전복가공부산물인 내장의 이용가치를 향상시키고자 열수추출, 에탄올추출 등의 방법으로 유효성분을 추출하고 항산화 및 항피부노화 활성을 측정하였다. DPPH 라디칼소거능 분석결과 Tris-HCl 추출물은 $58.60{\pm}0.88%$으로 높은 라디칼소거능을 보였으며, 다음으로 에탄올추출물은 $55.40{\pm}0.62%$의 라디칼소거능을 보였다. Anti-elastase활성을 분석한 결과 에탄올추출물이 다른 시험구에 비하여 현저하게 높은 활성을 보였다. 전복내장추출물의 세포독성을 확인하기 위하여 human dermal fibroblast 세포에 대하여 MTT 시험결과 세포독성은 전혀 나타나지 않았다. 에탄올 추출물의 농도를 달리하여 human dermal fibroblast 세포에 대해pro-collagen type I 생합성능시험결과 10.0 ${\mu}g/mL$에서 $705.30{\pm}3.06$ ng/mL로 retinoic acid $453.60{\pm}2.82$ ng/mL보다 우수한 결과를 보였다. MMP-1 활성은 10 ${\mu}g/mL$에서 $45.30{\pm}0.80$ ng/mL를 보여 control의 $62.37{\pm}0.56$ ng/mL 보다 감소정도가 낮았다. 본 연구는 전복내장추출물의 항산화와 항노화활성에 관하여 최초로 시도되었으며 향후 전복내장을 이용한 다양한 연구의 기초자료로서 중요한 의미가 있다.
Purpose: Acellular human dermis is very useful implant for use in plastic and reconstructive surgery. However, the volume of acellular human dermis graft is known to decrease for a long time. Basic fibroblast growth factor (bFGF) is a polypeptide that enhances the collagen synthesis and angiogenesis. In the current study we examined whether bFGF could improve the survival of acellular human dermis ($SureDerm^{(R)}$) by increasing angiogenesis of the graft. Methods: Forty rats were divided into two groups (control and bFGF). A 2-mm thick piece of $SureDerm^{(R)}$ was cut into smaller pieces that were $15{\times}5$ mm in size. Two subcutaneous pockets were made on the back of each rat. Grafts sprayed with bFGF were implanted in the bFGF group and injected with bFGF after transplantation every 3 days for 2 weeks. In the control group, the grafts were treated with phosphate-buffered saline (PBS) instead of bFGF. Four days, and 1, 4, and 12 weeks after the implantation, the grafts were harvested and gross and histologic examinations were performed. Inflammation grade, graft thickness, neocollagen density, and neocapillary count were measured. Results: The bFGF group displayed more rapid accumulation of inflammatory cells with a higher density of neocapillaries, and increased active collagen synthesis. After 12 weeks, the thickness of the grafts in the control and bFGF groups was $75.15{\pm}4.80%$ and $81.79{\pm}5.72%$, respectively, in comparison to the thickness before transplantation. There was a statistically significant difference between both groups ($p$ <0.05). Conclusion: bFGF was effective in reducing the absorption of acellular human dermal grafts by increasing angiogenesis and accelerating engraftment. In conclusion, bFGF may be a good tool for use in acellular human dermal graft transplantation for reconstructive surgery involving soft-tissue defects.
Human periodontal ligament fibroblasts (hPDLF) are very important for curing the periodontal tissue because they can be differentiated into various cells. A tissue engineering approach using a cell-scaffold is essential for comprehending today's periodontal tissue regeneration procedure. This study examined the possibility of using an acellular dermal matrix as a scaffold for human periodontalligament fibroblast (hPDLF). The hPDLF was isolated from the middle third of the root of periodontally healthy teeth extracted for orthodontic reasons. The cells were cultured in a medium containing Dulbecco's modified Eagle medium supplemented with 10% fetal bovine serum at $37^{\circ}C$ in humidified air with 5% $CO_2$. The acellular dermal matrix(ADM) was provided by the US tissue banks(USA). Second passage cells were used in this study. The hPDLF cells were cultured with the acellular dermal matrix for 2 days, and the dermal matrix cultured by the hPDLF was transferred to a new petri dish and used as the experimental group. The control group was cultured without the acellular dermal matrix, The control and experimental cells were cultured for six weeks. The hPDLF cultured on the acellular dermal matrix was observed by Transmission Electron microscopy (TEM). Electron micrography shows that the hPDLF was proliferated on the acellular dermal matrix. This study suggests that the acellular dermal matrix can be used as a scaffold for hPDLF.
We investigated antioxidative activity of the ethanol extracts of leaves of Cornus walteri Wanger (CWE) by treated enzyme in human dermal fibroblast (HDFs) irradiated by UVB. We examined the in vitro chemical and cellular antioxidant activities of CWE in HDFs. We employed scavenging assay for the 1,1-diphenyl-2,5-picrylhydrazyl (DPPH) radicals and cellular antioxidative activity of CWE, and we was investigated in $H_2O_2$-treated or UVB-irradiated HDFs. The CWE effectively scavenged DPPH radicals ($IC_{50}$$7.03{\pm}0.4{\mu}g/mL$) when compared to the scavenging activities of L-ascorbic acid ($IC_{50}$$4.69{\pm}0.3{\mu}g/mL$). CWE reduced UVB-induced cellular damage in HS68 cells by MTT assay and inhibited intracellular ROS generation in dose-dependent manner. In addition, CWE also attenuated the elevated levels of 8-isoprostane resulting from UVB-mediated oxidative stress. Collectively, these results suggest that CWE could be a new potential candidate as antioxidant against UVB-induced oxidative stress in HDFs.
In the present study, effects of sun ginseng (SG) on the collagen synthesis and the proliferation of dermal fibroblast were investigated. Collagen synthesis was measured by assaying procollagen type I C-peptide production. In addition, the level of matrix metalloproteinase (MMP)-1 was assessed by western blot analysis. SG suppressed the MMP-1 protein level in a dose-dependent manner. In contrast, SG dose-dependently increased tissue inhibitors of MMP (TIMP)-1 production in fibroblasts. SG increased type I collagen production directly and/or indirectly by reducing MMP-1 and stimulating TIMP-1 production in human dermal fibroblasts. SG dose-dependently induced fibroblast proliferation and this, in turn, can trigger more collagen production. These results suggest that SG may be a potential pharmacological agent with anti-aging properties in cultured human skin fibroblast.
Objectives : In this study, we investigated the effect of Fructus Ligustri Lucidi $H_2O$ fraction (FLLW) on cell proliferation, and the phosphorylation of ERKs and Akt in human dermal fibroblast neonatal (HDFn). Methods : After treatment of HDFn with FLLW, MTT assay was performed to quantitatively determine cellular viability. The ERK and Akt pathways were analyzed in vitro by Western blot in a HDFn. HDFn proliferation after FLLW and minoxidil treatment in the absence or presence of PD98059, a MEK inhibitor, LY294002, and a PI3K inhibitor, was examined by Western blot or MTT assay. Results : FLLW increased cell proliferation in a dose-dependent manner and minoxidil used as positive control also induced cell proliferation in HDFn. FLLW increased the phosphorylation of ERK and Akt. In addition, minoxidil, too, induced the phosphorylation of ERK and Akt in HDFn. PD98059 and LY294002 significantly attenuated FLLW-inducible p-ERK and p-Akt expression and proliferation in cultured HDFn. Conclusions : Our results suggest that FLLW stimulates the growth of fibroblast cells through ERK and Akt pathways. Therefore, FLLW is a potential agent for the inducer of fibroblast growth.
The aim of this study was to develop a composite human skin equivalent for wound healing. Collagen type1 and acellular dermal matrix powder were utilized as the scaffold with dermal fibroblasts and keratinocytes for the development of a composite human skin equivalent. Fibroblast maintained the volume of composite skin equivalent and also induced keratinocytes to attach and proliferate on the surface of composite skin equivalent. The composite human skin equivalent had a structure and curvature similar to those of real skin. Balb-C nu/nu mice were used for the evaluation of full-thickness wound healing effect of the composite human skin equivalent. Graft of composite skin equivalent on full-thickness wound promoted re-epithelialization and granulation tissue formation at 9 days. Given the average wound-healing time (14 days), the wound in the developed composite skin equivalent healed quickly. The overall results indicated that this three-dimensional composite human skin equivalent can be used to effectively enhance wound healing.
It was assumed that the effect of estrogen on wound healing would be variable according to patient's gender and age since estrogen is a sex steroid. This study was designed to determine the variability of the effect of estrogen on proliferation of human dermal fibroblasts and collagen synthesis which are most important in wound healing considering patient's gender and age. Fibroblasts were isolated from the dermis of female patients in premenstrual, menstrual, or postmenopausal age group and that of male patients. The isolated fibroblasts were cultivated in the presence of estrogen($1.0{\mu}g/ml$). The cells were seeded at $5.0{\times}10^3cell/well$ in Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Ham's F-12 nutrient including 5% fetal bovine serum in 96-well plates. The cells were incubated for 3 days. For fibroblast proliferation MTT assay method was used. To measure the production of collagen, the collagen type I carboxy- terminal propeptide enzyme immunoassay was carried out. Estrogen stimulated the proliferation of fibroblasts in female patients, but not in male patients. The greatest cell proliferation and collagen synthesis was seen at women in menstrual and postmenopausal age. These results demonstrated that effects of estrogen on dermal fibroblast proliferation and collagen synthesis were variable with gender and age.
Ultraviolet (UV) A penetrates deeply into the skin and induces the generation of reactive oxygen species (ROS) causing damage to fibroblasts, which leads to aging of the skin. However, the body has developed an antioxidant defence system against the harmful effects of ROS. Enzymes such as superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) play critical roles on the removal of excess ROS in living organisms. In this study, the antioxidant activities of anthocyanins (cyanidin 3-galactoside and cyanidin 3-lathyroside) from Acanthopanax divaricatus var. albeofructus (ADA) fruits were investigated by xylenol orange, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), and antioxidant enzyme assay. As a result, generation of $H_2O_2$ and lipid peroxide induced by UVA-irradiation in human dermal fibroblast (HDF-N) cells was reduced by treatment of anthocyanins. Also, augmented enzyme (SOD and CAT) activities were observed in UVA-irradiated cells when treated with anthocyanin. In conclusion, the results obtained show that anthocyanins from ADA fruits are potential candidates for the protection of fibroblast against the damaging effects of UVA irradiation. Furthermore, anthocyanin may be a good candidate for antioxidant agent development.
Background: The efficacy of ginseng, the representative product of Korea, and its chemical effects have been well investigated. The ginsenoside RG3 has been reported to exhibit apoptotic, anticancer, and antidepressant-like effects. Methods: In this report, the putative effect of RG3 on several cellular function including cell survival, differentiation, development and aging process were evaluated by monitoring each specific marker. Also, mitochondrial morphology and function were investigated in ultraviolet (UV)-irradiated normal human dermal fibroblast cells. Results: RG3 treatment increased the expression of extracellular matrix proteins, growth-associated immediate-early genes, and cell proliferation genes in UV-irradiated normal human dermal fibroblast cells. And, RG3 also resulted in enhanced expression of antioxidant proteins such as nuclear factor erythroid 2-related factor-2 and heme oxygenase-1. In addition, RG3 affects the morphology of UV-induced mitochondria and plays a role in protecting mitochondrial dysfunction. Conclusioin: RG3 restores mitochondrial adenosine triphosphate (ATP) and membrane potential via its antioxidant effects in skin cells damaged by UV irradiation, leading to an increase in proteins linked with the extracellular matrix, cell proliferation, and antioxidant activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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