Green tea, which has high polyphenols amount, is thought to have hypocholesterolemic effects. The present study was performed to further examine the hypocholesterolemic action of green tea, especially (-) epigallocatechin gallate (EGCG) for its effect on diet-induced hypercholesterolemia in rats. Male Sprague-Dawley rats (n=15) were fed a green tea-free diet (control), $1.0\%$ green tea catechin (catechin) or $0.5\%$ green tea catechin EGCG for seven weeks. Hypercholesterolemia was induced by adding $1\%$ cholesterol and $0.5\%$ cholic acid to all diets. There was no difference in food intake and body weight gain among the groups. The green tea EGCG treatment led to a significant improvement in plasma levels of total cholesterol, low density lipoprotein (LDL)-cholesterol and high density lipoprotein (HDL)/LDL ratio (p<0.05). There was no significant effect on the plasma HDL-cholesterol level. The catechin treatment led to a 4.19-fold increase in the LDL-receptor mRNA level compared to the control, but the EGCG treatment did not affect the hepatic LDL-receptor mRNA level. Our results suggest that when blood cholesterol level is down-regulated by green tea EGCG, the LDL receptor gene-independent pathway may dominate the hypocholesterolemic action of EGCG.
Caffeine and epigallocatechin gallate (EGCG) are major constituents of green tea, the leaves of Camellia sinensis (Theaceae). Although EGCG is well known for diverse beneficial effect, caffeine is sometimes harmful with adverse effects. Therefore, the extraction efficiency was investigated using different extraction method such as extraction solvent, extraction time, extraction method, and repeated extraction. The content of EGCG and caffeine in green tea extract was quantitated by HPLC analysis. The extraction condition exerted difference on the extraction yield. The content of EGCG was also affected by different extraction condition. Especially, the extraction solvent greatly affected the content of EGCG in the extract. However, the content of caffeine was less affected compared to that of EGCG. The inhibitory effect of green tea extract on pancreatic lipase was almost similar regardless of extraction condition. Taken together, optimization of extraction condition will provide best efficacy for further development of green tea as anti-obesity therapeutics.
본 연구는 녹차의 혈중 콜레스테롤 저하 효과 및 녹차 추출물인 catechin과 EGCG가 hypocholesterolemic 효과에 미치는 정도를 식이로 고콜레스테롤혈증을 유도한 흰쥐에서 평가하고자 수행하였다. 4주령의 수컷 SD계 흰쥐를 난괴법에 따라 각 군당 5마리씩 무녹차섭취군(대조군), 4% 녹차분말군(GTP), 1% 녹차 catechin군(Catechin),0.5% 녹차 EGCG군(EGCG)의 4군으로 7주간 사육을 하였다. 녹차 첨가군은 모두 0.5% EGCG를 함유하도록 녹차 첨가량을 결정하였으며 모든 식이는 고콜레스테롤혈증을 유도하기 위하여 1% cholesterol과 0.5% cholic acid를 첨가하였다. 식이섭취량은 각 군간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 혈청 총 및 LDL-콜레스테롤 수준은 Catechin군이 189.2 mg/dL, 166 mg/dL, EGCG군에서는 161.4 mg/dL, 138 mg/dL로 나타나 대조군(245 mg/dL, 222 mg/dL)에 비하여 유의적으로 감소되었고 (p<0.05), EGCG군에서 그 효과는 더욱 크게 나타났다. 혈청의 중성지방농도는 녹차섭취군이 대조군보다 낮았으며 EGCG군에서 가장 낮게 나타났다. HDL-콜레스테롤 수준은 유의적이지는 않았지만 녹차섭취군이 대조군보다 높은 경향을 보였고, HDL/LDL-콜레스테롤 비율은 대조군에 비하여 녹차섭취군에서 증가하여 EGCG군에서 가장 높았다. 이와 같은 결과는 녹차의 섭취가 혈중 콜레스테롤 및 중성지방을 감소하고, HDL-콜레스테롤은 증가시킴으로써 동맥경화 위험을 줄일 수 있는 가능성을 반영하고 있다. 간에서의 CYP7Al활성과 유전자 발현정도는 Catechin군, EGCG군이 대조군에 비하여 높게 나타났으며, EGCG군에서 가장 많이 증가하여 혈청에서의 지질수준 감소 경향과 일치하였다. 이상의 본 연구 결과들은 녹차 섭취군에서의 혈중 콜레스테롤 저하작용 특히 EGCG군에서의 현저한 hypocholesterolemic 효과는 CYP7Al 유전자 발현 및 효소의 활성증가에 따른 콜레스테롤의 담즙산으로의 배설 증가에 기인하는 것으로 추측된다.
Inhibition of xanthine oxidase by tea extracts obtained from non-fermented tea(steamed green tea and roasted green tea), semi-fermented tea(oolong tea) and fermented tea(black tea) were investigated. The crude catechin fraciton had a hgher inhibitory effect against xanthine oxidase, and the effect was increased with the addition of tea extracts. Their inhibitory effect were hardly influenced until extracted three times with hot water. According to the investigation of catechins in the crude catechin fraction obtained from tea extracts, (-)-epicatechin-(EC), (-)-epicatechin gallate(ECg). (-)-epigallocatechin(EGC) and (-)-epigallocatechin gallate(EGCg) were 80.1$\mu\textrm{g}$/mg 113.5$\mu\textrm{g}$ /mg, 186.3$\mu\textrm{g}$/mg and 367.7$\mu\textrm{g}$/mg in steamed green tea, and 75.6$\mu\textrm{g}$/mg, 114.7$\mu\textrm{g}$/mg, 193.7 $\mu\textrm{g}$/mg and 381.9$\mu\textrm{g}$/mg in roasted green tea, and 69.4$\mu\textrm{g}$/mg, 110.0$\mu\textrm{g}$/mg, 127.1$\mu\textrm{g}$.mg and 464.9$\mu\textrm{g}$/mg in oolong tea, and 78.1$\mu\textrm{g}$/mg, 171.8$\mu\textrm{g}$/mg, 80.7$\mu\textrm{g}$/mg and 51.4$\mu\textrm{g}$/mg in black tea, respectively. Order of the content of these catechins was (-)-EGCg>(-)-EGC>(-)-ECg>(-)-EC in steamed green tea, roasted green tea and oolong tea, and was (-)-ECg>(-)-EGC>(-)-EC>(-)-EGCg in black tea. Also the concentration of catechins was hardly influeced until extracted three times. The inhibition ratio of xanthine oxidase by autherntic catechins was hardly influenced until extracted three times. The inhibition ratio of xanthine oxidase by authentic catechins was 94.9% and 87.6% by addition of 5.0$\mu\textrm{g}$/ml of (-)-EGCg and (-)-ECg, respectively. the inhibitors of xanthine oxidase were supposed to be due to (-)-ECg and (-)-EGCg in tea polyphenol compounds.
(-)-Epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a mai or tea catechin has been shown to have many interesting biological activities. In the present study, we studied the effects of green tea catechins, EGCG metabolites, and black tea theaflavins on accumulation of EGCG in HT-29 human colon cells. Intracellular levels of [$^3H$]-EGCG were not changed significantly in the presence of other tea catechins including (-)-epicatechin, (-)-epigallocatechin, and (-)-epicatechin-3-gallate. EGCG methyl metabolites and EGCG 4"-glucuronide did not affect cellular levels of [$^3H$]-EGCG. Black tea theaflavins and theasinensin A (TsA), an EGCG oxidative dimer, however, significantly decreased cellular accumulation of EGCG in HT-29 cells by 31-56%. This decrease was more pronounced when cells were incubated in the presence of theaflavin-3',3"-digallate (TFdiG) or TsA. When EGCG was added separately from TFdiG or TsA, the accumulation of EGCG in HT-29 cells was also significantly decreased regardless of when TFdiG or TsA was added during the uptake study (p<0.01). The results suggest that theaflavins and TsA may interrupt EGCG absorption through the gastrointestinal epithelium.
실험에 사용된 녹차는 전남 보성에서 재배된 것으로 국내시장에서 구입하였다. 녹차 5g을 순수한 물 5$0^{\circ}C$에서 추출한 후 클로로포름과 에틸아세테이트로 분배하였다. 추출액을 크로마토그래픽 컬럼 (4.6$\times$250 mm, 15$\mu\textrm{m}$, Lichrospher 100RP-18)을 이용하여 정제하였다. 정제된 추출액으로부터 $\mu$-Bondapak $C_18$(3.9$\times$300mm, 10$\mu\textrm{m}$) 컬럼을 이용하여 녹차에 포함된 카테킨 화합물을 분리하였으며, EGC(Epigallocatechin, C(catechin), EC(Epicatechin), EGCG(Epigallocatechin Gallate) and ECG(Epicatechin Gallate)의 순으로 용출되었다. 본 연구의 결과로서는 목적물질인 EGCG를 분리하기 위해 이동상의 조성은 0.1%의 아세트산이 포함된 물/아세토나이트릴, 87/13 %(v/v)이었다. 유량은 1.0 $m\ell$/min, UV 검지기는 280nm로 고정하였다. 위의 실험조건으로 5g의 전남 보성산 녹차로부터 순도 98% 이상의 121.3mg EGCG를 얻을 수 있었다.
녹차에 있어서 맛성분으로도 중요하고, 최근에는 그 약리작용의 연구과 활발히 연구되고 있는 catechin의 함량 분석을 국산 시판 녹차를 시료로 하여 시도하였다. 100mg의 시료 분말 녹차를 열수 출출한 후 $CHCl_3$를 가하여 시료 용액으로 부터 caffeine를 제거시키고 EtOAc를 가하여 catechin류를 추출 농축하여 5ml로 한 다음 $0.45\;\mu\textrm{m}$ membrane filter를 통과시킨 후 $2\;\mu\textrm{l}$을 HPLC에 주입시켰다. 4종류의 고순도 정량분석용 catechin류를 표준용액으로 한 검량선법에 의하여 시료중의 catechin 함량을 구하였다. 그 결과, EGCg의 함량(찐 1번차 : 7.54%, 볶은 1번차 : 7.88%)이 가장 많았고 EGC, ECg, EC의 순서로 그 함량이 감소하엿다. 수확시기가 늦은 2번차에서는 EGCg, ECg 와 같은 gallate는 증가하고 EGC는 약간 감소하는 경향을 나타내어 차의 맛에 영향을 주는것 같다.
녹차를 천일염과 혼합하여 발효시킨 후 항균활성을 가지고 있고 셀룰라제가 없는 균종을 첨가하여 발효시킨 실험에서 녹차만을 발효시켰을 경우보다 천일염을 첨가하여 발효시킨 모든 시료에서 카테킨류인 EGC, EC, EGCG, ECG의 추출량이 증가하였고, 발효 일에 따른 분석에서는 EGC(epigallocatechin), ECG(epicatechin gallate), EC(epicatechin), EGCG(epigallocatechin gallate)모두에서 2일째와 3일째 높은 추출량이 검출되었다. 또한 발효균을 첨가하여 발효시켰을 경우 Paenibacillus spp에서는 모든 카테킨류(EGC, EC, EGCG, ECG)의 추출량이 증가하였고, Bacillus amyloliquefaciens에서는 EGC와 EC는 감소하고 EGCG와 ECG는 증가하였으며, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis는 모든 카테킨류(EGC, EC, EGCG, ECG)에서 감소하였다. 위와 같은 실험의 결과에서 녹차에 천일염과 Paenibacillus spp를 함께 3일 동안 발효시킨 결과에서 가장 많은 카테킨류가 추출되었다.
Ingestion of green tea has been shown to decrease prostaglandin $E_2$ levels in human colorectum, suggesting that tea constituents modulate arachidonic acid metabolism. In the present study, we investigated the effects of four purified green tea catechins, (-)-epicatechin (EC), (-)-epigallocatechin (EGC), (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG), and (-)-epicatechin-3-gallate (ECG), on the catalytic activity of cytosolic phospholipase $A_2$ ($cPLA_2$) and release of arachidonic acid and its metabolites from intact cells. At $50\;{\mu}M$, EGCG and ECG inhibited $cPLA_2$ activity by 19 and 37%, respectively, whereas EC and EGC were less effective. The inhibitory effects of these catechins on arachidonic acid metabolism in intact cells were much more pronounced. At $10\;{\mu}M$, EGCG and ECG inhibited the release of arachidonic acid and its metabolites by 50-70% in human colon adenocarcinoma cells (HT-29) and human esophageal squamous carcinoma cells (KYSE-190 and 450). EGCG and ECG also inhibited arachidonic acid release induced by A23187, a calcium ionophore, in both HT-29 and KYSE-450 cell lines by 30-50%. The inhibitory effects of green tea catechins on $cPLA_2$ and arachidonic acid release may provide a possible mechanism for the prevention of human gastrointestinal inflammation and cancers.
Cancer preventive activities of green tea and its main constituent, (-)-epigallocatechin gallate (EGCG) have been extensively studied by scientists all over the world. Since 1983, we have studied the cancer chemopreventive effects of EGCG as well as green tea extract and underlying molecular mechanisms. The first part of this review summarizes groundbreaking topics with EGCG and green tea extract: 1) Delayed cancer onset as revealed by a 10-year prospective cohort study, 2) Prevention of colorectal adenoma recurrence by a double-blind randomized clinical phase II trial, 3) Inhibition of metastasis of B16 melanoma cells to the lungs of mice, 4) Increase in the average value of Young's moduli, i.e., cell stiffness, for human lung cancer cell lines and inhibition of cell motility and 5) Synergistic enhancement of anticancer activity against human cancer cell lines with the combination of EGCG and anticancer compounds. In the second part, we became interested in cancer stem cells (CSCs). 1) Cancer stem cells in mouse skin carcinogenesis by way of introduction, after which we discuss two subjects from our review on human CSCs reported by other investigators gathered from a search of PubMed, 2) Expression of stemness markers of human CSCs compared with their parental cells, and 3) EGCG decreases or increases the expression of mRNA and protein in human CSCs. On this point, EGCG inhibited self-renewal and expression of pluripotency-maintaining transcription factors in human CSCs. Human CSCs are thus a target for cancer prevention and treatment with EGCG and green tea catechins.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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