The phytochemical investigation of the crude methanolic extracts roots and stem bark of Anthonotha cladantha (Harms) J.Léonard led to the isolation and identification of twelve secondary metabolites: 2,3-dihydroxypropyl hexacosanoate (1), hederagenine (2), cycloeucalenol (3), 2α-hydroxylupeol (4), betulinic acid (5), lupeol (6), heptacosan-2-one (7), triacontanoic acid (8), stigmast-4-en-3-one (9), β-sitosterol (10), stigmasterol (11), and stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside (12). Their structures were elucidated with the help of their spectroscopic and physical data and by comparison with those reported in the literature. To the best of our knowledge, from all those compounds, 2,3-dihydroxypropyl hexacosanoate (1), hederagenine (2), cycloeucalenol (3), 2α-hydroxylupeol (4), and betulinic acid (5) are being reported for the first time from this genus. In addition, the acetylation of compound 1 afforded a new derivative 3-(hexacosanoyloxy)propane-1,2-diyl diacetate (1a). Compound 1 possessed a moderate α-glucosidase inhibitory activity with an IC50 value of 39.2 ± 0.22 μM; it neither showed antioxidant activity nor inhibition against the enzyme urease. Compound 1a exhibited weak antioxidant activity in the DPPH assay with an IC50 value of 80.3 ± 0.83 μM but was inactive against α-glucosidase and urease. Furthermore, both compounds 1 and 1a were inactive against seven pathogenic bacterial strains.
우리 인체에는 의학적으로 유용한 기능을 가진 세균들이 정상적으로 존재하며 구강내에도 독특한 기능을 나타내는 세균들이 상재한다. 본 연구에서는 치아우식증이 없는 소아의 타액에서 분리한 유산균 2주가 Streptococcus mutans에 의한 인공치태 형성과 혐기성 세균에 의한 휘발성 유황화합물 생성을 억제하는 것을 확인하고, API 50 CHL medium kit를 이용한 생화학적 검사와 16S rDNA sequencing으로 동정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 분리균주는 2주 모두 그람양성 간균으로 과산화수소를 생성하였다. 2. 인공치태의 무게는 Streptococcus mutans의 단독 배양시 $124.4{\pm}30.4mg$이었으나, 분리균주와 병합 배양시에는 각각 $5.2{\pm}2.0mg,\;10.6{\pm}6.6mg$으로 현저하게 감소하였다(p<0.05). 3. Streptococcus mutans의 생균수는 단독 배양시 ml당 $3.4{\times}10^9$이었으나, 분리균주와 병합 배양시에는 각각 ml당 $4.6{\times}10^8$과 $2.4{\times}10^8$으로 감소하였다. 4. Fusobacterium nucleatum을 30분간 진탕한 후 측정한 상청액의 흡광도는 1.286이었으나, Fusobacterium nucleatum과 분리균주를 병합으로 30분간 진탕한 후 측정한 상청액의 흡광도는 각각 0.628과 0.497로 감소하였으며, 상호 결합 정도는 29.4%와 57.8%이었다. 5. Fusobacterium nucleatum의 단독 배양시 cysteine과 $FeSO_4$를 첨가한 배지를 가한 후 측정한 침전물의 배지 흡광도는 1.794이었으나, 분리균주와 병합 배양시 측정한 침전물의 배지 흡광도는 각각 1.144와 0.915로 감소하였으며, Porphyromonas gingivalis 단독 배양시 침전물의 배지 흡광도는 1.932이었으나 분리균주와 병합 배양시에는 침전물의 배지 흡광도가 각각 1.170과 1.266으로 감소하였다. 6. 분리균주를 API 50 CHL medium kit로 탄수화물 발효검사를 시행한 결과, 분리균주 1주는 Lactobacillus salivarius로, 다른 분리균주는 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis로 동정되었다. 7 분리균주를 16S rDNA partial sequencing으로 동정한 결과, 2주 모두 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius와 유전자 유사치가 99.60%, 99.73%를 보여 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius로 동정되었다. 이상의 결과를 종합하면 치아우식증이 없는 소아의 타액에서 분리된 유산균 중 과산화수소를 분비하여 인공치태 형성과 휘발성 유황화합물 생성을 억제하는 분리균주는 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius로 동정되었다.
In the present study, results of the identification of Gram-positive bacilli (GPB) were analyzed by using the MALDI-TOF MS technique to score each 2-year blood culture at a university hospital. In addition, 16S rRNA sequence analyses and MALDI-TOF MS results are compared to targeting strains that had been isolated two or more times within the same patient, to evaluate the usefulness of MALDI-TOF MS in GPB identification. According to the cut-off (${\geq}1.7$) criteria, there were 410 (57.5%) reliable strains and 303 (42.5%) non-identified strains among the GPB identification results of 713 strains, using a microflex MALDI Biotyper (Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Germany). The isolation appeared most often in the following order: Corynebacterium striatum, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Paenibacillus urinalis, and Listeria monocytogenes. Nearly three-fourths, 66 out of 89 (74.2%) of the strains for Corynebacterium striatum; 44 out of 60 (73.3%) strains for Bacillus cereus; and all (25 out of 25, 100%) Listeria monocytogenes strains were identified by their high scores of 2.0 or higher. Most (293 strains out of 303) non-identified strains were strains isolated only once and not significant as infectious bacilli. A total of 43 out of 50 (86.0%) strains matched and were able to be identified based on the 16 rRNA sequencing comparison results of strains that were isolated twice or more within the same patient and significant as infection bacilli. Non-matching among 5 out of 7 strains was not identified, even with MALDI-TOF MS. In conclusion, GPB can be identified in blood cultures using MALDI-TOF MS. This can be done accurately with ease, rapidly, and at a low cost. It is also thought to be helpful in GPB diagnosis and treatment.
As a material of metal-ceramic prosthesis, nickel as a form of Ni-Cr alloy has been used for many dental prostheses in many cases. However, several problems in use of the alloy have been revealed (ex : tissue stimulation, skin allergy, hypersensitivity, cytotoxicity and carcinogenecity). Little is known about nickel with respect to the relationship between Ni-prosthesis and gaining of Ni-resistance in oral microorganisms. The present study was undertaken to check wheather use of Ni-prosthesis leads to occurrence of Ni-resistant microorganisms. So this study may suggest the possible relationships between the oral microorganisms and nickel-resistance in oral environment. Bacteria were isolated from the gingival crevicular fluid on the pateints wearing Ni-Cr prosthesis. The isolated bacteria were tested for their Ni-resistance in nickel containing media at different concentration from 3mM to 110mM. E. coli HB101 was used as control. The Ni-resistant bacteria were isolated and biochemically identified. The Ni-resistant bacteria were tested several bio-chemical, molecular-biological tests. Performed tests were ; measuring the growth curve, antibiotic test, growth ability test in liquid media, isolation of the chromosome and plasmid, digestion of DNA by restriction enzyme, electrophoresis of chromosome and plasmid DNA, identification of Ni-resistant genes by the DNA hybridization. The results were as follows: 1) The bacteria isolated from gingival crevicular fluid on the patients wearing Ni-Cr alloy pros-thesis showed nickel-resistance. 2) The isolated microorganisms grew at nickel containing media of high concentrations (60mM-110mM). 3) Based on the biochemical tests, the isolated microorganisms were identified as Enterococcus faecalis(13 cases), Klebsiella pneumoniae(1 case) and Enterobacter gergeviae(1 case). 4) Enterococcus faecalis expressed not only nickel resistance but also the multi-drug resistance to several antibiotics ; chloramphenicol, kanamicin, streptomycin, lincomycin, clindamycin. However, all strain showed the sensitivity against the tetracycline. 5) DNA hybridization result suggest that there is no homology between the previousely known gene of nickel resistance in Klebsiella pneumoniae and chromosomal DNA of Enterococcus faecalis.
Aspergillus nidulans는 빛이 없는 조건에서는 유성분화가 주로 일어나고 빛이 있는 조건에서는 유성분화가 억제되고 대신 무성분화가 유도된다. 빛에 의해서 유성분화가 억제되는 것은 빛에 반응하여 유성 또는 무성분화를 조절하는 유전자가 있다는 것을 시사한다. 따라서 빛에 의해서 조절되는 유전자를 연구하기 위하여 광 조건하에서 유성분화를 하는 silA98 돌연변이를 분리하였으며, 이를 보완하는 유전자를 분리 및 분석하고자 A. nidulans의 AMA-NotI genomic library로부터 silA98 돌연변이를 상보하는 유전자 silA를 분리하였다. silA 유전자의 예상 ORF는 2,388 bp의 염기로 구성되어지고 795개의 아미노산을 암호화하고 있었다. 이 유전자는 Saccharomyces cerevisiae의 ARO80 유전자와 상동성을 보이며 SilA 단백질의 N 말단에는 약 51.9%의 상동성을 가지는 ${Zn_2}{Cys_6}$ motif를 지니고 있었다. silA 유전자 결손돌연변이주는 광 존재 하에서뿐만 아니라 고농도의 sorbitol에서도 유성분화가 유도되었다. 이는 silA 유전자가 빛과 고삼투 조건에서 유성분화를 억제하는 조절과정에 관여하고 있음을 의미한다. silA 유전자를 niiA promoter로 과다 발현시켰을 때의 형질은 야생형과 큰 차이를 보이지 않았다.
Tooth mobility may be the decisive factor that determines whether dental treatment of any kind is undertaken. Although tooth mobility in isolation says little in itself, the finding of increased tooth mobility is of both diagnostic and prognostic importance. Only the detection of an increase or decrease in mobility makes an evaluation possible. Thus prior to treatment, we must understand the pathologic process causing the observed the tooth mobility and decide whether the pattern and degree of observed tooth mobility is reversible or irreversible. And then it must be decided whether retention and treatment or extraction and replacement. The purpose of this study was to compare tooth mobility at different time period during root planing and flap operation and to relate changes in mobility to each treatment method. Twenty-one patients (287 teeth) with chronic adult periodontitis were treated with root planing(control group) and flap operation(experimental group), and each group was divided 3 subgroups based upon initial probing pocket depth (1-3mm, 4-6mm, 7mm and more). Tooth mobility was measured with $Periotest^{(R)}$ at the day of operation, 4 days, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, 8 weeks, 12 weeks after each treatment. Tooth mobility, attachment loss, radiographic bone loss, and bleeding on probing were measured at the day of operation, 4 weeks, 8 weeks and 12 weeks after treatment. 1. In group initial probing depth was 1-3mm, tooth mobility had no significant difference after root planing and flap operation. 2 . In group initial probing depth was 4-6mm, 7mm and more, tooth mobility had decreased in 12 weeks after root planing(p<0.01). And the mobility had increased after flap operation(p<0.01) and was at peak in 1 week, and decreased at initial level in 4 weeks, below the initial level in 12 weeks(p<0.01). 3. In 1 week, significant difference in tooth mobility between control and experimental group was found(p<0.01) but, in 12 weeks no difference between two groups was found. 4. Change of immediate tooth mobility after treatment was more larger in deep pocket than in shallow one. In group with the same probing pocket depth, the change of tooth mobility in molar group was greater than that of premolar group. 5. Tooth mobility before treatment was more strongly correlated with radiographic bone loss (r=0.5325) than probing depth, attachment loss and bleeding on probing, in 12 weeks after treatment, was more strongly correlated with attachment loss($r^2$=0.4761) than probing depth and bleeding on probing. Evaluation of the treatment effect and the prognosis after root planing and flap operation were meaningful on tooth initial probing depth 4mm and more. After flap operation, evaluation of the prognosis should be performed at least in 4 weeks and in 12 weeks after treatment, no difference in tooth mobility between two groups was observed. Radiographic bone loss and attachment loss were good clinical indicators to evaluate tooth mobility.
화학유연재와 화학호제를 생산하는 공장의 폐수와 인근 토양으로부터 화학유연제, organopolsiloxane(OPS)을 분해하는 33종의 세균을 분리했다. 이들 중 활성이 뛰어난 5균주에 대하여 미생물학적 특성과 화학유연제의 제거효율을 검토했으며, 5균주 중 화학유연제의 제거효율이 가장 양호한 W3712균주의 동정을 실시했다. 선별된 분리균주 5균주는 $37^{\circ}C$에서 5일간 진탕배양하므로서 2,500mg/l 화학유연제를 65.2~67.9% 제거시켰다. 분리균주인 W3712, S3712와 S3723균주의 생육최적 pH는 7.0~7.5였으며, 그리고 W3712균주의 생육최적온도는 $37^{\circ}C$였으나, 다른 4균주는 $30^{\circ}C$에서 생육이 가장 양호하다. 분리균주 5균주는 배양초기 pH7.0에서 화학유연제를 가장 잘 제거했으며 5일간의 매양으로 62.0-65.6%의 제거효율을 나타냈다. 그리고 W2811균주, W2823균주, S371균주는 $30^{\circ}C$에서 화학유연제를 가장 잘 제거시켰으며, W3712균주는 $37^{\circ}C$에서 가장잘 제거시켰으며 제거효율은 66.5%였다. 특히,이들 균즈에 의한 화학유연제의 제거에 있어서 통기량은 별다른 영향을 미치지 않았다. 화학유연제의 제거능이 우수한 W3712균주를 Corynebacterium pseudodiphtheriticum W3712로 동정하고 명명하였다.
As a material of metal-ceramic prosthesis, nickel as a form of Ni-Cr alloy has been used for many dental prostheses in many cases. However, several problems in use of the alloy have been revealed (ex ; tissue stimulation, skin allergy, hypersensitivity cytotoxicity and carcinogenecity). Little is known about nickel with respect to the relationship between Ni-prosthesis and gaining of Niresistance in oral microorganisms. The present study was undertaken to check whether use of Ni-prosthesis leads to occurrence of Ni-resistant microorganisms. So this study may suggest the possible relationships between the oral microorganisms and nickel-resistance in oral environment. Bacteria were isolated from the gingival crevicular fluid on the patients wearing Ni-Cr prosthesis. The isolated bacteria were tested fir their Ni-resistance in nickel containing media at different concentration from 3mM to 110mM. E. coli HB101 was used as control. The Ni-resistant bacteria were isolated and biochemically identified. The Ni-resistant bacteria were tested several biochemical, molecular-biological tests. Performed tests were : measuring the growth curve, antibiotic test, growth ability test in liquid media, isolation of the chromosome and plasmid, digestion of DNA by restriction enzyme, electrophoresis of chromosome and plasmid DNA, identification of Ni-resistant genes by the DNA hybridization. The results were as follows 1) The bacteria isolated from gingival crevicular fluid on the patients wearing Ni-Cr alloy prosthesis showed nickel-resistance. 2) The isolated microorganisms grew at nickel containing media of high concentrations (60mM-110mM). 3) Based on the biochemical tests, the isolated microorganisms were identified as Enterococcus faecalis(13 cases), Klebsiella pneumoniae(1 case) and Enterobacter gergoviae(1 case). 4) Enterococcus faecalis expressed not only nickel resistance but also the multi-drug resistance to several antibiotics ; chloramphenicol, kanamicin, streptomycin, lincomycin, clindamycin, However, all strain showed the sensitivity against the tetracycline. 5) DNA hybridization result suggests that there is no homology between the previously known gene of nickel resistance in Klebsiella pneumoniae and chromosomal DNA of Enterococcus faecalis.
치아우식증 및 치주질환에 이환 여부와 치근단 병소의 존재 유무에 따라 급성 치수염 또는 급성 치근단 농양이라고 진단된 17개 치아의 치관부 치수를 제거하고, 치근에 존재하는 괴사된 치수 및 농양부위의 샘플을 채취하여, 혐기성 상태에서 세균을 배양하고, 이들을 16S rDNA 클로닝 및 핵산염기서열결정법으로 종 수준에서 동정하였다. 그 결과 17개의 치근관감염 병소에서 모두 71개의 세균 군락이 자라났으며, 그 중 계대 배양을 통해서 적응하여 자라난 것이 56 균주였다. 치아우식증에 의한 치근관 감염 병소와 치아우식증이 아닌 다른 원인에 의한 치근관 감염 병소에서 검출되는 세균은 서로 다른 양상을 보였다. 즉, 치아우식증에 의한 치아의 치근관 감염 병소에서 연쇄상구균들이 $72.7\%$(8/11)로 가장 많은 빈도로 검출되었다. 반면에 치아우식증이 없는 치아의 치근관 감염 병소에서는 Actinomyces속의 균주들이 $66.7\%$로 가장 높은 빈도로 검출되었다. 치근단 병소가 있는 경우의 치근관 감염 병소에는 대체로 혐기성 세균인 Clostridia 아문, Bacteroides 문, Fusobacteria 문의 균주들이 검출되었지만, 치근단 병소가 없는 치아에서는 검출되지 않았다 반면에 치근단 병소가 없는 치근관 병소에서는 연쇄상구균($60\%$)과 Actinomyces속($50\%$)의 균주들이 높은 빈도로 검출되었다. 본 연구에서는 아직까지 종 수준에서 동정되지 않은 2 균주(ChDC B639 및 ChDC B631)의 Actinomyces속에 속하는 균주가 분리되었다. 이상의 결과를 종합할 때, 세균배양법에 의한 치수 및 치근단 감염 병소에서는 다양한 세균이 검출되었으며, 이는 치근관 감염이 여러 세균에 의해 발병 및 진행된다는 기존의 연구 결과와 동일함을 알 수 있었다. 또한 본 연구 결과 분리 동정된 균주들은 치근관질환과 이와 관련된 세균간의 역학조사에 중요한 자원으로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
중간엽 줄기 세포는 다분화능을 가지고 있으며 골수, 지방, 태반, 치아속질, 윤활막, 편도 및 가슴샘 등 인체의 다양한 조직에서 분리된다. 중간엽 줄기세포는 조직의 항상성을 조절하며 다분화능, 분리와 조작의 용이함, 암세포로의 화학주성 및 면역 반응 조절 등의 특징을 가지고 있어서 재생 의학, 암 치료 및 식대주 질환(GVHD) 등에 이용할 수 있는 세포치료제로 주목 받고 있다. 하지만 주위 세포와 조직을 지지하고 조절하는 특징과 관련하여 중간엽 줄기세포가 혈관 생성을 촉진하고 성장인자를 분비하며 암세포를 공격하는 면역 반응을 억제함으로써 암의 진행을 촉진시킨다는 사실 또한 보고 되고 있다. 이러한 사실들로 인해 중간엽 줄기세포의 임상 적용이 제한되고 있다. 본 연구에서는 어떠한 기전을 통해서 중간엽 줄기세포가 암의 진행을 촉진하는 지지 세포로 기능하는지를 밝히기 위해서 인체 지방 조직에서 유래한 중간엽 줄기세포를 두 개의 암세포주(H460, U87MG)와 각각 공동 배양하고 microarray를 이용해서 암세포와 공동 배양되지 않은 중간엽 줄기세포와 유전자의 발현을 비교하였다. 두 암세포주와 공동배양에서 공통적으로 2배 이상 차이 나는 유전자를 DAVID (Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery)와 PANTHER (Protein ANalysis THrough Evolutionary Relationships)를 이용해 분석하였으며 생물학적 과정, 분자적 기능, 세포의 구성 성분, 단백질의 종류, 질병과 인체 조직 그리고 신호전달에 관련된 정보를 획득하였다. 이를 통해서 암세포는 중간엽 줄기세의 분화, 증식, 에너지 대사, 세포의 구조 및 분비기능을 조절하여 유전자의 발현 양상을 암 연관 섬유모세포(cancer associated fibroblast)와 유사한 세포로 변형 시킨다는 사실을 알 수 있었다. 본 연구의 결과는 중간엽 줄기세포를 이용한 임상 치료제의 효과와 안정성을 개선하는데 응용될 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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