본 연구는 Saccharomyces cerevisiae를 이용하여 발효한 참당귀 분말을 수용성 용매에 추출하여 이화학적 특성 및 생리활성을 비교 검토하였다. 당도 및 pH를 확인한 결과, NF군 $1^{\circ}Brix$에 비해 F/3군 $0.9^{\circ}Brix$로 발효가 됨에 따라 당도가 감소하는 경향을 보였다. 한편, F/3군의 pH는 NF군 및 F/0군에 비해서 높은 수치를 나타냈다. Thin-layer chromatography 실험결과, F/3군이 NF군에 비해 대부분 저분자의 당 형태로 분해된 것을 확인하였다. 총 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량은 참당귀 분말 추출물에 비해 발효 참당귀 분말 추출물에서 전반적으로 함량이 증가하였다. 미네랄 중 K 및 Ca 함량은 F/3군, F/0군 및 NF군 순으로 증가하는 경향을 보였다. Decursin 및 decursinol angelate 함량은 NF군보다 F/3군에서 더 높은 함량을 나타냈다. 참당귀 및 발효 참당귀 수용성 추출물의 항산화 활성은 NF군 41.89%, F/0군 39.51%, F/3군에서 60.26%으로 활성이 증가하는 것을 확인하였다. 미백 및 항염증 효능 실험결과, 참당귀 분말 추출물에 비해 발효 참당귀 분말 추출물에서 효능이 증가하는 경향을 나타내었다. 따라서 한방 생약재 중 참당귀를 유용 미생물로 발효시켜 사용함으로써 항산화능, 생리활성물질, 미백효능 및 항염증 효과에서 긍정적인 결과를 나타내어 향후 화장품 개발을 위한 소재로써 기대할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 가미수미원(백하수오 10 g,; 당귀 6 g; 구기자 8 g; 화피 6 g; 선태 3 g; 홍화 2 g)에 방기(Sinomenium acutum R.) 4 g의 첨가 여부에 따라 각각 열수추출물은 GS±SC(DW), 80% 에탄올 추출물은 GS±SC(EtOH)로 표기 하였다. 각 추출물은 항산화를 측정하기 위해 다음과 같은 연구를 수행하였다. HPLC를 통한 방기 지표물질 함량측정, 중금속 검사 기준 측정, ABTS/DPPH 라디칼 소거능 측정, SOD 유사 활성능 측정, ROS 및 NO 생성량을 측정하였다. 방기 지표물질 중 sinomenine의 함량은 열수 추출물에서, decursin은 에탄올 추출물에서 더 높게 확인되었다. 중금속 측정 결과 기준치 적합으로 확인되었다. ABTS/DPPD 라디칼 소거능을 측정한 결과 GS+SC(EtOH)의 소거능이 가장 높게 나왔으며, 상대적으로 열수보다 에탄올 추출이 라디칼 소거율이 높게 확인되었다. 그러나 SOD의 경우 열수 추출에서 상대적으로 유사 활성능이 높게 확인되었다. ROS 생성의 경우 열수 추출물이 에탄올 추출에 비해 유의하게 감소시켰으며, NO의 생성은 에탄올 추출물이 상대적으로 더 유의하게 감소시키는 것을 확인하였다. 본 연구 결과에서 GS+SC(EtOH)이 라디컬 소거능 및 NO 감소를 높게 나타낸 것으로 확인되어 산화적스트레스 후, 생성된 활성산소의 제거에 좀 더 영향을 미치는 것으로 판단된다. 향 후 지속적인 효능 심화 연구를 통해 조성물을 활용한 화장품 및 기능성 원료의 소재로서의 가능성이 높을 것으로 사료된다.
본 연구에서는 참당귀(Angelica gigas Nakai)의 핵심 유효 성분인 decursin과 decursinol angelate를 높은 수율로 추출한 초임계 이산화탄소 선택 추출물의 항염증 효능을 에탄올 추출물과 비교하여 측정하였다. 항염증 효능을 측정하기 위해 염증 매개 인자인 nitric oxide(NO), 염증성 사이토카인인 interleukin(IL)-6, IL-8 생성량을 측정하였다. NO 생성량은 lipopolysaccharide(LPS)로 염증 반응을 유도한 Raw 264.7 세포를 대상으로 Griess assay를 통해 측정하였고, IL-6 및 IL-8 생성량은 tumor necrosis factor(TNF)-α로 염증 반응을 유도한 human keratinocyte cell line(HaCaT) 세포를 대상으로 enzyme-linked immunoadsorbent assay(ELISA)를 통해 측정하였다. NO 생성량은 초임계 이산화탄소 추출물이 에탄올 추출물에 비해 뛰어나게 억제하였다. IL-6 및 IL-8 생성량 또한 에탄올 추출물은 오히려 증가시키는 반면, 초임계 이산화탄소 추출물은 6.25 ㎍/mL의 농도에서 통계적으로 유의하게 억제하였다(P<0.01). 우리는 이러한 결과를 통해 참당귀 초임계 이산화탄소 선택 추출물이 아토피 피부염을 완화시키는 항염증 코스메슈티컬 소재로써 활용 가능함을 확인하였다.
본 연구에서는 데커신 및 데커시놀 안젤레이트를 이용한 최적의 로션 제조 공정을 확인하기 위하여 연구를 진행하였다. 초기 로션 제형은 3개월 동안 점도(5,208±112 cPs), 함량(99.71±1.01%) 및 pH(5.62)을 유지하는 것을 확인하였다. 제조 공정D 혼합 4의 최적 제조 공정 확인은 22+3 완전 배치 요인법을 이용하였으며, 독립변수로 혼합 온도(40-80℃)와 혼합 시간(10-30 min)으로 종속변수로써 중요품질특성인 함량, pH, 질량편차를 확인하였다. 함량 및 질량편차는 도출된 회귀방적식의 결정계수는 약 0.9였고 p-value값은 0.05보다 작아 모델적합성을 확인하였다. 로션 제조를 위한 최적의 온도조건과 혼합 시간은 61.93℃와 15.85분으로 확인되었다. 혼합4 공정에 있어 혼합 온도(60℃)와 혼합 시간(15 min)에서의 함량은 100.69%, pH는 5.57, 질량편차는 98.07%으로 예측되었고, 실제 검증에서는 각각 100.29±0.98%, 5.57±0.02, 98.27±0.89%으로 예측된 값에 대하여 유사한 결과까지 확인 할 수 있었다.
식물세포의 장기보존방법 연구를 위하여 참당귀(Angelica gigas Nakai) 현탁세포를 이용하여 동결보존을 수행하였다. 최적의 예비성장배지로는 0.7 M sucrose를 첨가하여 6일간 배양한 것이 가장 좋았으며, 동결보호제로는 1 M sucrose, 1 M glycerol, 1 M DMSO를 혼합하여 사용하였을 때 가장 좋은 결과를 나타내었다. 동결 시에는 처음 8시간 동안 deep freezer에서 천천히 냉동을 한 후 액체질소에 넣는 것이 가장 좋은 것으로 나타났다. 또한 여러 가지 삼투압 증진제를 사용한 실험을 수행한 결과 sucrose가 가장 좋은 결과를 나타내었는데 이것은 sucrose가 삼투압 증진제 역할뿐만 아니라 cell membrane을 보호하기 때문으로 사료된다.
Gami-Honghwa-Tang (KH-19), a herbal prescription for reducing the side effect of radiotherapy, is composed of eight crude herbs such as Rehmanniae Radix Preparata, Angelicae Gigantis Radix, Cnidii Rhizoma, Paeoniae Radix, Corni Fructus, Moutan Cortex Radicis, Lycii Fructus, Carthami Flos, and Glycyrrhizae Radix. In this study, marker substances in KH-19 were analyzed by high performance liquid chromatography-diode array detector (HPLC-DAD) and safety evaluation of standardized KH-19 was evaluated by good laboratory practices (GLP) guideline of Korea Food and Drug Administration. HPLC-DAD was employed to determine the quantities and the qualities of several marker substances such as 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde (5-HMF), paeonol, loganin, paeoniflorin, glycyrrhizin, and decursin in the KH-19. In acute oral toxicity study on rat, transient inhibition of body weight was shown, but change in general symptom was not detected. No dead animal was observed up to 5,000 mg/kg in both male and female animals. In acute oral toxicity study on Beagle dog, transient vomiting, diarrhea, anorexia, and body weight reduction were observed, However, no dead animal was observed up to 2,000 mg/kg in both male and female animals.
Angelica gigas Nakai 뿌리배양을 통한 decursinol angelate생산을 증대시키기 위하여 여러 가지 elicitor들을 처리하여 생산 증진을 도모하였다. 가장 효과적인 elicitor로는 hydrogen peroxide와 $CM-\;{\beta}\;-chitin$이었으며, 이때의 g당 생산되는 decursinol angelate 양은 각각 대조구에 비해 2.12, 1.62배 증대된 값이다.
During the screening for inhibitors of nitric oxide production in LPS-activated macrophage, RAW 264.7 cells, two coumarins were isolated from chloroform extract of the root of Polygonum cuspidatum. They were identified as decursin (1) and decursinol angelate (2) on the basis of spectroscopic methods. The $IC_{50}$ values of these compounds on NO production were $0.76\;{\mu}M$ (1) and $2.6\;{\mu}M$ (2), respectively. However, the iNOS activity was not inhibited by treatment with these compounds. Their inhibitory effect on NO production seems to result from the suppression of iNOS induction through the suppression of NF-kB activity.
The Angelica root has been used as a medicinal herb in many Asian countries including Korea, China, and Japan. Angelica gigas, A. sinensis, and A. acutiloba have been considered as Angelicae radix in Korean, Chinese, and Japanese Pharmacopoeia, respectively. Since the origins of Angelicae radix differ from country to country, there is a need to develop an efficient analytical method to identify the origin of the Angelica root. In order to obtain chemical fingerprints, three different Angelicae Radices were analyzed by direct analysis in real time mass spectrometry (DART-MS). Significantly different DART-MS spectra were observed from three different species of Angelicae Radix. Strong peaks of decursin or decusinol angelate, and its dimer were exclusively found from A. gigas. Ligustilide and linoleic acid were detected as the major component from A. acutiloba. The strongest ligustilide peak was observed from A. sinensis. DART-MS fingerprinting is a promising method for the rapid identification and/or quality control of Angelicae Radix.
The cell culture of Angelica gigas Nakai producing decursin derivatives and immunostimulating polysaccharides was preserved in liquid nitrogen after pre-freezing in a deep freezer at -70$^{\circ}C$ for 480 min. The effects of the cryoprotectant and pretreatment before cooling were investigated to obtain the optimal procedure for cyropreservation. When compared to mannitol, sorbitol, or NaCl with a similar osmotic pressure, 0.7 M sucrose was found to be the best osmoticum for the cryopreservation of A. gigas cells. In the pre-culture medium, the cells in the exponential growth phase showed phase showed the best post-freezing survival after cryopreservation. A mixture of sucrose, glycerol, and DMSO was found to be an effective cryoprotectant and a higher concentration of the cryoprotectant provided better cell viability. When compared with the vitrification, the optimum cryopreservation method proposed in this study would seem to be more effective for the long-term storage of suspension cells. The highest relative cell viability established with the procedure was 89%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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