To control the maximum residue level (MRL) for sulfamethazine (SMZ) residues in pork tissue, a microbial inhibition method is a regulatory screening assay method in Korea. Microwell plate-based competitive enzyme immunoassay (ELISA) kit is avalable for routine screening of SMZ residues in pork tissue. One ELISA kit is evaluated. Phosphate buffer extracts of samples fortified with SMZ at 0, 1, 5, and 10 ng/g were used in a recovery test of the kit. Market pork samples were assayed by the kit. Recovery of sulfamethazine was 104% at 10 ng/g. Intraassay variations and interassay variations for the kit were 7.70% and 5.76%, respectively. Concentration causing 50% inhibition of color development compared with blanks was 16.4ng. The violative pork samples with over MRL (0.1 $\mu\textrm{g}$/g) was 4 of 32 cases (12.5%) by used ELISA kit. This result indicates a possibility of the ELISA kit for screening test of SMZ residues in pork tissue, and still needs a comfirmatory assay for mandatory purposes.
폐흡충증의 진단을 위하여 근자에 효소면역측정 법(ELISA)이 널리 쓰이고 있다. 이 논문에서는 폐흡충 항원에 대한 단클론항체를 제조하고 이를 효소면역억제측정 법 (ELISA-Inhlbltlon test)에 응용하여 효소면역측정 법의 특이도를 더욱 높이고자 하였다. 폐흠충 성충의 수용성 항원으로 면역한 BALB/c 마우스의 비장세포와 형질세포종세포를 융합하여 림프잡종세포를 만들고 이 중에서 폐흡충 항원에 대한 특이 단클론항체를 생성하는 하나의 림프잡종세포를 선택하였다. 이는 Pwa-14라고 이름지워졌는데, EITB상 28 kDa, 42.5 kDa, 89 kDa, 120.5 kDa 항원대에 반응하였으며, 간접 면역항체법으로 반응하는 항원의 위치가 난황선임을 확인하였다. 폐흡충 항원을 사용한 통상적인 효소면역측정법에 폐흡충 감염자 22명의 혈청은 모두 양성 반응을 보였으며, 간흡충 감염자 40명 중 5명(12.5%), 유구낭충 감염자 26명 중 3명(7.7%)은 양성을 나타내 교차 반응을 보였다. 이 때, 스파르가눔 감염자 10명 및 정상 대조군에서는 양성 반응을 보이는 혈청이 없었다. 특이 단세포군항체를 이용한 효소면역 억제측정법으로 측정한 결과, 폐흡충 감염자는 모두 양성반응을 보였으나, 유구낭충, 스파르가눔 감염자의 혈청은 교차 반응을 보이지 않았다. 이상의 결과로 보아 폐흡 충의 면역 진단 시, 폐흠충 특이 단클론항체를 이용한 효소면역 억제측정 법은 통상적인 효소면역측 정법에 비하여 더 높은 특이도를 보임을 알 수 있었다.
This study was conducted to investigate the similarity between hemagglutination inhibition (HI) test and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), the HI titer and mean ratio S/P ratio) of avian influenza virus. To perform this study, the 1,457 sera of layers 21 farms in May, July and September, respectively. As a result of HI test, positive rates were 480 to 422 (92.1%) in May, 494 to 394(79.8%) in July and 483 to 402(83.2%) in September, and the mean antibody titer were 4.6, 4.3, 4.0 to 0.3 decreased, respectively. The positive rates by ELISA, 480 to 475(99.0%) in May, 494 to 485(98.2%) in July, 483 to 472(97.7%) in September, and the mean S/P ratio were 2.319, 2.557 and 2.380, respectively. The result of HI test and ELISA positive 480 to 422(92.1%), 475(99.0%), 494 to 394(79.8%), 485(98.2%) and 483 to 402(83.2%), 472(97.7%). Therefore, ELISA was shown more sensitive compare the HI titers.
유구낭미충 항원에 대한 단세포군항체를 제조하여 그 특성을 분석하고, 이를 효소면역억제측정법 (ELISA-inhibition test)에 응용함으로써 통상적인 효소면역측정법(ELISA)의 특이도를 더욱 높이고자 하였다. 유구낭미충의 두절항원으로 면역한 BALB/c 마우스의 비장세포와 형질세포종세포를 융합하여 림프잡종세포를 만들고, 이 중에서 유구낭미충 항원에 대한 특이 단세포군 항체를 생성하는 4개의 림프잡종세포군을 선택하였다. EITB상 Cya-1 단세포군항체는 25.5 kDa, Cya-7은 28 kDa, Cya-28은 87.5 kDa, Cya-31은 12.5 kDa 항원대에 각각 반응하는 것을 알 수 있었다. 간접면역 형광항체법으로 Cya-1는 칼슘소체에, Cya-7은 실질조직에, Cya- 28과 Cya-31은 충체 표피에 주된 반응을 나타내고 있었다. 유구낭미충 항원을 사용한 효소면 역측정법으로는 유구낭미충 감염자 28명의 혈청 중 23명 (82. l%)이 양성 반응을 보였으며 폐흡충 감염자 31명 중 6명(19.4%), 스파르가눔 감염자 9명 중 1명(11. l%)이 교차 반응을 보였다 반면, 특이 단세포군항체 Cya-7를 이용한 효소면역 억제측정법으로는 유구낭미충 감염자는 28명 중 19명 (67.9%)이 양성반응을 보였고, 다른 기생충 감염자 혈청과의 교차 반응은 관찰되지 않았다.
Park, Mi-Ja;Joh, Seong-Joon;Choi, Kang-Seuk;Kim, Aeran;Seo, Min-Goo;Song, Jae-Young;Yun, Seon-Jong
대한수의학회지
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제56권3호
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pp.189-192
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2016
The virus neutralization (VN) test was used to determine potency of the infectious bronchitis (IB) vaccine. The results of VN, hemagglutination inhibition (HI), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were compared with those of the IBV M41. The $r^2$ values between VN and HI titers and the ELISA antibody titer were 0.8782 and 0.0336, respectively, indicating a high correlation between VN and HI, but not VN and ELISA. The Cohen's kappa coefficient between the VN titer of 2 $log_{10}$ and HI titer of 5 $log_2$ was 0.909. Our results showed that VN could be replaced with HI for testing the potency of IBV M41.
Mumps is an extremly common infectious disease affecting predominantly young children hut it is not a severe disease in terms of mortality. One hundred and two sera from infants of 3 different groups which are vaccinated, unvaccinated and unknown were detected to mumps antibody. The tests used were Complement Fixation(CF) test, Single Radial Hemolysis(SRH) test, Hemagglutination Inhibition(HI) test, Enzyme Linked Immunosorbent Immunoglobulin G(ELISA IgG) test, Enzyme Linked Immunosorbent Immunoglobulin M(ELISA IgM) test. 1. The rate of positivity for mumps antibody in 102 sera wera 89.16%(74/83) by Hl test, 68.83%(53/77) by ELISA IgG test, 64.58%(62/96) by SRH test, 63.24%(43/68) by ELISA IgM test and 50.00%(49/98) by CF test. 2. The rate of positivity by 5 tests for 55 sera turned out to be very similar with above results respectively. 3. The correlation coefficients(r) between ELISA IgG test ant H1 test, ELISA IgG test and ELISA IgM test were 0.34(P<0.0l) and 0.31(P<0.02), respectively. 4. The percentage of apparently natural infection of mumps seemed to be 65.15%(43/66) in infants. 5. Seroconversion rate of mumps by vaccination were 90.91%(10/11). 6. Among the 53 infants who were tested with ELISA IgG 15 were below 15 months age of(28.30%) and this percentage may be taken as a suggestion that mumps vaccination should be given earlier than present practice. 7. ELISA IgG test was found very sensitive and recommendable method for large scale screening for the presence of antibody to mumps.
An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using purified hemagglutinin of swine influenza virus (H1N1) as antigen was developed for detection of antibody to avian influenza virus (AIV). The sensitivity and specificity of a developed and commercial available ELISA kits were compared with those of agar gel precipitation (AGP) test and hemagglutination inhibition (HI) test using sera collected from chickens under condition of field exposure. The concentration of antigen, serum dilution and concentration of enzyme-conjugated secondary antibody in developed ELISA (S-ELISA) were 0.5ug/100ul, 1:200 and 0.03ug/100ul, respectively. The correlation coefficients between S-ELISA and commercial ELISA and HI titers were 0.419 and 0.533, respectively. A significant correlation (p < 0.01) was not found between HI and ELISA titers. The S-ELISA was found to be as more sensitive and specific than the AGP test, showing 86.8% sensitivity and 85.3% specificity. It is suggested that the ELISA using the SIV as antigen may be useful method as an investigating tool for AIV serological surveillance.
This study was conducted to investigate the similarity between hemagglutination inhibition (HI) test and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) titers and sample to positive ratio (S/P ratio) of Newcastle disease(ND) virus. To perform this study, the 372 sera of broiler chicks and 120 sera of layers and breed chicks were collected from slaughter house and farms, respectively. As a result of HI test out of different chicks, the positive percentage of ND antibody titer of broiler, layer and breeder, when a standard positive HI titer were '2', was 84.4%, 100% and 100%, respectively. The positive percentage of ND antibody titer by ELISA was shown 38.4%, 100% and 100% and S/P ratio were also shown 81.5%, 98.2% and 99.2%, respectively. The results of comparative survey with same sera by two experimental methods were as follows; In low HI titer, ELISA titer was not similar to HI titer, but S/P ratio was similar to it. In high HI titer, ELISA titer was not similar to HI titer. Therefore, HI titer was more similar to S/P ratio than ELISA titer.
Newcastle disease (ND) is a highly contagious disease of poultry that can cause severe economic losses throughout the world. Vaccination has been used for a long time and proved as one of the most effective method to reduce the economic loss due to ND virus infection, The measurement of antibody titer such as hamagglutination-inhibition (Hl) test with sera has been used as a useful method to evaluate the immunity leve of host. However, Hl test is gradually being replaced by the enzyme linked-immunosorbent assay (ELISA), To evaluate the efficacy of ELISA in the chickens vaccinated with different procedure, present study has been performed. After SPF chicks and commercial broilers were vaccinated with different kinds of live vaccines such as V4, VG/GA and/or Bl at various time, the antibody level has been measured using both HI test and ELISA. Challenge test with velogenic viscerotropic NDV was also performed to measure the protective level of antibody. In the SPF chickens, the mean ELISA titer after vaccination and survival rate after challenge was increased and correlated with days post inoculation. More than 80% of chickens with higher than 1,000 ELISA titer after vaccination were survived after challenge with velogenic ND virus and had good correlation between survival rate and antibody titier. In commercial broiler chickens, most of them at market age had low level of ELISA titer regardless of the number of vaccination, and had a low correlation between survival rate and ELISA titer. However, the ELISA titer of remaining birds after challenge was increased. This result indicated that ELISA titer had good response against velogenic NOV infection compared to Hl titer.
우리 나라의 중요한 인체 기생충인 간흡충(Cloncrchis sinensis)을 연구함에 있어, 단세포를 항체제조법을 이용하여 보았다. 간흡충의 성충 조(조)항원으로 면역한 마우스의 비장 림프구와 형질세포종(plasmacytoma) 세포를 융합하여 간흡충의 항원에 대한 단세포를 항체를 분비하는 융합 세포를 만들어, 간흡충 항원에 대한 특이 단세포군 항체를 얻은 후, 이의 특성 및 반응하는 항원의 특성을 분석하고, 아울러 ELISA 억제 검사법을 이용하여 면역 진단법 상 특이도의 개선을 모색하였다 그 결과, 간흡충 항원에 대한 항체를 분비하는 총 29개의 융합세포군을 확인하였는데, 이 중 8개는 다른 기생 충 항원에 대해 교차 반응을 나타내지 않는 높은 특이성을 지니고 있었다. 클로닝 후 선택된 6종류의 단세포군 항체는 Ig Gl이 넷이었고, 나머지는 Is G2b 및 Is A로 나타났다. 위와 같이 선택된 단세포를 항체 중 4개만이 자연 감염 시에도 표현되는 항원 결정기에 대하여 생성된 것으로 판단되었다. 효소 면역 전기영동 블로팅으로 분자량 l0KD, 34 KD 항원은 각각 CsHyb 0714-20 및 CsHyb 0605-10단세포군 항체와 항원항체 반응을 나타냄을 확인하였다. 간접형광항체법을 이용하여 카 항원 결정기의 충체 내 위치를 관찰한 결과, CsHyb 0714-20 단세포를 항체에 대한 항원은 충체의 표면 및 실질 대부분에 분포하였으며, CsHyb 0605-10 및 CsHyb 0714-25 단세포군 항체에 대한 항원은 충체의 실질 및 장관의 상피세포에 분포하고 있었다. 한편 CsHyb 0605-23 단세포군 항체에 대한 항원은 주로 자궁내 충란 주위에 많이 분포하고 있었다. 단세포군 항체와 반응하는 Sephadex G200 겔 여과 항원 분획을 검색한 결과, 검색한 항원 결정기는 모두 전반적으로 빨리 젤 여과를 통하여 나온 분회에 속하여 있는 것을 알 수 있었다. 한편 이 단세포군 항체를 인체 간흡충증의 진단에 응용하여 그 특이도를 개선하고자 하였다. 통상적인 방법의 ELISA로 시행한 항체가로는 간흡충 감염자의 75U가 양성 병위에 들었으며, 정상 대조군의 7.l%, 폐흡충 감염 자의 37.5%가 위 양성 반응을 보였다. 반면 CsHyb 0605-23 단세포군 항체를 함께 사용하여 ELISA억제 검사를 시행한 결과는 간흡충 감염자의 77.1%가 양성으로 판정되었으며, 정상 대조군 및 폐흡충 감염자에서는 양성 반 응을 찾아 볼 수 없어서 100%의 특이도를 나타내었다. 따라서 이러한 단세포군 항체를 이용한 ELISA 억제검사 는 통상적인 ELISA 검사에 비하여 같은 정도의 민감도를 유지하면서도 매우 높은 특이도를 가지는 것으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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