다클론항체를 이용하여 환경 시료중 유기인계 살충제 acephate를 분석할 수 있는 경합적 간접효소면역측정법(competitive indirect ELISA)을 개발하기 위하여 분석물과 화학구조가 유사하며 hexanoic acid를 지닌 3종의 hapten을 합성하였다. 이들 hapten을 active ester 방법으로 담체단백질인 keyhole limpet hemocyanin과 접합시켜 면역원으로 사용하있고, bovine serum albumin과 접합시켜 homologous 혹은 heterologous ELISA를 위한 코팅항원으로 사용하였다. 생산된 항체들과 코팅항원을 최종선발하여 acephate 잔류분석을 위한 ELISA를 위하여 최적화하였다. 단백질의 농도가 $1{\mu}g/mL$인 코팅항원 (hapten-3-BSA)과 다클론항체 #8377를 16000배로 희석한 heterologous ELISA에서 최적화된 acephate의 $IC_{50}$ 값은 110 ng/mL이었고, 분석범위와 최소검출한계는 각각 $10{\sim}1000$과 4 ng/mL 이었다. Acephate의 주분해산물이고 살충제로 사용되는 methamidophos을 위시한 몇몇 유기인계 살충제의 항체에 대한 교차반응은 모두 0.02%이하였다. 이와 같은 결과는 본 ELISA가 농산물 및 환경시료중의 acephate 잔류분석을 위하여 편리한 방법이 될 수 있음을 시사한다.
본 연구에서는 넙치 혈청의 보존 조건이 ELISA 결과에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 항 BSA 넙치 혈청을 이용해 보존 온도, 보존 기간 및 해동 횟수에 따른 ELISA값을 비교하였다. 넙치 혈청을 보존 온도 (-80, -20, 4 및 20${^{\circ}C}$) 및 기간 (1, 30, 69 및 124일)에 따른 ELISA OD 값을 비교한 결과, 모든 시료에서 뚜렷한 OD값의 차이는 확인되지 않았다. -80℃ 및 -20${^{\circ}C}$에 보존된 혈청을 사용하여 해동횟수 (1, 5, 10회)에 따른 ELISA OD값을 비교한 결과, 해동을 반복한 혈청 및 미동결 혈청의 OD값은 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 이상의 결과로 넙치 혈청은 -80, -20, 4 및 20${^{\circ}C}$에서 124일간 보존하거나 혈청을 10회 반복 해동하여도 ELISA 결과에 영향을 끼치지 않는 것이 확인되었다.
우백혈청(牛白血病)virus에 대한 혈청항체의 측정(測定)을 위한 간접효소면역법(間接酵素免疫法)(ELISA)의 확립(確立) 및 ELISA법(法)의 감도(感度)를 알기 위하여 한천(寒天) gel 면역확산법(免疫擴散法)(ID)과 비교검토(比較檢討)하였으며 한우(韓牛), 유우(乳牛) 및 육우(肉牛)등 264두(頭)의 혈청(血淸)을 공시(供試)하였다. 혈청(血淸)을 가(加)하지 않은 공(孔)의 흡광치(吸光値)(C)로서 혈청치(血淸値)를 제(除)한 후, 표준(標準)BLV항체흡성혈청치(N)로서 피검혈청치(被檢血淸値)(T)를 나눈치(値)(T-C/N-C)가 1.5이상(以上)인 것을 BLV항체 양성(陽性)으로 하였을 때 gp-ID의 성적(成績)과 98.5%(259/263)가 일치(一致)되었다. gp-ID 향성혈청(陽性血淸) 145예(例)중 144예(例)가 ELISA 양성(陽性)으로 99.6%, gp-ID 음성혈청(陰性血淸) 118예(例)중 115예(例)가 ELISA음성(陰性)으로 97.5%가 일치(一致)되었다. 이상에서와 같이 gp-ID용(用)의 BLV 항원(抗原)을 사용한 ELISA법(法)을 gp-ID와 동등(同等) 또는 더 감도(感度)가 우수한 BLV의 혈청항체측정법 임이 입증되었으며 실용성(實用性)이 충분(充分)하다고 사료(思料)된다.
Cronobacter muytjensii는 유아용 조제분유(IFP)의 잠재적 위험요인으로 중요한 식품 기인성 병원균이다. 이 연구에서는 C. muytjensii 검지를 위한 특이적 면역글로불린 G(IgG)를 개발하고, 이 anti-C. muytjensii IgG를 이용하여 간접 비경쟁 효소면역측정법(INC-ELISA)을 개발하였다. 그 결과, 새롭게 개발한 INC-ELISA 방법은 C. muytjensii에 매우 민감하고, 순수배양 시 $6.5{\times}10^3CFU/ml$의 검출한계와 유아용 조제분유에서 1 cell/25 g의 검출한계를 나타내었다. INC-ELISA 방법은 또한 C. muytjensii에 탁월한 특이성을 보이고, Cronobacter 속 외 11종의 다른 식품 기인성 병원균 계통과의 교차반응을 보이지 않았다. 이러한 결과는, 개발된 INC-ELISA 방법이 C. muytjensii에 매우 민감하고 효율적이며, 신속하고 용이한 검출을 위한 진단 키트 개발에 적용할 수 있음을 시사한다.
염생식물인 비쑥은 식용이 가능한 약용식물로서 살충, 항염, 항콜레스테롤, 해열, 항균 활성 등이 알려져 있다. 본 연구에서는 phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA)로 자극된 인간 섬유육종 HT-1080 세포에서 5가지 활성검색방법 즉 : gelatin zymography, MMPs ELISA, wound healing assay, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), Western blot을 이용하여 비쑥의 조추출물과 그 용매 분획물의 MMP-2와 MMP-9 효소 활성에 대한 저해 효과를 평가하였다. 비쑥 시료들을 메틸렌 클로라이드(MC)와 메탄올(MeOH)로 각각 2번 추출하여 합한 것을 조추출물로 사용하였으며 이 조추출물은 MMP-2와 MMP-9 효소활성에 대해 유의한 억제 효과를 나타내었다. 이 조추출물은 용매극성에 따라 다시 n-hexane, 85% aq.MeOH, n-butanol 및 물 분획층으로 분획되었으며 이렇게 얻어진 4개의 용매 분획물들중에 n-hexane과 85% aq.MeOH 분획이 gelatin zymography와 MMP ELISA assay에서 MMP-2와 MMP-9의 활성을 효과적으로 억제하였다. 또한 wound healing assay, RT-PCR 및 Western blot assay에서 H2O 분획을 제외한 모든 용매 분획물들이 세포 이동, 그리고 MMP-2 및 MMP-9의 mRNA와 단백질 발현을 유의하게 억제하였다.
Enzyme-linked Immuno sorbent Assay (ELISA) for the serological diagnosis of Brucella abortus was developed and compared with plate agglutination test. Cell wall antigen was extracted from Brucella abortus 1119-3 by sonication and with a sodium deoxychlate solution. Optimum protein concentration of coating antigen were $0.4{\mu}g/100{\mu}{\ell}$ protein on each microtiter plate well. Horse radish peroxidase (HRP) labeled protein-G was used as a tracer of reacted antibodies. ELISA confirmed the agreeable results of 40 cases out of 43 cases by plate aggulutination test. ELISA diagnosed positive cases(10 out of 12) and negative cases (1 out of 12) with dubious sera by plate agglutination test. From this results ELISA could be used for the early diagnostic tools of Brucellosis in cattle.
For the extraction and measurement of zearalenone in the corn, bean, wheat and barley contaminated with Fusarium graminearum, the zearalenone-oxime, zearalenone-oxime BSA and zearalenone monoclonal antibodies were studied to develop and apply the direct competitive enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The extraction range of zearalenone with the monoclonal antibodies produced in this experiment was 10ng to 500ng/g feed and the 50% inhibition value was 50ng/ml. The mean recoveries of zearalenone artificially spiked in the ground corn were 89%. The specificity of F-2 monoclonal antibody for the analogues was favorable for the direct competitive ELISA. The result of the experiment showed the zearalenone in the corn, bean, wheat and barely naturally contaminated with the mold would be suitable for extraction and measurement with the monoclonal antibodies.
This study was conducted to investigate the similarity between hemagglutination inhibition (HI) test and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), the HI titer and mean ratio S/P ratio) of avian influenza virus. To perform this study, the 1,457 sera of layers 21 farms in May, July and September, respectively. As a result of HI test, positive rates were 480 to 422 (92.1%) in May, 494 to 394(79.8%) in July and 483 to 402(83.2%) in September, and the mean antibody titer were 4.6, 4.3, 4.0 to 0.3 decreased, respectively. The positive rates by ELISA, 480 to 475(99.0%) in May, 494 to 485(98.2%) in July, 483 to 472(97.7%) in September, and the mean S/P ratio were 2.319, 2.557 and 2.380, respectively. The result of HI test and ELISA positive 480 to 422(92.1%), 475(99.0%), 494 to 394(79.8%), 485(98.2%) and 483 to 402(83.2%), 472(97.7%). Therefore, ELISA was shown more sensitive compare the HI titers.
The study was performed to investigate the distributions of swine pleuropneumonia in Kyongbuk western area by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Sera collected from 400 slaughtered pigs in 3 slaughter houses during the period from May 1999 to october 1999 were tested to detect antibodies against A pleuropneumonie serotype 2 and 5. The optimal dilution of CBE antigen, conjugate and serum for this ELISA were determined 1 : 400, 1 : 20,000, 1 100, respectively. The optimal dilution of OW antigen, conjugate and serum for this ELISA were determined 1 : In, 1 : 20,000, 1 : 200, respectively. Cut-off value in this ELISA was determined by mean absorbance (at 492 nm) of negative control sera added with the triple value of the standard deviation. Cut-off value in ELISA by CBE and OMP antigen were 1.134 and 1.217, respectively. By the ELISA, positive reaction rates to A pleuropneumoniae serotype 2 and 5 for CBE antigen were 38.8% and 18.8%, and for OMP antigen were 42.8% and 23.5% of the 400 samples, respectively.
Toxoplasma증의 혈청학적 진단에 있어서 민감도를 증가시키기 위해 간접 latex 응집반응의 결과와 비교하면서 ELISA를 개발하였으며, 뇌척수액의 검사 시료로서의 가능성을 검토하였다. 아울러 중추신경계 질환환자로부 터기생충질환을 감별하기 위하여 1986년부터 1991년까지 전국 카 병원에서 채취한 혈청과 뇌척수액에 대하여 간접 latex 응집반응(ILA)과 ELISA를 실시하여 Toxoplasma 항체 보유 양상을 비교 검토하였다. 전체 2,016 건의 혈청에 대해 ILA를 실시하여 76건(3.8%)의 양성 (1:32이상의 titer)을 얻었다. 그러나 양성 혈청환자에서 채취한 뇌척수액에서는 낮은 titer의 반응은 있었으나 양성은 나타나지 않았다. 이들 양성 혈청의 양성 혈청 및 음성 혈청에 대하여 ELISA로 항체검사를 실시한바 ILA의 titer가 1 : 32인 군에서 통계적으로 유의한 차이를 나타내는 항체값을 얻었으며, 그 흡반도는 0.40이었다. 뇌척수액에 대한 ELISA로는 ILA의 1 : 64 titer군에서 통계 적으로 유의한 차이가 나타났고 그때의 흡광도 0.27을 양성 판단의 기준으로 사용하였다. ELISA에 의한 항체 검사상 전체 혈청에서 7.0%의 양성을 검출하여 ILA보다 약 2배 정도의 높은 민감도를 보였으며, 뇌척수액에서 는 5.6%의 양성률을 보여 ELISA는 뇌척수액에서의 항체 검출시 유용한 방법이라고 판단하였다. ILA에 비하여 ELISA는 약 2배 정도 높은 양성률을 내었고 양성률은 나이에 마라 40대 이후 급격한 증가를 보였으며, 여성보 다는 남성에서 약 2배 정도 양성률이 높게 나타났다. ELISA에 의한 뇌척수액의 항체 검사에서는 양성률의 성별 차이를 나타내지 않았다. 이상의 결과로 판단할 때, ELISA가 ILA보다 Toxoplasma 항체 검출의 민감도가 높았으며, 뇌척수액은 ELISA의 좋은 검사시료가 되며, 특히 중추신경계 Tocxoplnsma증의 진단에 있어 뇌척수액에 대한 항체 검사에서 ELISA가 유용하다고 판단하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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