과 여러 농도의 EDTA를 첨가한 배양액과 EDTA만 첨가한 배양액의 비교에서 태아제대혈청과 EDTA $50{\mu}M$ 및 $100{\mu}M$을 첨가한 배양액에서 EDTA $200{\mu}M$만 첨가한 배양액에 비해 상실기 난할률이 매우 유의하게 높았고(p<0.05), 포배기 난할률은 태아제대혈청과 EDTA $100{\mu}M$을 첨가한 배양액이 EDTA $200{\mu}M$을 단독 또는 태아제대혈청과 함께 넣은 배양액에 비해 유의하게 높았다(p<0.05). 결론적으로 Ham's F-10 기본 배양액에 태아제대혈청과 적정 농도의 EDTA $50{\mu}M$ 및 $100{\mu}M$을 첨가한 배양액에서 초기 수정란의 분할이 우수함을 알 수 있고, 이는 수정란의 배양시 적절한 배양액을 선택할 수 있는 기초 자료로서 유용할 것으로 사료된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제20권4호
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• pp.459-465
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• 1997

본 연구는 핵이식의 시기가 융합과 체외발달에 미치는 영향을 조사하고 체외수정 공핵배의 핵과 체외성숙난자간에 전기융합의 최적 통전전압과 통전시간을 결정하기 위하여 시도하였다. 수핵난자는 체외성숙후 25~27시간에 제핵하였고 난자의 추가성숙을 위하여 융합전에 18~20시간 더 배양하였다. 공핵체외수정란은 16~32세포기까지 BOEC와 공배양하였다. 공핵배의 할구 이식시간은 조기핵이식구에서는 체핵후 1~3시간, 자연핵이식구를 체핵후 16~18시간이었다. 융합은 체외성숙후 43~45시간에 행하였다. 융합율은 할구 이식시기에 따라 차이가 없었으나 난할율과 8~16세포기 발달은 자연핵이식구에서 높았다. 융합, 난할 및 상실배 배반포 발달율은 1.0kV/cm보다 0.75kV/cm전압에서 높았으며 0.7kV/cm에서 상실배 배반포율은 17.6%였다. 통전시간에 따라 융합율은 차이가 없었으나 50$\mu$sec와 70$\mu$sec에서 난할율과 상실배-배반포 발달율이 다소 높았다. 본 결과에서 핵이식의 최적시기는 수핵난자의 체외성숙후 42~44시간이었으며 최적 전기융합 조건은 50~70$\mu$sec의 1회 0.75kV/cm임을 알 수 있었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제11권6호
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• pp.655-660
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• 1998

To produce blastocysts more efficiently, it is required to identity accurately the factors involving embryonic cleavage in the chemically defined medium. Effects of pyruvate, lactate, calcium and protein sources on early cleavage of bovine follicular oocytes were investigated. The percentage of IVF embryos cleaved to ${\geq}$ 2-cell or ${\geq}$ 8-cell was higher in pyruvate (+) and lactate (+) (48 or 14%) than in pyruvate (-) and lactate (-) (22% or 4%), than in pyruvate (+) and lactate (-) (28% or 5%) and than in pyruvate (-) and lactate (+) (40% or 10%). Lactate was more effective than pyruvate during early cleavage of bovine embryos in the chemically defined medium. The percentage of IVF embryo cleaved to ${\geq}$ 2-cell and ${\geq}$ 8-cell in calcium (-) (19 and 6%) was significantly (p < 0.05) lower than in calcium (+) (78 and 45%). The percentage of embryos developed to ${\geq}$ 2-cell showed no significant (p < 0.05) difference among BSA, 1 and 20% FBS (57, 57 and 57%). Also the percentage of A grade embryos developed to ${\geq}$ 2-cell showed no significant (p < 0.05) difference among BSA, 1 and 20% FBS (40, 35 and 28%). The percentage of embryos developed to ${\geq}$ 8-cell showed no significant (p < 0.05) difference among BSA, 1 and 20% FBS (33, 23, and 22%). However, the percentage of A grade embryos developed to ${\geq}$ 8-cell in BSA (24%) was significantly (p < 0.05) higher than in 1 and 20% FBS (13 and 8%). The percentage of embryos developed to ${\geq}$ morula showed no significant (p < 0.05) difference among BSA, 1, 10 and 20% FBS (76, 76, 80 and 68%). The percentage of A grade embryos developed to ${\geq}$ morula in 10% FBS (59%) was significantly (p < 0.05) higher than 20% FBS (43%). The percentage of embryos developed to blastocyst showed no significant (p < 0.05) difference among BSA, 1, 10 and 20% FBS (34, 41, 43 and 32%). However, the percentage of A grade embryos developed to ${\geq}$ blastocysts in 10% FBS (25%) was significantly (p < 0.05) higher than in 20% FBS (8%).

• 한국수정란이식학회지
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• 제21권4호
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• pp.345-351
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• 2006

본 연구는 항생제가 첨가되지 않은 돼지 혼합액상 정액을 17$^{\circ}C$ 정액 보관고에 보관하면서 보관일수의 증가가 따라 정자의 운동성, 정액 내 세균의 증식 여부 및 체외 수정란 생산 효율에 미치는 영향을 조사하고자 하였다. 정자의 운동성은 1일 (78.7$\pm$2.4%)에 비하여 3일(78.7$\pm$2.4%)과 5일째(64.8$\pm$2.4%)는 유의적으로(p<0.05) 낮은 운동성을 나타내었다. 보관일수에 따른 정액 내 세균수의 변화는 보관 5일이 $57.8\pm105.2\times10^4$ Cfu로 0일과 3일의 $32.1\pm76.8\times10^4$ Cfu와 $26.9\pm46.6\times10^4$ Cfu에 비하여 유의적인(p<0.05)증가를 나타내었다. 보관된 정액을 이용하여 체외 수정한 결과, 정상적인 수정(2PN)은 1일과 3일째의 66.0$\pm$2.7%와 64.0$\pm$2.7%에 비하여 5일째에는 56.0$\pm$2.6%로 유의적인(p<0.05) 차이를 나타내었다. 체외 수정란의 발달율에서 난할율은 1일째의 75.0$\pm$l.4%에 비하여 3일과 5일째는 70.0$\pm$0.3%와 71.0$\pm$0.3%로 유의적으로(p<0.05) 낮게 나타났으며, 상실배로의 발달율에 있어서 1일째는 32.0$\pm$1.4%의 발달율을 보였으나 3일과 5일째에는 28.0$\pm$1.3%와 24.0$\pm$1.3%로 유의적인(p<0.05) 감소치를 나타내었고, 배반포로의 발달율에 있어서도 1일에 15.0$\pm$1.0%에 비하여 3일과 5일은 11.0$\pm$0.9%와 8.0$\pm$0.9%로 유의적으로(p<0.05) 낮은 발달율을 나타내었다. 이상의 결과를 종합할 때 항생제가 첨가되지 않은 돼지 혼합 정액은 보관일수 3일째부터 정자의 운동성이 감소하고 세균수는 증가하였다. 또한 보존된 정액을 이용하여 체외 수정을 실시할 경우, 보관일수가 증가할수록 정상 수정율과 체외 발달율이 감소함으로 항생제를 첨가하지 않는 경우 3일 이상 정액을 보관하여 사용하지 않는 것이 바람직 하다고 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제48권2호
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• pp.153-159
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• 2008

Newcastle disease virus (NDV) is the causative agent of a highly contagious and devastating Newcastle disease of poultry. A NDV (isolate DK1/07) was isolated from apparently healthy wild spot-billed ducks (Anas poecilorhyncha) captured at upper branch of the SapGyo Creek in Chungbuk province, Korea during early 2007. The DK1/07 isolate of minimum chicken embryo lethal dose killed all SPF chicken embryos within 60 h. The cleavage site of the F protein possessed the amino acid sequence $^{112}R-R-Q-K-R-F^{117}$, which is a motif characteristic of virulent NDV strains. The F protein-based phylogenetic analysis revealed that the DK1/07 duck isolate was included in the cluster of genotype VIId and most closely related to recent NDV isolates obtained from chicken farms in Korea. Epidemiological importance of virulent NDV from wild duck is discussed.

• 한국가축번식학회지
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• 제18권1호
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• pp.7-13
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• 1994

To verify in vivo viability of IVF-derived bovine embryos, morula and blastocysts that developed from in vitro matured and fertilized ova were transferred to the uteri of recipient cows and normal calves were produced. To produce IVF-derived bovine morula or blastocysts, ova matured and fertilized in vitro were cultured in culture medium for 7~8 days at 39$^{\circ}C$ under the humicified atmosphere of 5% CO2. Two different culture systems, a co-culture system with TCM-199 and bovine epithelial cells (BOEC) and CR1aa without somatic cell support, were compared. Cleavage rates to 2~8 cell stage and developmental rates of IVF-derived bovine embryos to blastocyst stage were not different between co-culture system (51.3 and 14.0%) and CR1aa medium (60.4 and 22.1%), respectively. Embryos were classified into three grades by embryo quality and then one or two embryos in higher quality(A and B grades) were transferred to the uterus of recipients. In this study Korean Native calf was first born after transfer of IVF-derived embryos. Total four live calves were normally developed to term from IVF-derived bovine blastocysts and one female fetus was still-born approximatedly 8 months of gestation, but there was no pregnancy after transfer of morula. Therefore, normal calves could be produced after transfer of IVF-derived bovine embryos cultured in CR1aa medium without somatic cell support. In addition, our results suggest that in transfer of IVF-derived bovine embryos blastocyst stage is better than morula.