Resistance gene mphK was cloned from Escherichia coli 209K strain which is highly resistant to erythromycin (EM). By using the cloned plasmid pGE64, E. coli NM522 was transformed. The comparison of macrolide-phosphotransferase K [MPH(K)] activity between E. coli 209K and E. coli NM522(pGE64) showed that the total enzyme activity of MN522(pGE64) was fifty-fole higher than that of 209K. To identify characteristics of MPH(K) more precisely. MPH(K) was isolated and purified from the NM522 (pGE64). The final purification f MPH(K) through several stages of purification process was 89 fole and the overall recovery was 11%. This enzyme was monomer with the molecular weight of 34 kDa and its isoelectric point (pI) was 5.0. The optimal pH and temperature for activity were 8.0 and $40^{\circ}C$, respectively.
The MICs of various macrolide, lincosamide and streptogramin B antibiotics against highly erythromycin-resistant Escherichia coli 209K strain were evaluated. E. coli 209K showed high MICs against 14-membered macrolides and the relatively weaker resistance to 16-membered macrolides, lincosamides and streptogramin B. The macrolide-phosphotransferase K from E. coli 209K showed greater substrate specificity to the 14-membered macrolide antibiotics than to the 16-membered macrolide antibiotics, lincosamide and streptogramin B. Therefore, it was considered that the high resistance was due to the macrolide-phosphotransferase K.
산소 투과율이 좋은 silicone tube안쪽에 nutrient 공급을 위한 3개의 isotropic polypropylene hollow fiber 3개를 넣어 제작된 이중 실관 반응기에서 E. coli cell을 immobilization 하여 cell density와 packing characteristics를 조사해 보았다. E. coli cell들은 거의 100% Packing되어 동물조직에서 처럼 층을 이루면서 자랐고 ceil density를 측정해 본 결과 약 550g/$\ell$고농도 세포배양이 가능하였다.
본 연구는 기후변화에 따른 신선편의 샐러드 및 원재료인 양배추의 미생물 오염도를 조사하기 위하여 우리나라의 연평균 기온과 연강수량에 따라 3개의 권역으로 구분지어 각 권역에서 신선편의 샐러드와 양배추를 각 60점씩 총 360점을 채취하였다. 시료의 미생물 오염도를 분석하기 위해 위생지표세균인 총호기성세균수와 대장균군수, 대장균 수를 분석하였고 E. coli O157:H7, S. aureus, L. monocytogenes, B. cereus, Salmonella spp.와 같은 식중독 세균을 검사하였다. 노지에서 채취한 양배추의 경우 총호기성 세균수는 평균 $3.49{\pm}0.62$ log CFU/g으로 나타났고 2권역이 1,3권역에 비해 낮은 수준으로 나타났다. 대장균군의 경우 평균 $1.99{\pm}0.87$ log CFU/g으로 나타났고 1권역이 2, 3권역에 비해 높게 검출되었다. 신선편의 샐러드 제품의 경우 권역별 유의적 차이를 나타내지 않았으며 총 호기성세균수는 평균 $5.69{\pm}0.54$ log CFU/g, 대장균군은 평균 $3.17{\pm}0.16$ log CFU/g으로 나타났다. 신선편의 샐러드 제품에서는 대장균을 포함한 모든 식중독 세균은 검출되지 않았다. 본 연구결과 원료의 경우 재료를 가공 처리하는 제품에 비해 기후(온도, 습도)의 영향 많이 받는 것으로 사료되며 원료의 오염 정도는 최종제품에 영향을 미치므로 차후 이러한 상관관계에 대한 비교 연구 및 연차별 동일 권역의 농지에 대한 모니터링 분석의 기초자료로 활용 가능할 것으로 사료된다.
국내에서 많이 사용되고 있는 제2세대 quinolone 항생제인 norfloxacin(NFX)에 대한 약역학적인 특성을 구명하기 위하여 국내에서 분리된 동물유래 병원성 세균에 대하여 시험관내에서 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 즉, E coli(n=89) 대한 NFX의 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$는 공히 0.02g/ml이었으며, Streptococcus spp.(n=36)에 대한 NFX의 $MIC_{50}$는 2g/ml 그리고 $MIC_{90}$는 4g/ml로 나타났다. Salmonella spp.(n=56)에 대한 NFX의 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$ 모두 0.2g/ml로 강한 항균력을 보였으며, Streptococcus spp.(n=24)에 대한 NFX의 $MIC_{50}$는 2g/ml 그리고 $MIC_{90}$가 4g/ml로 나타났다. Bacillus spp.(n=34)는 NFX의 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$는 모두 0.4g/ml으로서 대부분의 병원성 세균에 대해서 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$치가 동일하든지 또는 매우 비슷한 수치를 보여주었다. 그러나 NFX는 혐기성세균인 Clostridium spp.(n=34)에 대해서는 항균력이 매우 낮았다. 현재 수의임상에서 항균제 병용요법이 많이 응용되고 있는 것을 고려하여 NFX와 다른 항생물질간의 분획억제농도 (FICs)를 E coli 88ac을 시험균주로 하여 실험한 결과, NFX와 colistin과 병용할 때 FIC 값이 0.38로서 상승작용을 그리고 gentamicin, trimethoprim, amikacin, penicillin 및 tylosin과의 병용시 FIC 값이 각각 0.52, 0.56, 0.63, 1.00 및 1.02로서 상가작용을 보여주었으며, tetracyclin과의 병용시의 FIC값은 1.49로서 길항작용을 나타냄을 알 수 있었다. 한편 실제 항균제의 임상적용시 매우 주요한 요소인 항균활성후 저농도유효성(PAE)을 알아보기 위하여 E coli AB1157을 시험균주로 측정한 결과 PAE은 0.90~1.02 시간 그리고 S aureus R-209에 대해서는 PAE가 1.58~1.99 시간으로서 그람음성균 및 그람양성균 모두에 대해서 긴 PAE를 갖고 있음을 알 수 있었다.
Enrofloxacin-colistin combination, widely used in Gram negative infections in veterinary sector, was investigated in terms of MIC and initial killing rate using E coli k 88ab, Salmonella typhimurium, Pasteurella multocida type A, Bordetella bronchiseptica and Staphylococcus aureus as test organisms. On the basis of MICs of enrofloxacin-colistin combination against the above bacteria, killing rates of the combination of enrofloxacin and colistin at the ratio of 5:0, 4:1, 3:2, 1:1, 2:3, 1:4 and 0:5, indicated high and rapid antibacterial acitivities against all but Staphylococcus aureus R-209, with the number of bacteria reducing to less than one percent within two hours. At the MIC of enrofloxacin or colistin, both antibacterials showed the highest killing rates during 2-4 hours against Gram negatives such as E coli K88ab,Pasteurella multocida type A and Bodetella bronchiseptica but allowed the regrowth of the same pathogens thereafter. On the while, the combination of two antibacterials at a fourth MIC resulted in high killing rate without bacterial regrowth during 24 hours, suggesting the synergistic antivacterial effects. The combination, however, did not show favourable activity against Gram negatime S typhimurium and Gram positive S aureus ergistic antibacterial activity against Gram negatime pathogens but also colistin showed LPS-neutraization, we could suggest the combination should provide clinically positive therapeutic armarium in Gram negative infections.
우리나라 전통식품인 김치, 된장, 고추장, 간장. 탁주, 식혜, 수정과에 있는 미생물 분석을 위하여 건조필름법과 전통적인 미생물 분석법을 비교하였다. 일반세균 분석에는 plate count agar 법과 $Petrifilm^{TM}$ aerobic count plate 법을 비교하였고, 대장균군과 대장균의 분석에는 most probable number (MPN) 법과 $Petrifilm^{TM}$ coliform count plate 및 $Petrifilm^{TM}$ E. coli/colmfom count plate 법을 각각 비교하였으며, 효모와 곰팡이의 분석에는 potato dextrose agar 법과 $Petrifilm^{TM}$ yeast and mold count plate 법을 비교하였다. 황색포도상구균의 분석에는 coagulase 시험법과 $Petrifilm^{TM}$ Staph express fount plate 법을 비교하였다. 두 방법간의 상관계수는 일반세균이 0.974-0.998, 대장균군이 0.955-0.978, 대장균이 0.968-0.986, 효모와 곰팡이가 0.913-0.995, 황색포도상구균이 0.998-0.999로 두 방법간의 상관성이 매우 높았으며, 평균 미생물수에 있어서도 유의적인 차이가 없었다(p>0.05). 이러한 결과로부터 건조필름법이 기존의 전통적인 방법을 대체할 수 있는 미생물 분석법임이 확인되었다.
Reactive oxygen species (ROS) are very harmful to living organisms due to the potential oxidation of membrane lipids, DNA, proteins, and carbohydrates. transformed E.coli strain QC 871, superoxide dismutase (SOD) double-mutant, with three sequence variant MnSOD1, MnSOD2, and MnSOD3 manganese superoxide dismutase (MnSOD) gene isolated from wheat. Although all QC 871 transformants grown at $37^{\circ}C$ expressed mRNA of MnSOD variants, only MnSOD2 transformant had functional SOD activity. MnSOD3 expressed active protein when grown at $22^{\circ}C$, however, MnSOD1 did not express functional protein at any growing and induction conditions. The sequence comparison of the wheat MnSOD variants revealed that the only amino acid difference between the sequence MnSOD2 and sequences MnSOD1 and 3 is phenylalanine/serine at position 58 amino acid. We made MnSOD2S58F gene, which was made by altering the phenylalaine to serine at position 58 in MnSOD2. The expressed MnSOD2S58F protein had functional SOD activity, even at higher levels than the original MnSOD2 at all observed temperatures. These data suggest that amino acid variation can result in highly active forms of MnSOD and the MnSOD2S58F gene can be an ideal target used for transforming crops to increase tolerance to environmental stresses.
Some investigations on chronic mastitis in dairy cattle in Kyungnam Province during the year 1982 were conducted with the special reference to the causative agents and their drug resistance. Milk samples from 46 isolated cases of chronic mastitis cattle were investigated bacteriologically and the organisms recovered were examined for their drug susceptibility against the major antibiotics used in this country by the use of disk diffusion susceptibility test. Four major causative agents involved in chronic mastitis were in order of prevalence Staphylococcus aureus (32.6%), Escherichia coli (28.3%), Streptococcus agalactiae (8.7%) and Candida albicans (8.7%). Staph. epidermidis, Streptococcus uberis, Klebsiella pneumoniae and Candida subtropicalis were found to be one of the minor agents. The majority of staphylococcal isolates were highly resistant to the most of antibiotics employed while 8% of them were resistant to gentamicin and 32% to chloramphenicol. The percentages of staphylococcal cultures resistant to penicillin, lincomycin. streptomycin, methicillin, oleandomycin, tetracycline, cephalothin, ampicillin and erythromycin were 100%, 96%, 96%, 92%, 84%, 84%, 80%, 76%, and 64% respectively. Streptococcal isolates were also highly resistant to the majority of the drugs used although 85.7% of them were susceptible to gentamicin. All Escherichia coli isolates were found to be resistant to erythromycin, lincomycin and penicillin while the majority of them were resistant to ampicillin (92.9%), carbenicillin (85.7%), oleandomycin (85.7%), streptomycin(85.7%), kanamycin (78.6%), methicillin (78.6%) and tetracycline (71.4%). The percentages of E. coli cultures resistant to gentamicin, nitrofurantoin, cephalothin and chloramphenicol were 21.4%, 21.4%, 35.7% and 50.0% respectively.
In the present study, we investigated the neutralization activity of various antimicrobials against lipopolysaccharide (LPS) as well as interaction between two antimicrobials (enrofioxacin and coilstin) using checkerboard method. The neutralization activity of antimicrobials used in the test was assayed by means of LAL chromogenic test after reaction of LPS with colistin, enorfioxacin, ampicillin, polymyxin B, oxytetracycline, streptomycin, and erythromycin. As the results, the neutralization activity of coltstin and polymixin B had a more stronger than that of tested other antimicrobials. In bacterial culture broth, the best neutralization activity of the antibiotics was also shown to coltstin and polymixin B. Meanwhile, It was shown to have synergism between enorfloxacin and coltstin on the basts of FIC (fractional inhibition concentration). The FIC of enorfioxacin-colistin combinations was 0.50-1.03 to Staphylococcus aureus R-209, 1.03-1.06 to Salmonella typhimurium, 0.75-1.25 to Bordetella Bronchtseptica and 1.02-1.25 to E. coli K88ab. On the basts of the above results, the present study may be of clinical usefulness in the choice of an antibiotic therapy for severe sepsts in animals.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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