During the rapid phase of gonadal development of the freshwater teleost, the catfish (Silurus asotus), the influence of hCG upon the inducement of final oocyte maturation and spawning was investigated electrophoretically and ultrastructurally. The electrophoretic patterns obtained were different in the presence and absence of some of the major or minor zones, because of the hormone level in catfish. The vitellogenin of hormone-treated fish was stained more intensively than that of sham-treated fish. These proteins showed some minor or main bands of egg extracts which migrated at positions corresponding to molecular weights of approximately 90,000. However, the thickness of electrophoretic band in molecular weight for hCG-treated fish was slightly lower than that for saline control. It seemed the plasma protein with molecular weight of approximately 45,000 in hCG-treated fish disappeared. In contrast to the control fish, the ovaries in the catfish treated with hCG shows a marked ultrastructural change under the electron microscope. No dilated profiles were seen in the granulosa cells of the mature oocyte before ovulation. After germinal vesicle breakdown (GVBD), the zona radiata interna (ZRI) becomes more compact, and there is a loss of all the processes from the pore canals. There is a wide space between the vitelline membrane and zona radiata. Also, during final maturation, the microvillar processes from the oocyte are seen no longer to penetrate deeply into the extracellular spaces of the overlying granulosa cells, and the reticulate patterns of the zona radiata interna becomes occluded, giving the zona radiata a more solid appearance. It has been possible to initiate 100% oocyte maturation in yolk granules and follicles in vivo by treatment with hCG and a high water temperature ($27^{\circ}C$). In hCG-treated fish, the percentages of successful artificial fertilization and hatching were maximal at 15 h after a single injection. It seems clear that a long acting preparation containing hCG can be successfully used in prespawning fish to advance the final events of gonadal maturation and initiate spawning. Further studies are necessary to evaluate the potential of hCG to either stimulate or inhibit the reproductive development of fish at other stages of the seasonal reproductive cycle.
Isozyme PAGE에 의한 isozyme polymorphism 및 random amplified polymorphic DNA(RAPD) pattern의 비교를 통하여 한국에서 수집된 63개의 표고 버섯(Lentinus edodes)품종의 유연관계를 조사하여 보았다. NTSYS PC program을 통하여 비교에 사용되어진 3가지 isozyme 즉 esterase, peroxidase, acid phophatase 등은 각각 10, 7, 3개의 isozyme polymorphism type으로 나뉘어질 수 있었고, 이러한 3개의 isozyme type들은 group-average method를 이용하여 최종적으로 6개의 집단으로 구분되어질 수 있었다. 또한 RAPD를 통한 표고 품종간 유연관계 비교는 사용되어진 총 20개의 random primer 들중 3개의 primer(OPA 03, OPA 18, OPA 19)가 품종간 polymorphism을 보였고 사용되어진 전체 random primer의 PCR product들의 집단 분석을 통해 최종적으로 5개의 집단으로 구분할 수 있었다. 사용되어진 두 가지 방법 즉, isozyme polymorphism및 RAPD pattern에 의해 구분되어진 63개 표고 버섯 품종의 subgroup level에서의 절대적인 유사성은 관찰할 수 없었다. Yii-Mattila(1996) 등에 의하면 품종간 비교시 isozyme analyses에서와는 달리 RAPD analyses에서는 많은 수의 strain-specific band들이 얻어질 수 있고 이것이 두 방법간의 유사성을 관찰하지 못하게 하는 원인이라고 보고하였다.
이탈리안 라이그라스 37개 품종을 대상으로 ADH와 Esterase 의 Isozyme을 Starch gel 전기영동법을 이용하여 분리한 후 염색하여 품종간 band 의 차이점을 비교하였다. 1. ADH isozyme은 Rf 0.60과 0.63 두 개의 band zone으로 나타났으며 Rf0.60이 main band이었다. 2. ADH isozyme의 banding pattern은 5개의 type으로 구별이 되었는데 type I은 7개품종, type II는 2개 품종, type III는 6개 품종, type IV은 18개 품종, type V는 4개 품종이었다. 3. Esterase isozyme은 Rf 1.00으로 한 개의 band만 나타났다. 4. Esterase isozyme의 banding pattern은 3개 type으로 구별되었는데 type I은 22품종, type II는 8품종, type III는 7개 품종이었다. 5. ADH와 Esterase isozyme의 banding pattern 으로 본 이탈리안 라이그라스의 품종별 차이는 없으나 염색 강도에 따라 일부 품종의 변이를 구분할 수 있었다.
Cyclic AMP-mediated signaling pathways regulate a number of cellular functions. In this study, we examined the regulatory role of cAMP signaling pathways in chondrogenesis of chick limb bud mesenchymal cells in vitro. Forskolin, which increases cellular cAMP levels by the activation of adenylate cyclase, enhanced chondrogenic differentiation. Inhibition of PKA with specific inhibitors (H89 or KT5720) blocked pre-cartilage condensation stage, indicating that chondrogenesis is regulated by the increase in cellular cAMP level and subsequent activation of PKA. Downstream signaling pathway of PKA leading to gene expression was investigated by examination of several nuclear transcription factors. Forskolin treatment increased transcription level for a cartilage-specific marker gene Sox9. However, inhibition of PKA with H89 led to restore expression of Sox9, indicating PKA activity was required to regulate the expression of Sox9 in chondrogenesis. In addition, CREB was highly phosphorylated at early stage of mesenchyme culture, and followed by progressive dephosphorylation. CBP and ATF, another CRE related proteins were transiently expressed at the early stage of chondrogenesis with a pattern similar to CREB phosphorylation. Electrophoretic mobility shift assays confirmed that the binding activity of CREB to the CRE is closely correlated to the phosphorylation pattern of CREB. Therefore, cAMP-mediated signal transduction to nuclear events for the induction of genes appeared to be required at the early stage of chick limb bud chondrogenesis.
The solubilization and proteolytic process of $\delta $-endotoxin was analvsed to compare the biochemical property of the toxin isolated from B. thuringiensis subsp. sotto. The purified crystals were dissolved in 50 mM carbonate buffer containing 10 mM dithiothreitol at pH 10 for various times. The electrophoretic pattern showed that a rapid disappearance of 138 kDa protein band. This disappearance of protein with high molecular weight was accompanied by the appearance of new protein fragment with 104 kDa, 60 kDa, and 25 kDa. For proteolvtic processing, the soluble crystals were digested with trypsin for various times. The soluble crystal protein of 104 kDa was completely disappeared. However, the protein fragment of 60 kDa and 25 kDa still remained after complete proteolysis. The comparative immunoblot analysis showed that the antiserum against intact crystals showed strong immunoreactivity to the homologous inclusion protein of 138 kDa, 104 kDa, and 25 kDa, and to the intact spores of 221 kDa and 138 kDa, but not to the vegetative cell homogenate. The sera against crystals and spores had no immunoreactivity to the vegetative cell homogenate.
A total of 6 tamaraws were observed for determining coat color and measured for body conformation. Banding pattern of 4 blood proteins and 2 isozymes were analysed from the peripheral blood of two tamaraws. The coat colour of younger tamaraws were observed to be brown and adult was found to be complete black. The body weight, body length, withers height, head length, head width, horn length and tail length of adult male and female tamaraws were: 236 kg and 208 kg; 113.5 cm and 112.5 cm; 19.5 cm and 20 cm; 30.0 cm and 28.5 cm and 36.0 cm and 35.5 cm, respectively. The electrophoretic banding pattern, distance migrated and the allelic frequencies obtained in tamaraws were similar compared with that reported in swamp buffaloes. Although the sample size was very small, results of this study could be an important source of informations based on which a breeding programme can be designed to exploit some of the economic characters of tamaraw.
네품종의 보리(올보리, 영산보리, 사천 6호, 수원 228호)로 부터 Osborne의 방법과 이것을 변형한 전보의 방법으로 단백질을 분획하여 albumin, globulin, hordein 및 glutelin 획분을 얻어 이들 각획분들을 SDS-PAGE로 분석한 결과 품종간 polypeptide 조성 차이를 관찰할 수 있었으며 특히 hordein과 hordein-I을 pH 3에서 PAGE를 수행 하였을 때 각 품종사이의 pattern에 명확한 차이를 볼 수 있었다. 한편, hordein-I의 아미노산조성은 glutamic acid와 proline 함량이 높았으나 품종간의 아미노산조성차이는 거의 볼 수 없었다.
본 연구는 세포간극물질을 추출코자 실시하였다. 2. Vacuum flask에 물을 넣은 후 볏잎을 물에 잠기게 하고, 280mb로 기압을 줄여 벼조직의 세포간극내의 공기를 뺀 후 Vacuum을 끊고 증류수로 세포간극을 채운다. 볏잎에 묻은 증류수를 제거하고 본 연구에서 사용한 leaf holder에 끼워 3,000rpm으로 5분간 원심분리하면 세포간극물질만 채취할 수 있다. 3. 세포내물질과 세포간극물질의 성분분석 및 Peroxidase와 Easterase의 isozyme pattern을 비교한 결과 내용성분의 함량이 서로 다르고 효소의 활성과 isozyme pattern이 다르게 나타나 세포간극물질 추출액 속에는 세포내물질이 혼입되어 있지 않음을 증명하였다.
A study was conducted to monitor the changes in serum protein profile, cholesterol and blood glucose during endotoxic shock in buffalo calves and also to assess the role of prophylactic supplementation of vitamin E and selenium in alleviating the endotoxic effects. Fifteen male buffalo calves (6-8 months of age) were divided into three groups: Group I (control)-infused with 0.9% saline solution; Group II-infused with E. coli endotoxin at 5${\mu}g/kg$ body weight in normal saline solution; Group III- supplemented prophylactically with 250 mg vitamin E and 7.5 mg selenium by i/m injections at weekly intervals for one month prior to the induction of endotoxic shock. The blood samples were collected at 0, 1, 3, 6, 9, 12, 24, 48 and 72 h after the induction of shock. Endotoxin caused a significant (p<0.05) hypoproteinemia from 3-12 h post infusion in group II but this hypoproteinemia was less pronounced and only from 3-9 h post infusion in vitamin E and selenium supplemented calves. Hypoglycemia was observed in group II from 3-24 h and blood glucose level returned to normal at 72 h. However hypoglycemia was mild in group III and blood glucose returned to normal at 48h. Hypocholesterolaemia and hypoalbuminemia were found in both groups II and III but these changes were less pronounced in group III i.e. vitamin E and Se supplemented calves. Serum electrophoretic protein patterns of group III were quite similar to those of control group but animals of group II had different electrophoretic pattern. It was concluded that the antioxidant effects of vitamin E and Se prevent the liver against oxidative stress during endotoxic shock.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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