Polyclonal antibodies against human DNA-dependent RNA polymerase II (HPP II) were generated from chicken egg yolk after immunization with RNA polymerase II as an antigen. The antibodies from egg yolk (IgY) were purified and characterized. IgY showed a specificity against DNA-dependent RNA polymerase II, and was a polyclonal antibody against 12 subunits of polymerase II. An amount of 0.35 mg of IgY was obtained freman HPP II-Sepharose affinity column using 10 eggs from a chicken immunized against RNA polymerase II as an antigen. These antibodies can be used for isolating the genes for RNA polymerase II components, and for in vitro transcription assays using HP-RNA polymerase II.
The dietary carbohydrates are mainly digested and adsorbed at small intestine. We developed a new food additive as an egg yolk antibody(1gY) against maltase, sucrase and sodium dependent g1ucose cotransporter(SGLT) for the regulation of blood glucose level and weight control. The maltase, sucrase and SGLT were purified from porcine small intestine which is very similar to that of human in physiological characteristics. The purification step contained an ultracentrifugation, ion exchange chromatography and hydrophobic chromatography. The hens were immunized by purified protein and the IgY activities against immunized antigens were determined. This antibody obtained from the immunized hen's egg yolks directly inhibited the activities of maltase and sucrase in vitro. And the IgY delayed and decreased the increment of blood g1ucose level after administration of maltose, sucrose and glucose in rat about 30 to 60%. The results of this study suggest that the IgY inhibiting the carbohydrate digestion could be used as functional food materials for weight control and regulation of blood glucose level in diabetes.
Kim, Mujo;Shinji Higashiguchi;Yoshitomo Iwamoto;Yang, Han-Chul;Cho, hong-Yon;Hsjime Hatta
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제5권2호
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pp.79-83
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2000
A han transfers her serum immunoglobulin G to the agg (IgY) and gives immunity to her offspring. Therefore, The hen agg can be an effective supplier of a large amount of antigen specific antibody that accumulates in the egg yolk. Antigen specific antibody has been widely used for immunological analysis in the field of diagnosis as well as pure scientific research. The production and separation technology of IgY is demonstrated in the present study.
Swine respiratory diseases have induced severe economic lasses in swine industry worldwide. Therefore, several methods have been made and applied to prevent and control the diseases. However, these methods still have a problem and also induce side effects. Recently, the use of egg yolk antibody was introduced to control and prevent the diseases as one of new trials. As a study of using egg yolk antibody, antibody titers against several different antigens of major pathogens in swine respiratory diseases were compared in egg yolk and serum of hens immunized with those antigens. The titers were measured by ELISA using the antigens as coating antigens. The relationship in antibody titers between egg yolk and serum were identified by analysis of variance for linear regression. Almost of antigens used in this study showed the high relationship in antibody titers between egg yolk and serum (r = 0.87 ~ 0.93) even though the relationship in antibody titers against P. multocida A:3 IROMP was slightly low (r = 0.74)(P<0.01). These results indicated that antibody titer in egg yolk could be useful to predict the titer in serum of chicken.
가금 및 가축의 살모넬라중을 일으키는 에서 편모항원을 순수분리하고 이를 면역원으로 산란계에 면역하여 난황 중에 형성된 항체와 혈청간에 면역 반응을 조사하고 생산된 에 대한 특이난황 항체의 특이성 검사와 항체회수율 검사를 실시한 결과S. enteritidis는 다음과 같다. 1. S. enteritidis에서 순수 분리한 flagella protein 의 분자량은 54.6 kDa으로 나타났다. 2. 산란계의 혈청중 항체가 형성은 면역 후 2주경부터 급격히 증가하기 시작하여 6주경에 최고의 항체가 수준에 도달하였다. 반면에 난황중 항체가는 면역 후 4주경부터 급격히 증가하기 시작하여 6주경에 혈청항체가 수준과 동일하게 도달되며, 10주 이후에는 혈청항체가 수준보다 높게 형성되어 일정한 수준을 유지하였다. 3. S. enteritidis의 flagella protein을 면역원으로 산란계에 면역하여 생산된 난황항체는 주로 S. enteritidis 균주에서만 특이적으로 반응하며 E. coli (Kl2:K99, K88+, 987P) 균체에서는 반응이 전혀 없는 것으로 나타났다. 4. 한개의 난으로부터 분리한 IgY의 함량은 106 mg이었으며 회수율은 88.3%였다.
This experiment was carried out to investigate the effects of the laying hens on the immune response against bovine serum albumin(BSA) in egg yolk. Total 45 laying hens were divided into three groups according to breeds (White Leghorn, ISA Brown, Native hen). They were fed the experimental diet for 12 weeks. Immune response were examind in egg yolk from three groups of hens injected with BSA. The results obtained from this work were summaried as follows : 1. The weight of egg yolk and the percentage of hen-day production in the ISA Brown hens are greater than those in the Native hens and the White Leghons. 2. IgY concentrations in eggs from hens immunized with BSA were not different among the breeds laying hens. 3. The anti-BSA antibody activities determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in the egg yolk were similar between the White-Leghorn and ISA Brown hens, but Native hens tended to decrease in 20∼50 days respectively. Therefore, the weight of egg yolk and the percentage of hen-day production in the ISA Brown hens are greater than those in the Native hens and the White Leghons will be as important factors for an efficient production of IgY.
It has been recognized that the hen, like its mammalian counterparts, provides young chicks with antibodies as protection against hostile invaders. This system facilitates the transfer of specific antibodies from serum to egg yolk, and provides a supply of antibodies called immunoglobulin Y(IgY) to the developing embryo and the hatched chick. The protection against pathogens that the relatively immune-incompetent newly hatched chick has, is through transmission of antibodies from the mother via the egg. Egg yolk, therefore, can be loaded with a large amount of IgY against pathogens which can immobilize the existing or invading pathogens during the embryo development or in day-old chicks. Thus, the immunization of laying hens to various pathogens results in production of different antigen-specific IgY in eggs. Egg yolk contains 8∼20 mg of jmmunoglobulins (IgY) per ml or 136∼340 mg per yolk suggesting that more than 30 g of IgY can be obtained from one immunized hen in a year. By immunizing laying hens with antigens and collecting IgY from egg yolk, low cost antibodies at less than $10 per g compared to more than $20,000 per g of mammalian IgG can be obtained. This IgY technology opens new potential market applications in medicine, public health, veterinary medicine and food safety. A broader use of IgY technology could be applied as biological or diagnostic tool, nutraceutical or functional food development, oral-supplementation for prophylaxis, and as pathogen-specific antimicrobial agents for infectious disease control. This paper has emphasized that when IgY-loaded chicken eggs are produced and consumed, the specific antibody binds, immobilizes and consequently reduces or inhibits the growth or colony forming abilities of microbial pathogens. This concept could serve as an alternative agent to replace the use of antibiotics, since today, more and more antibiotics are less effective in the treatment of infections, due to the emergence of drug-resistant bacteria.
This study was carried out for production of neutral antibody to bee venom $(anti-phospholipase\;A_2IgY)$. Hen layings were injected repeatedly with bee venom and phospholipase $A_2$ with Freund's adjuvant. Specific antibody in egg yolk from immunized hen laying was separated, and purified, also immunological characteristics of anti phospholipase $A_2\;IgY$ was invested. The results were summarized as follows: 1. Phospholipase $A_2$ was showed single band at molecular weight 17,000 in SDS-PAGE and bee venom was showed two band at molecular weight 17,000 and under molecular weight 6,500 in SDS-PAGE. 2. During 70 days after hen immunized with bee venom and phospholipase $A_2$, antibodies(anti-bee venom IgY) to bee venom were showed poor ELISA value in egg yolk, but antibodies$(anti-Phospholipase\;A_2IgY)$ to phospholipase $A_2$ in egg yolk were increased ELISA value from 8 days or 15 days and found maximum ELISA value at 42 days. Also after booster at 49 days, ELISA value of anti Phospholipase $A_2\;IgY$ in egg yolk was supported at optical density(O.D) 1.0 level, continuously. 3. Titer of phospholipase $A_2\;IgY$ was showed 1: 32,000. 4. In double immunodiffusion test to phospholipase $A_2$ after double dilution of anti-phospholipase $A_2\;IgY$, only precipitation line was made in 1:1 dilution well of anti-Phospholipase $A_2\;IgY$. But In immunodiffusion test to anti-phospholipase $A_2\;IgY$ after double dilution of phospholipase $A_2$, Precipitation line to 250ul/ml well of phospholipase $A_2$ was showed. In double immunodiffusion test to bee venom(1mg/ml) after double dilution anti-phospholipase $A_2\;IgY$, all well without 1:32 dilution well were showed strong precipitation line. 5. In dot bloting test to anti-phospholipase $A_2\;IgY$ after diluting bee venom(0.5mg/ml), dot bloting color was showed clearly to $1/100(5{\mu}g/ml)$ in bee venom.
Immunoglobulins (IgY) were isolated from egg yolk of hens immunized with bovine serum albumin(BSA). The stability of anti-BSA IgY against heat and pH was investigated. Antibody activity was measured by enzyme linked immunosorbent assay. IgY was relatively heat-stable and most of the antibody activity remained after heating up 65$^{\circ}C$ for 30 minutes. IgY was stable at pH 5-11. However, inactivation of IgY was observed below pH 4, or above pH 12. Inactivation of IgY proceeded rapidly at low pHs(pH 2-3). Most of the antigen binding activity was lost at low pHs probably because of some conformational changes.
본 연구는, Vibrio parahaemolyticus에 대한 면역 글로블린 Y(IgY)를 생산하기 위하여 시행되었다. Vibrio parahaemolyticus는 중요한 병원성 균이며, 위장염을 유발시키는 원인 균이다. 따라서, 난황에서 Vibrio parahaemolyticus에 대한 항체를 생산하기 위하여 항원 LPS(lipopolysaccharide)를 암탉에 주사하였다. 면역은 2주 간격으로 4차까지 실시하였으며, 추가면역으로 2주 간격으로 3차까지 실시한 후 ELISA로 그 항체 역가를 측정하였다. 난황에서의 항체생성은 1차 면역 후 1주일부터 나타나기 시작하였으며, 7주에 최고 역가에 도달하였고, 이러한 역가는 13주 이후까지 지속되는 것으로 나타났다. 한편 혈청에서의 항체 역가도 난황에서의 경향과 유사하였다. 정제시킨 IgY를 본 연구의 water-dilution방법과 상업용 IgY분리 kit로 그 정제 정도를 비교해본 격과 큰 차이를 나타내지 않았으며, Vibrio parahaemolyticus외의 다른 Vibrio 속 및 세균들과의 교차반응성 조사에서 특별한 교차반응이 없었다. 본 연구에 나타난 결과로, 아주 적은 양의 LPS 항원으로 역가가 높은 항체의 생산이 가능하였으며, 이러한 결과들로 보아 난황은 유행성 위장염을 유발하는 병원성 균의 특이 항체 개발을 위한 좋은 공급원이 될 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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